TGF-β1和PAI-1在老年IgA腎病患者中的表達及意義

樊 平 梁新華 鄒 川 劉旭生

(廣州中醫(yī)藥大學第二臨床醫(yī)學院腎病科，廣東 廣州 510120)

IgA腎病是最常見的一種原發(fā)性腎小球疾病〔1〕，老年人發(fā)生IgA腎病的比例約為1.7%，且其發(fā)病率正在逐年升高〔2～4〕。然而目前研究并沒有發(fā)現(xiàn)老年IgA腎病典型的病理特點，這給老年IgA腎病的診斷帶來一定的困難。目前關于老年IgA腎病患者轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1和纖溶酶原激活物抑制物(PAI)-1水平變化的研究較少。本研究觀察TGF-β1和PAI-1在老年IgA腎病患者腎臟組織、血液及尿液中的水平，為老年IgA腎病診斷提供一定的科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 選取2012年1月至2013年1月在我院住院的老年IgA腎病患者30例，男15例，女15例;年齡60～71歲，平均(64.5±5.3)歲。選取同期在本院住院的青少年IgA腎病患者30例〔男16例，女14例，年齡15～30歲，平均(24.8±11.2)歲〕以及門診體檢健康的青少年〔男15例，女15例，年齡15～30歲，平均(25.4±12.3)歲〕、老年人〔男15例，女15例;年齡60～70歲，平均(65.1±4.9)歲〕各30例，作為血液和尿液TGF-β1和PAI-1水平檢測的對照組。另選取5例〔男性3例，女性2例，年齡19～65歲，平均(38.6±22.1)歲〕腦死亡的尸體腎組織作為腎組織TGF-β1和PAI-1水平檢測的對照組，腎組織取材時間均在離體后12 h內(nèi)，經(jīng)光鏡及免疫熒光檢查均未見異常。所有IgA腎病患者均經(jīng)B超引導腎穿刺活檢術(shù)證實為原發(fā)性IgA腎病，入選者均未使用過激素、細胞毒藥物等免疫抑制劑，并排除系統(tǒng)性紅斑狼瘡、過敏性紫癜及各型肝病所致的繼發(fā)性IgA腎病。根據(jù)老年IgA腎病患者24 h尿蛋白定量，將其分為 I組(尿蛋白＜25 mg·24 h－1·kg－1)、Ⅱ組(尿蛋白 25 ～ 50 mg· 24 h－1·kg－1)和 Ⅲ 組 (尿 蛋 白 ＞50 mg·24 h－1·kg－1);根據(jù) Lee 組織學分級系統(tǒng)〔5〕將老年 IgA腎病患者分為Ⅰ～Ⅴ級。

1.2 樣品采集 清晨空腹抽取所有研究對象外周靜脈血3 ml，3 000 r/min離心20 min，收集上層血清置于－80℃冰箱中備用。采用尿杯留取清潔中段晨尿，置于15 ml離心管中，3 000 r/min離心20 min，收集上清置于－80℃冰箱中備用。留取30例老年IgA腎病患者活檢組織標本備用。

1.3 血液及尿液 TGF-β1和 PAI-1水平檢測 血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平檢測的ELISA試劑盒購自上海西唐生物科技有限公司，嚴格按試劑盒說明書操作。

1.4 免疫組織化學檢測 小鼠抗人TGF-β1單克隆抗體(1∶200)及兔抗人PAI-1多克隆抗體(1∶100)均購自Santa Cruz公司。具體免疫組織化學染色步驟參見文獻〔6〕報道。結(jié)果采用CMIAS醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)進行定量分析。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS15.0軟件，計量資料采用x±s表示，兩兩比較采用t檢驗，多組比較采用方差分析。

2 結(jié)果

2.1 腎臟組織TGF-β1和PAI-1水平分析 與健康青少年(A組)和健康老年人(B組)相比，青少年IgA腎病患者(C組)及老年IgA腎病患者(D組)腎臟組織TGF-β1和PAI-1表達水平均顯著升高(P＜0.05)，且老年IgA腎病患者腎臟組織TGF-β1和PAI-1水平顯著高于青少年IgA腎病患者(P＜0.05)。A組和B組相比，腎臟組織TGF-β1和PAI-1水平差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見圖 1。

圖1 各組腎組織TGF-β1和PAI-1表達

2.2 血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平分析 與A組和B組相比，C組及D組血液及尿液TGF-β1和PAI-1表達水平均顯著升高(P＜0.05)，且D組血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平顯著高于C組(P＜0.05)，A組和B組血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見表1。

表1 4組血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平比較 (pg/ml，x±s，n=30)

2.3 老年IgA腎病患者不同水平24 h尿蛋白定量亞組TGF-β1和PAI-1在腎組織中的表達 隨著老年IgA腎病患者24 h尿蛋白定量升高，其腎組織中TGF-β1和PAI-1表達水平逐漸升高(P＜0.05)。見圖2。

