廣西野生高良姜提取液抗菌作用研究

覃艷春等

【關鍵詞】 高良姜；提取液；抗菌作用

中圖分類號：R285.1 文獻標識碼：B DOI：10.3969/j.issn.10031383.2015.05.032

近年來，隨著合成及半合成抗菌藥物的增多和廣泛使用，細菌耐藥性問題日趨嚴重，各種耐藥性細菌引發院內感染等疾病的發病率不斷增長，長期以來西藥對耐藥一直束手無策[1]。高良姜（Alpinia officinarumHance）性辛、熱，歸脾、胃經，具有溫胃、止嘔、散寒止痛之功效[2]，現代藥理學研究表明，高良姜還具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、抗胃腸道出血、抗潰瘍和胃黏膜保護等作用[3]。本研究利用野生高良姜提取液，研究其抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的情況，為高良姜的抗菌作用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 菌種的收集

本次實驗收集2014年5月～2015年4月右江民族醫學院附屬醫院從臨床分離的菌株，采集的標本來自臨床感染患者咽拭子、痰、氣管沖洗物、血液、膿液、糞便等標本。所有菌株經VITEK微生物分析儀鑒定確認。收集到的金黃色葡萄球菌25株，綠膿桿菌15株，白色念珠菌16株，不動桿菌15株，大腸桿菌12株。

1.2 藥物

本試驗所用高良姜來自廣西百色周邊的山地，經乙醇提取后使用。

1.3 高良姜藥液的制備

高良姜水提液的提取：高良姜切成碎片后加水，用10倍的水煎煮3次，每次1小時，濃縮至1 g/ml。高良姜乙醇液提取：取高良姜碎片，用75%乙醇回流提取3次，每次1小時，濃縮至1 g/ml。上述藥液都配制成0.5 g/ml，0.25 g/ml，0.125 g/ml，0.0625 g/ml四種濃度備用。

1.4 KB藥敏紙片法

將純培養后的菌種接種于普通培養基中，37℃培養24 h，用接種環挑取形態相似菌落4～5個，接種于5 ml的MH肉湯中，37℃培養3 h，用生理鹽水配制成0.5麥氏/比濁標準，即含1～2108 CFU/ml的菌懸液。無菌操作下將空白藥敏紙片（6 mm）放到不同濃度的高良姜藥液中，浸泡1 h。用棉簽取上述菌懸液涂布到MH平板中，再將含有藥樣的藥敏紙片濾水，微干后鋪在平板中，37℃培養24 h后觀察結果。

1.5 瓊脂稀釋法測最低抑菌濃度（MIC）

采用美國CLS標準瓊脂稀釋法測定各種中藥提取液對所采集菌種的最低抑菌濃度（minimum inbibition concentration，MIC）[4]。本次實驗高良姜測定濃度范圍為1～4 g/ml。各濃度的高良姜分別加入經過高壓滅菌后在50℃水浴的MH瓊脂中，充分混勻后傾倒入平皿，瓊脂厚度為5～6 mm。制備濃度相當于0.5麥氏標準比濁管的菌懸液，再以1∶10稀釋，用微量移液器吸取制備好的菌液2 μL接種于瓊脂平板表面，每點菌數約為104 CFU，形成5～8 mm的菌斑。接種好后置37℃培養箱24 h后將平板置于暗色、無反光的物體表面判斷結果，以抑制細菌生長的最低藥物濃度為MIC。

2 結 果

2.1 KB藥敏紙片法檢測高良姜提取液的抗菌作用

結果顯示：高良姜醇提液和水提液對金黃色葡萄球菌均敏感，對銅綠假單胞菌、白假絲酵母菌、不動桿菌、大腸埃希菌不敏感。見表1。

2.2 瓊脂稀釋法檢測結果

高良姜醇提液和水提液濃度為0.0625 g/ml，0.125 g/ml，0.25 g/ml時對金黃色葡萄球菌均耐藥，濃度為0.5 g/ml時對金黃色葡萄球菌均敏感，結果表明，高良姜醇提液和水提液對金黃色葡萄球菌的MIC均為0.5 g/ml。

