免疫細胞化學EMA、CEA、CD68、Vimentin組合在胸腹水細胞塊病理診斷中的應用研究

陳建華，丁博，陳中，彭曉

(萍鄉市湘東區人民醫院病理科，江西 萍 鄉337016)

胸腹水細胞病理檢查是細胞病理學的重要組成部分，由于取組織活檢困難，臨床希望通過細胞學確診的愿望十分強烈；但細胞學在確診惡性腫瘤方面有其固有的局限性，即難以看到腫瘤的侵襲性的生物學行為；而侵襲性是惡性腫瘤區別于良性腫瘤的根本特點，也是診斷的關鍵所在；因此，細胞學常作為惡性腫瘤的初篩手段，確診主要依靠組織學。在細胞形態方面，胸腹水的異型間皮細胞、異型組織細胞、退變細胞很容易與腫瘤細胞混淆，只憑細胞涂片進行鑒別十分困難。脫落細胞在胸腹水中培養后形態發生改變，也給診斷增加了難度?？梢哉f，胸腹水細胞學是細胞病理的難點之一。我科通過多年的探索研究，綜合運用細胞涂片、細胞塊切片、免疫細胞化學、臨床與影像資料進行胸腹水細胞病理診斷，提高了診斷準確性與確診率。

1 材料與方法

1.1 研究對象 收集湘東區醫院呼吸內科與消化內科2012年4月至2014年12月所有胸腹水病例共176例，萍礦湘雅醫院13例，共189例；其中惡性標本31例，診斷不明病例1例，陰性標本157例。

1.2 設備與材料 血漿凝固法細胞塊技術采用上海太陽生物技術有限公司TT試劑，H-E染色采用貝索試劑，免疫細胞化學采用福州邁新生物技術開發有限公司試劑，石蠟切片采用萊卡RM2235切片機。

1.3 方法 取3只試管各加入胸腹水10ml，普通低速離心機2000r/min離心5min，棄去上清液，取1只試管的沉渣涂片做瑞氏染色，1只試管沉渣涂片做H-E染色，1只試管沉渣采用血漿凝固法制成細胞塊，然后制成石蠟塊，切片做H-E染色，做免疫細胞化學 EMA、CEA、CD68、VIMENTIN 染色；細胞量較少的標本，可采用1只試管多次取樣離心，沉渣累加的方法增加細胞量[1]。結合胸腹水物理性狀(是否血性)，直接涂片瑞氏染色，直接涂片H-E染色，細胞塊石蠟切片H-E染色，細胞塊細胞化學EMA、CEA、CD68、VIMENTIN 染色，臨床與影像資料，進行綜合分析診斷。

2 結果

免疫細胞化學 EMA、CEA、CD68、VIMENTIN組合對鑒別胸腹水細胞來源有很大幫助，尤其是鑒別是否腺上皮來源幫助最大。所有30例腺癌標本的癌細胞有29例EMA陽性表達，1例弱陽性。有20例腺癌標本癌細胞CEA陽性表達，1例弱陽性，9例陰性。30例腺癌標本背景中的組織細胞、間皮細胞CD68、VIMENTIN陽性或弱陽性表達，CEA沒有陽性表達，2例表達弱陽性，EMA9例表達散在陽性，但與腺癌細胞團的明顯陽性表達有較大區別。157例陰性病例的背景細胞的免疫細胞化學表達情況也做了統計；具體見表1、表2、表3。所有30例腺癌標本均有細胞團和立體結構，細胞塊H-E染色可見腺腔或腺泡結構，細胞有不同程度的異型性。

表1 30例腺癌標本腺癌細胞EMA、CEA、CD68、Vimentin表達情況

表2 30例腺癌標本背景細胞(組織細胞、間皮細胞等)EMA、CEA、CD68、Vimentin 表達情況

表3 157例陰性標本背景細胞(組織細胞、間皮細胞等)EMA、CEA、CD68、Vimentin表達情況

3 討論

胸腹水惡性細胞80%以上為腺癌[2]，我院的統計為93.8%。腺癌細胞直接涂片的鏡下形態與異形或退變的間皮細胞不易區分[3]，而異形與退變的間皮細胞在胸腹水標本中很常見，所以兩者的鑒別非常重要。另外，異形的組織細胞也容易與腺癌細胞混淆，兩者的鑒別也很重要。在傳統直接涂片分析的基礎上，尋找新的診斷技術很有必要。

免疫細胞化學指標主要用于細胞來源的鑒別，EMA、CEA主要表達于腺癌細胞，CD68主要表達于組織細胞，VIMENTIN主要表達于間皮細胞。

EMA對腺癌的鑒別診斷幫助很大，我們所見到的30例腺癌細胞中，29例呈現腺癌細胞團的陽性表達，與背景細胞形成明顯對照，1例為弱陽性；CEA在腺癌細胞的陽性表達率為63.3%，有6.7%的病例弱陽性表達，在間皮細胞與組織細胞沒有陽性表達，因此對腺癌確診很有價值；CD68在組織細胞表達陽性，在腺癌細胞上沒有陽性表達，3.3%的病例表達弱陽性；VIMENTIN在間皮細胞表達陽性，在腺癌細胞上沒有陽性表達，6.7%的病例表達弱陽性。綜合 EMA、CEA、CD68、VIMENTIN 四項指標與鏡下構形基本可以將腺癌細胞與間皮細胞、組織細胞區分出來。

