DC/CIK細胞治療對白細胞、紅細胞、血小板和淋巴細胞的影響

安東建

[摘要] 目的 探討DC/CIK細胞治療對白細胞、紅細胞、血小板和淋巴細胞的影響。 方法 對接受DC/CIK細胞治療的63例癌癥患者的血細胞資料進行回顧性分析。結果 在第一療程DC/CIK細胞治療前和第二療程DC/CIK細胞治療后，63例患者的WBC、RBC、PT和LYM的數量變化無統計學意義（P>0.05）。 結論 DC/CIK細胞治療幾乎沒有血液學毒副反應，臨床應用安全。

[關鍵詞] 樹突狀細胞；細胞因子誘導的殺傷細胞； 白細胞；紅細胞；血小板；淋巴細胞

[中圖分類號] R392 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2015）19-0016-03

在可以預見的將來，每年將有數以百萬計的人診斷出癌癥[1]。手術、放療、化療仍是主要的治療方法，但死亡率很高[2]。與傳統的手術、放療、化療相比，腫瘤免疫治療毒副反應輕微，療效較好，逐漸成為第四種治癌方法[3]。DC/CIK 細胞（dendritic cell，DC，樹突狀細胞/cytokine induced killer cell，CIK，細胞因子誘導的殺傷細胞）治療是臨床較為普遍應用的過繼性細胞免疫治療技術，抗腫瘤作用強大、還能降低腫瘤進展的風險、延長生存[4]。然而，作為一種新的細胞治療技術，其對WBC、RBC、PT和LYM究竟有何影響，臨床少有報道。為此，回顧性分析2011年1月～2012年6月期間接受DC/CIK細胞治療的63例癌癥患者的血細胞資料，探討DC/CIK細胞治療與WBC、RBC、PT和LYM的相互影響，以保障其臨床應用的安全。

1 對象與方法

1.1 研究對象

63例晚期腫瘤患者均經過病理學或細胞學檢查確診。男44例，女19例。年齡21～72歲。鼻咽癌2例，肺癌36例，乳腺癌4例，食管癌1例，胃癌2例，結腸癌4例，直腸癌2例，肝癌4例，宮頸癌1例，腎癌3例，淋巴瘤2例，惡性黑色素瘤2例。

1.2 方法

1.2.1 DC/CIK細胞培養[5] 依據我院生物實驗室的標準流程，在患者簽字同意后，經上肢靜脈抽取患者靜脈血100 mL。隨后，采用淋巴細胞分離液逐步分離出單個核細胞。反復用生理鹽水洗滌單個核細胞3 次。將分離出的單個核細胞分別進行DC及CIK細胞的培養。①DC細胞培養：第一日，用含細胞因子IL-4、TNF的培養基培養DC細胞。每隔一天技術員采用半量換液一次。第十日，細胞培養成熟，此時再將CIK細胞混合，共同培養。②CIK細胞培養：第一日，用含細胞因子IFN-γ、抗CD3單抗等無血清生長培養基培養CIK細胞。24 h后加入含細胞因子IL-1和IL-2等無血清生長培養基。按要求需每2～3天更換培養基一次，并補加IL-2。第十日，CIK細胞與DC細胞共同培養。為了解有無微生物感染，在第十二日抽取樣本進行細菌、霉菌檢測。第十五日，DC/CIK細胞培養成熟。最后，將培養成熟的細胞平均分成6袋，每日一袋靜脈回輸給患者。

1.2.2 DC/CIK細胞回輸 經外周靜脈，患者每天靜脈輸注DC/CIK細胞一次，每次回輸細胞的總數在（1.5～2.0）×109。我們規定6 d為一個療程，每療程細胞總數≥9×109。每個患者均接受2個療程的治療。

1.3 觀察指標

所有患者在第一療程DC/CIK細胞回輸之前和第二療程DC/CIK細胞回輸之后，均進行血常規檢查。WBC計數單位及正常值為（4.0～10.0）×109/L，RBC計數單位及正常值為男性（4.0～5.5）×1012/L、女性（3.5～5.0）×1012/L，PT計數單位及正常值為（100～300）×109/L，LYM計數單位及正常值為（0.8～2.0）×109/L。

1.4 統計學方法

采用SPSS 17.0統計學軟件，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用配對t檢驗，檢驗水準α=0.05，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

