針對測定長白楤木種子中總酚含量的優(yōu)選方法研究

何芳　張寧

摘 要：長白 木（Aralia continentalis Kitagwa）種子具有休眠的特性[1]，在自然條件下萌發(fā)困難，本論文主要研究篩選測定長白 木種子中總酚含量的適宜方法。試驗(yàn)結(jié)果表明，用50%丙酮溶液做提取劑，單寧酸做標(biāo)準(zhǔn)樣品測定長白 木種子中總酚含量效果較好。

關(guān)鍵詞：長白 木；種子休眠；總酚含量

種子休眠是具有正常活力的種子在適宜的環(huán)境條件（光照、溫度、水分和氧氣等）下仍不能萌發(fā)的現(xiàn)象。對植物本身來說是一種有益的生物學(xué)適應(yīng)性，具有重要的生態(tài)學(xué)意義，但是卻給我們的苗木生產(chǎn)帶來一定的困難。本論文主要研究篩選出對長白 木種子中酚類物質(zhì)含量測定的適宜方法，為尋找長白 木種子休眠解除過程中，酚類物質(zhì)含量的變化規(guī)律，生產(chǎn)上使用破眠技術(shù)提供理論上支持[2]。因此，本研究具有重大的理論和實(shí)踐意義。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)采用2008年8月采收的長白 木成熟飽滿的種子。

1.2 方法

本次試驗(yàn)采用Folin-Ciocalteu方法測定長白 木種子中總酚含量，主要原理是依據(jù)多酚類化合物及含有極易氧化羥基的還原性物質(zhì)在堿性環(huán)境條件下與福林試劑反應(yīng)生成藍(lán)紫色的化合物，并在可見光范圍內(nèi)具有穩(wěn)定的強(qiáng)烈吸收，一定條件下服從朗伯-比爾定律，利用此現(xiàn)象選擇合適的基準(zhǔn)物質(zhì)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。從而測定多酚類化合物的總含量。

1.2.1 有機(jī)溶劑的篩選及標(biāo)準(zhǔn)品的篩選

樣品的粉碎：用高速粉碎機(jī)將長白 木種子粉碎樣品溶液的制備：分別用乙醇和丙酮提取，處理濃度分別為30%、50%、70%。

（1）乙醇溶劑的提取：精確稱取3份磨碎的長白 木種子1.0g，放在3個(gè)50ml錐形瓶中，分別加入不同濃度的乙醇10ml，聲波提取30min，收集上清液，濾渣再提取兩次，合并提取液，然后將上清液在4℃離心10min，用移液槍精確量取上清液5ml于25ml的容量瓶中，用蒸餾水定容。

（2）丙酮溶劑的提取：精確稱取3份磨碎的長白 木種子1.0 g，放在3個(gè)50ml錐形瓶中，分別加入不同濃度的丙酮10ml，聲波提取30min，收集上清液，濾渣再提取兩次，合并提取液，然后將上清液在4℃離心10min，用移液槍精確量取上清液5ml于25ml的容量瓶中，用蒸餾水定容。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：

（1）單寧酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：分別準(zhǔn)確量取單寧酸標(biāo)準(zhǔn)液0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml于試管中，各加6ml水，搖勻，再加0.5ml福林試劑，充分搖勻。1min之后，加入20%碳酸鈉溶液1.5ml，混勻定容。在75℃反應(yīng)10min，于298nm波長下比色，測定吸光度，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（2）沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：分別準(zhǔn)確量沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：分別準(zhǔn)確量取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml于試管中，各加6ml水，搖勻，再加0.5ml福林試劑，充分搖勻。1min之后，加入20%碳酸鈉溶液1.5ml，混勻定容。在75℃反應(yīng)10min，于265nm波長下比色，測定吸光度，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（3）香草醛標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：分別準(zhǔn)確量取香草醛標(biāo)準(zhǔn)液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于試管中，各加6ml水，搖勻，再加0.5ml福林試劑，充分搖勻。1min之后，加入20%碳酸鈉溶液1.5ml，混勻定容。在75℃反應(yīng)10min，于299nm波長下比色，測定吸光度，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