3 討 論

高良姜，別名小良姜，又名徐聞良姜，藥學名Alpiniaofficinarum Hance，為姜科植物，是一種熱帶多年生長的山姜，屬食藥兼用的植物資源。追溯高良姜的歷史，高良姜始載于《名醫別錄》，因出于古高涼郡（今廣東省湛江、茂名一帶）故名高涼姜，后因諧音而訛稱為高良姜。高良姜在我國古代的諸多藥典如《本草綱目》及《中國藥典》均有記載。而在《圖經本草》中則對高良姜有更詳細的記載：“春生莖葉如姜苗而大，高一、二尺許，花紅紫色如山姜”。高良姜對人體造血機能有顯著促進作用，據《本草綱目》記載，“其性甘辣、清涼，除煩熱、利津小便，通三焦團壅、塞氣抗寒、散氣之功效，且明目驅瘴。”其味辛，性溫，有溫胃散寒、行氣、消食止痛之功效[5～7]。

近20年來，隨著合成及半合成抗菌藥物的增多和廣泛使用，細菌耐藥性問題日趨嚴重，各種耐藥性細菌引發院內感染等現象不斷增多，長期以來西藥對此一直束手無策，而高良姜是研究開發新的抗菌藥物的理想資源，但目前有關研究較少，并且還僅僅處于對粗提物的研究階段，為明確其中的活性成分，有待進一步深入研究[8～10]。

本實驗用廣西野生的高良姜提取液，研究其對金黃色葡萄球菌等五種菌的抗菌作用，為中藥治療臨床常見細菌感染提供新的思路，研究結果顯示：高良姜提取液對金黃色葡萄球菌有很好的抑菌作用，對銅綠假單胞菌、白假絲酵母菌、不動桿菌、大腸埃希菌無抑菌作用。下一步研究將進一步提取高良姜提取液中的各有效成分，研究其抗菌作用。本研究為高良姜的抗菌作用提供理論依據，也為以后進一步深入研究開發廣西野生高良姜這一寶貴中藥資源奠定研究基礎。

參 考 文 獻

[1] 黃慧珍，楊 丹.高良姜的化學成分及其藥理活性研究進展[J].廣東化工，2009，36（1）：7780.

[2] 嚴 波，白筱璐，胡竟一，等.高良姜的解熱和抗炎作用[J].中藥藥理與臨床， 2013，29（1）：8587.

[3] 王麗峰，彭敬東，王 寧.高良姜藥材高效液相指紋圖譜研究[J].西南師范大學學報，2008，33（6）：3338.

[4] 趙 炯，呂 瑋，段宏泉，等.高良姜中的抗白念珠菌化學成分[J].山西醫科大學學報，2007，38（7）：604606.

[5] 呂 瑋，蔣伶活.高良姜的化學成分及藥理作用[J].中國藥業，2006，15（3）：1921.

[6] 龐啟華，嚴 萍，趙 翾，等.南藥高良姜基因組DNA提取方法的研究[J].時珍國醫國藥，2008，19（5）：11871189.

[7] 霍仕霞，康雨彤，彭曉明，等.高良姜提取物促進黑素生成的譜效關系分析[J].中草藥，2013，44（8）：9951002.

[8] 康愛榮，閆 明，彭 英，等.高良姜中高良姜素的醇提和純化工藝研究[J].中國中醫藥信息雜志，2011，5（18）：4446.

[9] 霍仕霞，彭曉明，高 莉，等.不同質量分數高良姜素對人黑色素瘤A375細胞黑素合成及相關基因表達的影響[J].中草藥，2014，45（2）：244249.

[10] 許云霞，趙新淮.高良姜素對人胃癌SGC7901細胞增殖、周期循環和凋亡的體外影響[J].中國藥學雜志，2013，48（15）：12741278.

（收稿日期：2015-09-09 修回日期：2015-10-22）

（編輯：潘明志）