針對測定長白楤木種子中總酚含量的優選方法研究

何芳　張寧

摘 要：長白 木（Aralia continentalis Kitagwa）種子具有休眠的特性[1]，在自然條件下萌發困難，本論文主要研究篩選測定長白 木種子中總酚含量的適宜方法。試驗結果表明，用50%丙酮溶液做提取劑，單寧酸做標準樣品測定長白 木種子中總酚含量效果較好。

關鍵詞：長白 木；種子休眠；總酚含量

種子休眠是具有正?；盍Φ姆N子在適宜的環境條件（光照、溫度、水分和氧氣等）下仍不能萌發的現象。對植物本身來說是一種有益的生物學適應性，具有重要的生態學意義，但是卻給我們的苗木生產帶來一定的困難。本論文主要研究篩選出對長白 木種子中酚類物質含量測定的適宜方法，為尋找長白 木種子休眠解除過程中，酚類物質含量的變化規律，生產上使用破眠技術提供理論上支持[2]。因此，本研究具有重大的理論和實踐意義。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗采用2008年8月采收的長白 木成熟飽滿的種子。

1.2 方法

本次試驗采用Folin-Ciocalteu方法測定長白 木種子中總酚含量，主要原理是依據多酚類化合物及含有極易氧化羥基的還原性物質在堿性環境條件下與福林試劑反應生成藍紫色的化合物，并在可見光范圍內具有穩定的強烈吸收，一定條件下服從朗伯-比爾定律，利用此現象選擇合適的基準物質繪制標準曲線。從而測定多酚類化合物的總含量。

1.2.1 有機溶劑的篩選及標準品的篩選

樣品的粉碎：用高速粉碎機將長白 木種子粉碎樣品溶液的制備：分別用乙醇和丙酮提取，處理濃度分別為30%、50%、70%。

（1）乙醇溶劑的提?。壕_稱取3份磨碎的長白 木種子1.0g，放在3個50ml錐形瓶中，分別加入不同濃度的乙醇10ml，聲波提取30min，收集上清液，濾渣再提取兩次，合并提取液，然后將上清液在4℃離心10min，用移液槍精確量取上清液5ml于25ml的容量瓶中，用蒸餾水定容。

（2）丙酮溶劑的提?。壕_稱取3份磨碎的長白 木種子1.0 g，放在3個50ml錐形瓶中，分別加入不同濃度的丙酮10ml，聲波提取30min，收集上清液，濾渣再提取兩次，合并提取液，然后將上清液在4℃離心10min，用移液槍精確量取上清液5ml于25ml的容量瓶中，用蒸餾水定容。

標準曲線的建立：

（1）單寧酸標準曲線的建立：分別準確量取單寧酸標準液0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml于試管中，各加6ml水，搖勻，再加0.5ml福林試劑，充分搖勻。1min之后，加入20%碳酸鈉溶液1.5ml，混勻定容。在75℃反應10min，于298nm波長下比色，測定吸光度，建立標準曲線。

（2）沒食子酸標準曲線的建立：分別準確量沒食子酸標準曲線的建立：分別準確量取沒食子酸標準液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml于試管中，各加6ml水，搖勻，再加0.5ml福林試劑，充分搖勻。1min之后，加入20%碳酸鈉溶液1.5ml，混勻定容。在75℃反應10min，于265nm波長下比色，測定吸光度，建立標準曲線。

（3）香草醛標準曲線的建立：分別準確量取香草醛標準液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于試管中，各加6ml水，搖勻，再加0.5ml福林試劑，充分搖勻。1min之后，加入20%碳酸鈉溶液1.5ml，混勻定容。在75℃反應10min，于299nm波長下比色，測定吸光度，建立標準曲線。

樣品的測定：

用移液槍精確量取1ml樣品溶液于試管中，加入6ml蒸餾水，0.5ml福林試劑和1.5ml20%碳酸鈉溶液，用蒸餾水定容至刻度，混勻，75℃水浴10min，冷卻，在標準液的最大吸收值處測定吸光度。實驗做三次重復。

1.2.2 長白 木種子內總酚含量的測定

樣品溶液的制備：

精確稱取磨碎的長白 木種子1.0g，放在50ml錐形瓶中，加入50%的丙酮10ml，聲波提取30min，收集上清液，濾渣再提取兩次，合并提取液，然后將上清液在4℃離心10min，用移液槍精確量取上清液5ml于25ml的容量瓶中，用蒸餾水定容。

標準曲線的建立：

單寧酸標準曲線的建立：

分別準確量取單寧酸標準液0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml于試管中，各加6ml水，搖勻，再加0.5ml福林試劑，充分搖勻。1min之后，加入20%碳酸鈉溶液1.5ml，混勻定容。在75℃反應10min，于298nm波長下比色，測定吸光度，建立標準曲線。

樣品的測定：

用移液槍精確量取1ml樣品溶液于試管中，加入6ml蒸餾水，0.5ml福林試劑和1.5ml20%碳酸鈉溶液，用蒸餾水定容至刻度，混勻，75℃水浴10min，冷卻，在標準液的最大吸收值處測定吸光度。實驗做三次重復。

總酚含量（%）=×100%

2 結果與分析

2.1 標準樣品篩選

總酚的檢測方法中常用到的標準品因作物不同而不同，因此實驗采用單寧酸、沒食子酸和香草醛為標準品進行總酚含量的檢測，實驗采用50%丙酮提取種子內的總酚，單寧酸、沒食子酸、香草醛做標準品測定總酚含量進行顯著性分析，單寧酸做為標準品測定總酚含量極顯著高于其它兩種標準品種。

2.2 不同溶劑、不同濃度對種子內總酚提取效果研究

不同溶劑、不同濃度提取測定長白 木種子內總酚含量，丙酮的提取液中總酚含量均極顯著的高于乙醇提取液中總酚含量，用30%丙酮和50%丙酮提取總酚含量極顯著的高于70%丙酮處理，且30%丙酮提取與50%丙酮提取二者之間達到顯著性差異，未達到極顯著性差異。由此可以看出本試驗提取總酚的適宜有機溶劑為丙酮，適宜濃度為50%。不同標準品檢測結果比較可以看出，丙酮對種子中總酚的提取效果均好于乙醇提取效果，且以50%丙酮提取效果較好。

3 結論與討論

以50%丙酮做提取劑，單寧酸做標準品檢測長白 木種子內總酚含量為優選方法。通過文章研究可知，單寧酸做為標準品測定種內總酚含量極顯著高于香草醛、沒食子酸做標準品。50%丙酮對長白 木種子進行提取，測得種子內總酚含量最高。因此，用50%丙酮溶液做提取劑，以單寧酸做標準樣品檢測的靈敏度較高，是本次實驗測定長白 木種內總酚含量的優選方法。

參考文獻

[1]方志榮，蘇智先，胡進耀，等.珙桐種子幾種呼吸代謝酶活性及果實不同組織總酚含量測定[J].綿陽師范學院學報，2008，27（5）：70-73.

[2]楊曉玲，張培玉，郭明軍.山楂種子酚類物質含量與休眠的關系[J].園藝學報，1997，24（4）：393-394.