樣品的測定：

用移液槍精確量取1ml樣品溶液于試管中，加入6ml蒸餾水，0.5ml福林試劑和1.5ml20%碳酸鈉溶液，用蒸餾水定容至刻度，混勻，75℃水浴10min，冷卻，在標(biāo)準(zhǔn)液的最大吸收值處測定吸光度。實(shí)驗(yàn)做三次重復(fù)。

1.2.2 長白 木種子內(nèi)總酚含量的測定

樣品溶液的制備：

精確稱取磨碎的長白 木種子1.0g，放在50ml錐形瓶中，加入50%的丙酮10ml，聲波提取30min，收集上清液，濾渣再提取兩次，合并提取液，然后將上清液在4℃離心10min，用移液槍精確量取上清液5ml于25ml的容量瓶中，用蒸餾水定容。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：

單寧酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：

分別準(zhǔn)確量取單寧酸標(biāo)準(zhǔn)液0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml于試管中，各加6ml水，搖勻，再加0.5ml福林試劑，充分搖勻。1min之后，加入20%碳酸鈉溶液1.5ml，混勻定容。在75℃反應(yīng)10min，于298nm波長下比色，測定吸光度，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

樣品的測定：

用移液槍精確量取1ml樣品溶液于試管中，加入6ml蒸餾水，0.5ml福林試劑和1.5ml20%碳酸鈉溶液，用蒸餾水定容至刻度，混勻，75℃水浴10min，冷卻，在標(biāo)準(zhǔn)液的最大吸收值處測定吸光度。實(shí)驗(yàn)做三次重復(fù)。

總酚含量（%）=×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)樣品篩選

總酚的檢測方法中常用到的標(biāo)準(zhǔn)品因作物不同而不同，因此實(shí)驗(yàn)采用單寧酸、沒食子酸和香草醛為標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行總酚含量的檢測，實(shí)驗(yàn)采用50%丙酮提取種子內(nèi)的總酚，單寧酸、沒食子酸、香草醛做標(biāo)準(zhǔn)品測定總酚含量進(jìn)行顯著性分析，單寧酸做為標(biāo)準(zhǔn)品測定總酚含量極顯著高于其它兩種標(biāo)準(zhǔn)品種。

2.2 不同溶劑、不同濃度對種子內(nèi)總酚提取效果研究

不同溶劑、不同濃度提取測定長白 木種子內(nèi)總酚含量，丙酮的提取液中總酚含量均極顯著的高于乙醇提取液中總酚含量，用30%丙酮和50%丙酮提取總酚含量極顯著的高于70%丙酮處理，且30%丙酮提取與50%丙酮提取二者之間達(dá)到顯著性差異，未達(dá)到極顯著性差異。由此可以看出本試驗(yàn)提取總酚的適宜有機(jī)溶劑為丙酮，適宜濃度為50%。不同標(biāo)準(zhǔn)品檢測結(jié)果比較可以看出，丙酮對種子中總酚的提取效果均好于乙醇提取效果，且以50%丙酮提取效果較好。

3 結(jié)論與討論

以50%丙酮做提取劑，單寧酸做標(biāo)準(zhǔn)品檢測長白 木種子內(nèi)總酚含量為優(yōu)選方法。通過文章研究可知，單寧酸做為標(biāo)準(zhǔn)品測定種內(nèi)總酚含量極顯著高于香草醛、沒食子酸做標(biāo)準(zhǔn)品。50%丙酮對長白 木種子進(jìn)行提取，測得種子內(nèi)總酚含量最高。因此，用50%丙酮溶液做提取劑，以單寧酸做標(biāo)準(zhǔn)樣品檢測的靈敏度較高，是本次實(shí)驗(yàn)測定長白 木種內(nèi)總酚含量的優(yōu)選方法。

參考文獻(xiàn)

[1]方志榮，蘇智先，胡進(jìn)耀，等.珙桐種子幾種呼吸代謝酶活性及果實(shí)不同組織總酚含量測定[J].綿陽師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，27（5）：70-73.

[2]楊曉玲，張培玉，郭明軍.山楂種子酚類物質(zhì)含量與休眠的關(guān)系[J].園藝學(xué)報(bào)，1997，24（4）：393-394.