在觀察分析免疫細胞化學指標表達時，要將腫瘤細胞與背景細胞分開進行分析，不可將背景細胞的表達誤認為腫瘤細胞的表達。背景細胞一般包括間皮細胞、組織細胞、中性粒細胞、淋巴細胞、漿細胞等。

腺上皮細胞的良惡性可以結合腺管與細胞的異型程度，脫落細胞團數量，腺性立體結構等進行鑒別。下列指標高度提示腺癌：具有細胞內黏液的異型細胞團，核仁明顯的異型細胞團，EMA強陽性的異型細胞團，CEA陽性的異型細胞團。細胞塊切片可見腺腔或腺泡結構也提示腺癌，但應與間皮增生、間皮瘤的假腺樣結構區別。間皮細胞在胸水中常出現印戒細胞樣形態，不要誤診為印戒細胞癌。

細胞團形態推論原有組織結構[4]，血性胸腹水，壞死背景[5]，臨床表現，影像學資料均有助于腫瘤的良惡性鑒別。事實上，胸腹水中95%以上的腺上皮細胞為惡性，良性的腺瘤與乳頭狀增生不易形成胸腹水；在胸水中良性腺上皮更為罕見。在腹水、腹腔沖洗液中見到良性腺上皮的機會比胸水多一些。據熊閩春等報道,胸水染色體與腺苷脫氨酶檢驗對良惡性積液鑒別有一定診斷價值 ?！栋⒖寺饪撇±韺W》認為CEA、LEUM1、B72.3間皮陰性，腺癌陽性，可互為排除[7]；鈣網膜蛋白Calretinin被認為是間皮細胞的特異性較好的標記物。但根據我科的實踐，鈣網膜蛋白與LEUM1在鑒別間皮與腺癌上并不好用。武忠弼、楊光華主編的《中華外科病理學》對間皮標記物的認識與《阿克曼外科病理學》有很大程度的相同[8]。標記物Napsin-A是很好的肺腺癌及其他惡性腫瘤的標記物[9-13]，我們進一步的工作準備應用。

間皮細胞的良惡性鑒別有時非常困難，惡性間皮瘤的確診大多需要結合臨床資料、影像資料、組織病檢綜合診斷。胸腹水中見大量桑椹樣球狀細胞團高度提示惡性間皮瘤。王永才教授對胸腹水形態學所作的研究值得借鑒[14]。

陳杰教授主編的 《臨床病理科診斷常規》認為，電鏡在間皮瘤與轉移癌的鑒別診斷中起著至關重要的作用，主要是間皮瘤細胞頂部表面的微絨毛較腺癌更細長[15]。

除最為常見的腺癌以外，胸腹水中的其它惡性腫瘤種類很多，包括小細胞癌、淋巴瘤、鱗癌、間皮瘤等，其細胞形態與免疫細胞化學表達各不相同，我們將在以后的工作中進行深入研究。

[1]陳建華.血漿凝固法胸腹水細胞塊技術的臨床應用[J].實驗與檢驗醫學,2012,30(4):412.

[2]熊立凡.臨床檢驗基礎[M].第3版.北京:人民衛生出版社,1989:325.

[3]劉復生,馬正中.中國腫瘤病理學分類[M].北京：科學技術文獻出版社,2001:628.

[4]傅新文.頭頸部病變臨床細胞學[M].南昌:江西科技出版社,2004:81.

陳建華從 例宮頸液基細胞檢查分析涂片背景的診斷價值[J].實驗與檢驗醫學,2008,26(6):709.

[6]熊閩春.胸水染色體與腺苷脫氨酶聯合細胞學檢測對良惡性胸腔積液鑒別診斷價值的探討 [J].實驗與檢驗醫學,2014,32(5):573-574.

[7]Rosai J.阿克曼外科病理學[M].第8版.沈陽：遼寧教育出版社，1999：341.

[8]武忠弼,楊光華.中華外科病理學[M].北京:人民衛生出版社,2002：2507-2512.

[9]Johnson H,Cohen C,Fatima N,et al.Thyroid transcription factor 1 and napsin a double stain:utilizing different vendor antibodies for diagnosing lung adenocarcinoma.[J].Acta Cytol,2012,56(6):596-602.

[10]Agackiran Y,Ozcan A,Akyurek N,et al.Desmoglein-3 and Napsin A double stain,a useful immunohistochemical marker for differentiation of lung squamous cell carcinoma and adenocarcinoma from other subtypes[J].Appl Immunohistiochem Mol Morphol,2012,20(4):350-355.

[11]Turner BM,Cagle PT,Sainz IM,et al.NapsinA,a new marker for lung adenocarcinoma,is complementary and more sensitive and specific than thyroid transcription factor 1 in the differential diagnosis of primary pulmonary carcinoma:evaluation of 1 674 cases by tissuemicroarray[J].Arch Pathol Lab Med,2012,136(2):163-171.

[12]Warth A,Muley T,Herpel E,et al.Large-scale comparative analyses of immunomarkers for diagnostic subtyping of non-small-cell lung cancer biopsies[J].Histopathology,2012,61(6):1017-1025.

[13]Liu L,Cohen C,Siddiqui MT,et al.Thyroid transcription factor 1 and napsin a double staining in lung adenocarcinoma in pleural fluid[J].Acta Cytol,2012,56(4):425-430.

[14]王永才.針吸脫落細胞診斷學圖譜[M].北京:人民軍醫出版社,2003:557-594.

[15]陳杰.臨床病理科診斷常規[M].北京：中國醫藥科技出版社,2013:104.