飛燕草“北極光”無菌播種技術研究

張左悅　紀力　熊亞琴

摘 要：飛燕草“北極光”的商品化栽培通常采用播種繁殖，但存在出苗遲緩、增殖率低，且種子繁殖的后代易發生分離等問題。該試驗通過在培養基中添加外源激素對不同處理的種子進行播種試驗，為其進一步進行快速繁殖技術研究提供前提保障。

關鍵詞：飛燕草“北極光” 無菌播種 種子滅菌條件

中圖分類號：S79 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2015）12（a）-0254-03

飛燕草為毛茛科飛燕草屬的多年生草本植物，原產于南歐之北半球溫帶區。盛開時宛如一只只燕子，因而得名。F1代“北極光”（Delphinium AuroraF1）是飛燕草因其柔和的花色和整齊的花序成為高檔切花市場的寵兒。以往在對飛燕草屬花卉繁殖的研究中，主要以播種、扦插和分株3種方式。而商品化栽培通常采用播種繁殖，但出苗遲緩，增殖率低，且有種子繁殖后代發生分離等問題。且該試驗引進的飛燕草“北極光”品種由于種子價格較高，所以，并不適合這種繁殖方式。因此，實生苗的無菌培養成為工廠化生產該品種飛燕草的一條重要途徑，而這方面的報道也較少。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗中所用飛燕草“北極光”種子于2014年購于南京虹彩花卉種苗公司，是日本TAKII的種子。

1.2 試驗方法

1.2.1 無菌播種技術研究

將飛燕草“北極光”的種子在流水中沖洗浸泡2 h，備用。采用L9（32）2因素3水平的全組合正交試驗，在無菌條件下[1，2]，先用75%酒精分別浸泡15 s（A1）、30s（A2）、45s（A3），無菌水沖洗3～4次，然后用加了2滴吐溫-80的0.1%升汞溶液分別浸泡2 min（B1）、4min（B2）、6min（B3），無菌水沖洗7～8次，重復3次。在整個滅菌過程中可稍許震蕩，讓種子得到充分地滅菌以及徹底地清洗。因王金發等利用大花飛燕草（Delphinium grandiflorum）種子在1/2MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L[3]上播種，該試驗通過對比不同滅菌處理的種子在1/2MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L（單位：下同）培養基上的萌發情況，來統計其污染率及出苗率，10天統計污染率，30天統計出苗率。

1.2.2 不同激素對切段種子脫分化能力的研究

將飛燕草“北極光”的種子用最佳滅菌方式進行處理，而后在超凈工作臺上對無菌種子進行橫向切成兩段處理，然后再分別接入到含有不同激素的培養基上（表2）進行脫分化試驗。重復3次。

2 結果與分析

2.1 種子滅菌條件的研究

從表3可看出正交組合9個處理中，以處理2（A1B2），即用75%酒精處理15 s，再用0.1%升汞處理4 min。得到的初代培養外植體污染數最少，無菌率達到96.67%；且其出苗率也較高，達到80%，是所有處理中最高值。

2.2 不同激素對切段種子脫分化能力的研究

從表4可看出，在一定范圍內，愈傷組織的形成會隨著激素的濃度增加而增加。在該試驗所設計的濃度梯度中，在含有1/2MS+6-BA 0.5+IAA 0.05的培養基上，愈傷形成數量較少，誘導率較低（33.3%），生長速度也較緩慢，形成的愈傷透明成水樣化（圖1）。隨著激素濃度的增加，切段種子形成的愈傷組織逐漸增多，且類型逐漸轉為半透明的瘤狀愈傷組織（圖2），當激素組合為1/2MS+6-BA 2.0+IAA 0.20時，形成大量半透明的瘤狀愈傷組織，誘導率高達90%。繼續增加激素濃度，在激素組合為1/2MS+6-BA 2.5+IAA 0.25時，雖然誘導率仍可保持在75%以上，但形成的愈傷組織為淺綠色且較致密和結實（圖3）。在適合的分化培養基上，水樣化的透明的愈傷組織分化出的芽數較少（圖4）；而半透明的瘤狀愈傷組織均能分化出不定芽，且數量較多（圖5）；致密、結實的愈傷組織雖也可100%分化出不定芽，但平均每個外植體分化出的芽數較半透明的瘤狀愈傷組織要少，不過，長出的小苗葉色更濃綠、植株更健壯（圖6）。

3 討論

飛燕草“北極光”因它柔和的花色和整齊的花序，成為鮮切花市場的新寵，具有較高的觀賞價值和經濟價值。但由于其種子價格較貴，且在自然播種繁殖過程中性狀易發生分離的缺點，使得離體繁殖技術成為其產業化生產實現的必要前提。但迄今為止，國內外尚未有其組培成功的報道。我們從現有的外植體資源即飛燕草“北極光”的種子作為主要試驗材料，進行了廣泛的試驗和探索，從種子滅菌到愈傷形成以及出芽分化，為摸索出一整套較為成功的飛燕草“北極光”的組織培養方法奠定了基礎。

參考文獻

[1] 朱廣廉.植物組織培養中外植體滅菌[J].植物生理學通訊，1996，32（6）：444-449.

[2] 朱廣廉.植物組織培養中滅菌和無菌操作的幾個問題[J].植物生理學通訊，1995，31（5）：375-384.

[3] 王金發，何小玲，何炎明.大花飛燕草的組織培養及再生體系建立[J].熱帶亞熱帶植物學報，2000，8（4）：315-318.