DC/CIK細胞治療前后，63例癌癥患者WBC、RBC、PT和LYM等血細胞計數的變化無統計學意義（P>0.05），見表1。

表1 63例患者接受DC/CIK細胞治療前后血細胞計數的變化（x±s）

3 討論

血液是流動于心血管內的液態組織，又稱外周血，由RBC、WBC、PT和血漿組成[6]。各類血細胞均起源于造血干細胞[7]。

WBC為無色、有核的細胞，在血液中一般呈球形。WBC的主要功能是機體的防御和免疫功能[8，9]。WBC所具有的變形、游走、趨化、吞噬和分泌等特性是執行防御功能的生理基礎[7]。近年文獻報道，白細胞計數與癌癥死亡率[10]、肺癌發病[11]等密切相關。由此可見，維持WBC在正常范圍內變化，保持相對平衡，臨床意義重大。本研究證實，63例癌癥患者在DC/CIK細胞治療前后白細胞計數的差異并無統計學意義（P>0.05），說明DC/CIK細胞治療對WBC幾乎沒有細胞毒作用。

正常成熟RBC無核，呈雙凹園碟形，其主要功能是運輸氧氣和二氧化碳[7]。RBC水平的高與低，必然導致人體生理病理學改變。如，RBC分布寬度增加與癌癥死亡風險增加有關[12]；輸注衰老的RBC有促進癌癥進展的風險[13]；RBC減少可引起癌癥患者貧血，嚴重影響抗癌治療的進行。然而，DC/CIK細胞治療并不抑制RBC，這就解釋了DC/CIK細胞治療前后RBC的差異并無統計學意義（P>0.05）的原因。

PT體積小，無細胞核，呈雙面微凸的圓盤狀。血小板維持血管壁的完整性，具有粘附、釋放、聚集、收縮和吸附等生理特性，參與凝血和止血過程[7]。在某些病理情況下，血小板也與腫瘤轉移、侵襲和進展相關[14]。我們的研究表明，DC/CIK細胞治療前后PT的差異無統計學意義（P>0.05）。

LYM 分為T淋巴細胞、B淋巴細胞和自然殺傷細胞（natural killer，NK）三類。T淋巴細胞和B淋巴細胞分別與細胞免疫和體液免疫有關，而NK細胞是機體天然免疫的重要執行者[7]。人體的免疫功能在抗腫瘤免疫中發揮著重要的作用。除此之外，循環T淋巴細胞和輔助性淋巴細胞計數可能還是預測腫瘤對放化療療效的有效標志物[15]。基于本研究的結果，我們沒有發現DC/CIK細胞治療前后LYM 的差異有統計學意義（P>0.05）。

CIK細胞是一群異質性且同時具有 T細胞和NK細胞表型的免疫效應細胞。在臨床前試驗和動物腫瘤模型中，CIK細胞表現出強大的抗腫瘤活性，增殖速度快，對多種腫瘤有殺傷作用[16]。DC細胞是目前已知的功能最強的抗原提呈細胞[17]。它將腫瘤抗原提呈到T淋巴細胞，然后誘導特異性細胞毒性T細胞抵抗腫瘤抗原。CIK細胞能夠直接殺傷腫瘤細胞，兩種細胞聯合應用可提高抗腫瘤效果[18]。DC/CIK細胞治療安全有效，副作用十分輕微[19]。與此相反，抗腫瘤的放療和化療雖能治愈部分腫瘤患者，但因其重大的毒副反應，相當一部分患者不能耐受，因而拒絕放化療或被迫中斷放化療，多數患者最終死于腫瘤進展。通過對本組63例癌癥患者血細胞的分析發現，RBC、WBC、PT、LYM在DC/CIK細胞治療前后的變化并無統計學差異，說明DC/CIK細胞治療的安全性，也為日后大規模臨床應用DC/CIK細胞治療奠定了堅實的基礎。

綜上所述，DC/CIK細胞治療幾乎沒有血液學毒副反應，其可能的原因是DC/CIK細胞治療對正常骨髓及脾細胞無細胞毒活性[20]。DC/CIK細胞治療特別適合手術、放療、化療后癌癥患者的輔助治療或因年老、體弱根本不能耐受放療、化療的癌癥患者。

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（收稿日期：2015-04-10）