微柱凝膠法對ABO血型正反定型不符標本的篩選、鑒別和定型

龐衛花，劉永濤，徐 娜，李金巍，楊敬芳

(河北北方學院附屬第二醫院1.檢驗科;2.信息科;3.婦科，河北張家口，075100)

ABO血型鑒定是指ABH血型抗原的檢測。一般情況下，ABO血型一致的人才可進行輸血，特別是大量輸血時，應采用同一血型的血液。輸血時若血型不合，會造成輸入的紅細胞(RBC)發生凝集，引起血管阻塞及血管內大量溶血。多數與輸血有關死亡患者的死因與輸入ABO不相容的血液有直接或者間接關系，其中1/3由ABO血型鑒定有誤所致。因此，血型檢測與輸血反應密切相關，在輸血前必須進行血型鑒定。ABO血型正反定型相符是其鑒定關鍵所在，必須查明引起正反定型不相符的原因，以獲得ABO血型的準確定型［1－2］。

微柱凝膠法作為一種新式血型血清學技術，在常規血型鑒定方面具有反應結果可靠且易于標準化、特異性強等特點，已被西方國家廣泛用于常規紅細胞血型血清學的檢測。因其抗原抗體量恒定，且操作標準化，故對ABO亞型、弱抗原的反應強度高于傳統試管法，目前國內已逐步應用于臨床［3－4］。本研究采用微柱凝膠法對ABO血型正反定型不符標本進行篩選、鑒別和定型，有效解決了ABO血型正反定型不符的問題，為臨床ABO血型定型的準確性提供了科學依據，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年4月—2013年4月河北北方學院附屬第二醫院送檢血樣及獻血員標本3 000例，其中白血病325例，多發性骨髓瘤91例，骨髓纖維化24例，貧血288例，腸癌164例，消化道出血270例，外科手術269例，以及其他相關疾病者。滿足ABO血型正反定型不符100例，其中男80例，女20例;年齡5～85歲。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑及儀器:ABO、RhD血型定型試劑卡(長春博訊生物技術有限公司);免疫微柱離心機、臺式低速離心機及免疫微柱孵育器。

1.2.2 鑒定方法:ABO正反定型、微柱凝膠卡氏法、吸收放散試驗、試管法、唾液中血型物質測定、配血試驗、抗體鑒定等均嚴格按照說明書操作進行。

篩選:采用ABO、RhD血型定型試劑卡將全體血樣標本進行ABO血型正反定型，篩選出正反定型不符的標本，繼續進一步檢測。鑒別:對初次出現正反定型不符的標本重新采集，采用試管法檢測紅細胞與抗－A1及抗－AB的凝集強度，重復試驗進行核實，包括核查標本標簽、申請單及標本質量，離心機的轉速、離心力及離心時間等相關設置，試劑有無漏加或加錯等，以排除人為因素及技術失誤。對重新采集的血樣，留取唾液進行血型物質鑒定，唾液血型物質檢測及紅細胞H物質活性檢測，以重新制備紅細胞懸液。定型:采用微柱凝膠法對ABO血型正反定型。根據血型血清學技術，對上述確定抗原改變引起正反定型不符標本正確定型。對血清反應出現的問題，可分為正定型與反定型不符。正定型不符，即紅細胞與抗－A或抗－B出現額外反應和反應減弱以及無反應和混合凝集;反定型不符包括與A1、或B細胞出現額外反應以及反應減弱、無反應等。根據初步分類結果并結合臨床資料進行試驗，將其中正定型(抗－A和/或抗－B)呈陰性及混合凝集的紅細胞標本進行吸收放散試驗，以確定受檢標本A、B抗原，并結合正定結果來明確抗原改變引起的正反定型不符。

1.3 鑒定標準

一系列鑒定檢測均參照《全國臨床檢驗操作規程》和《臨床輸血診療技術》要求進行［5－6］。

2 結果

2.1 鑒定結果

100例ABO血型正反定型不符標本中，28例為操作不規范等人為因素所致，通過重新測試后ABO血型正反定型相符。余72例經進一步復習臨床資料及分類試驗驗證，明確為ABO血型正反定型不符由疾病因素及亞型因素所致。

2.2 典型病例

2.2.1 疾病因素導致假凝集而引起正反定型不符:男，51歲。因嚴重貧血而入院，血紅蛋白48 g/L，急需輸血。試管法血型鑒定:正定型A型，反定型出現了額外反應，即A、B細胞出現了串錢狀凝集。查閱臨床資料發現，患者患有多發性骨髓瘤，無輸血史，弱凝集通過加入0.9%氯化鈉溶液稀釋后散開，明確正反定型不符是由疾病導致的假凝集，其血型應為A型。見表1。

2.2.2 ABO亞型因素引起正反定型不符:男，23歲。因貧血而入院，血紅蛋白48 g/L。試管法血型鑒定:正定型為AB型，反定型出現抗－A。查閱臨床資料發現，患者無輸血史?？贵w篩查試驗顯示陰性，紅細胞與抗－A1反應陰性，血清與A2細胞無凝集，但與A1細胞有凝集(2+)，并經吸收放散試驗，鑒定患者為A2B亞型。見表1。

表1 ABO正反定型不符典型病例血型特點

3 討論

血型鑒定必須有規范的標準流程，若發現正反定型不符標本，應先查明原因，排除人為因素，并結合相關臨床資料，行進一步血型鑒定試驗，以確保檢測的準確性［7－9］。微柱凝膠法對ABO血型正反定型不符標本的篩選、鑒別和定型，具有處理能力強、速度較快、人為誤差較小等優點，不僅可提高血型鑒定的自動化程度，還可減少因人工操作引起的誤差。

微柱凝膠法對血型正反定型不符標本的鑒定需要進行重復測試，且對相關標本與試劑進行核查。本研究通過重復檢測發現，100例ABO血型正反定型不符標本中有28例為操作不規范等人為因素所致，提示實驗過程中規范化操作很重要。依據血清反應特點，將標本分為正、反定型不符2種，分析影響因素，并對非人為因素導致的正反定型不符進行有效處理［10－12］。本研究對余72例ABO血型正反不符標本進行重新鑒定，明確為ABO血型正反定型不符由疾病因素及亞型因素所致。對疾病因素所致者，通過查閱臨床資料，并按照微柱凝膠法進行規范化操作，鑒定患者血型為A型?？梢?，因疾病因素導致正反定型不符患者，通過查閱臨床資料，并按照微柱凝膠法進行規范化操作，有利于患者血型的鑒定;對ABO亞型因素所致者，針對具體因素進行微柱凝膠法鑒定，患者血型為A2B型，進一步提示在查明原因的前提下，采用微柱凝膠法對ABO血型正反定型不符標本進行鑒定，效果理想。檢測過程中，采取正反定型原則可確保鑒定結果的準確性。同時，實施二次檢測的模式可避免標本在采集過程中發生錯誤。

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