圖2 老年IgA胃病患者不同水平24 h尿蛋白定量亞組腎組織TGF-β1和PAI-1表達

2.4 老年IgA腎病患者不同水平24 h尿蛋白定量亞組血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平比較 隨著老年IgA腎病患者24 h尿蛋白定量升高，其血液及尿液TGF-β1和PAI-1表達水平逐漸升高(P＜0.05)。見表2。

表2 老年IgA腎病患者不同水平24 h尿蛋白定量亞組血液及尿液 TGF-β1、PAI-1水平比較(pg/ml，x±s)

2.5 老年IgA腎病患者不同組織學分級亞組TGF-β1和PAI-1表達分析 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級老年IgA腎病患者腎組織TGF-β1和PAI-1表達未見明顯差異，Ⅳ、Ⅴ級老年IgA腎病患者腎組織TGF-β1和PAI-1表達未見明顯差異;而Ⅳ、Ⅴ級老年IgA腎病患者腎組織TGF-β1和PAI-1表達水平顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級老年IgA腎病患者(P＜0.05)。見圖3。

圖3 老年IgA腎病患者不同組織學分級亞組腎組織 TGF-β1和PAI-1表達

2.6 老年IgA腎病患者不同組織學分級亞組血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平比較 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級老年IgA腎病患者血液及尿液TGF-β1和PAI-1表達水平未見明顯差異，Ⅳ、Ⅴ級老年IgA腎病患者血液及尿液TGF-β1和PAI-1表達水平未見明顯差異;而Ⅳ、Ⅴ級老年 IgA腎病患者血液及尿液 TGF-β1和PAI-1表達水平顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(P＜0.05)。見表3。

表3 老年IgA腎病患者不同組織學分級亞組血液及尿液 TGF-β1、PAI-1 水平比較(pg/ml，x±s)

3 討論

本研究結(jié)果表明IgA腎病患者腎臟組織、血液及尿液中TGF-β1和PAI-1水平顯著升高。文獻報道，TGF-β1可抑制細胞外基質(zhì)降解，促進腎臟組織纖維化的發(fā)生〔6〕。PAI-1表達上調(diào)可使腎小球內(nèi)纖維蛋白沉積，抑制系膜基質(zhì)的降低〔7〕，且PAI-1可促進腎小管間質(zhì)纖維化〔8〕，參與IgA腎病的發(fā)生。

文獻〔1〕報道老年IgA腎病患者與非老年IgA腎病患者相比，其24 h尿蛋白定量明顯升高，且Lee組織學分級I級人數(shù)明顯低于非老年IgA腎病患者，提示與非老年IgA腎病患者相比，老年IgA腎病患者的病情較嚴重。結(jié)合文獻報道，本研究結(jié)果提示TGF-β1和PAI-1在老年IgA腎病患者疾病進展中發(fā)揮了重要的作用。

進一步對老年IgA腎病患者根據(jù)其24 h尿蛋白定量及Lee組織學分級進行分組，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著老年IgA腎病患者24 h尿蛋白定量和組織學分級的升高，其腎臟組織、血液及尿液中TGF-β1和PAI-1表達水平逐漸升高。該結(jié)果進一步提示TGF-β1和PAI-1確實在老年IgA腎病患者疾病進展中發(fā)揮了重要的作用。

綜上所述，老年IgA腎病患者腎臟組織、血液和尿液中TGF-β1和PAI-1表達水平均顯著升高，且與疾病嚴重程度相關，可作為老年IgA腎病輔助診斷及判斷疾病進展的手段之一。

1 黃 蘭，趙亞娟，劉艷紅，等.老年IgA腎病臨床病理特點分析〔J〕．中國老年學雜志，2013;33(11):2692-3.

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3 Masashi G，Natural K.Risk stratification for progression of IgA nephropathy using a decision tree induction algorithm〔J〕．Nephrol Dial Transplant，2009;24(4):1242-7．

4 鐘偉強，黃仲良，黃成文.中老年IgA腎病與青少年IgA臨床病理特征對比分析〔J〕．中國老年學雜志，2013;33(16):4032-3.

5 Okada H，Suzuki H，Konishi K，et al.Histological alterations in renal specimens as indicators of prognosis of IgA nephropathy〔J〕．CIin Nephrol，1992;37:235.

6 周文華，孔麗麗，賈 冶，等.GSK3β抑制劑對糖尿病腎病大鼠腎組織TGF-β1和血清 PAI-1表達的影響〔J〕．中國實驗診斷學，2013;17(4):634-8.

7 王海燕．腎臟病學〔M〕．北京:人民衛(wèi)生出版社，2008:800-1．

8 王建中，陳香美，師鎖柱，等.I型纖溶酶原激活物抑制物在IgA腎病腎小管間質(zhì)損傷中的作用研究〔J〕．中華腎臟病雜志，2000;16(1):11-3.