鬼箭羽抗心肌缺血作用的實驗研究

趙成國，秦書芝，2，張 瑤，夏 婷，肖洪彬

1吉林大學珠海學院，廣東 珠海 519041；2黑龍江中醫藥大學

鬼箭羽抗心肌缺血作用的實驗研究

趙成國1，秦書芝1，2，張 瑤1，夏 婷1，肖洪彬2△

1吉林大學珠海學院，廣東 珠海 519041；2黑龍江中醫藥大學

目的：探討鬼箭羽抗大鼠急性心肌缺血損傷的作用機制。方法：將健康Wistar大鼠經ECG篩選后隨機分為鬼箭羽高、中、低劑量組，模型組，假手術組，陽性對照組，每組10只。采用冠狀動脈結扎法建立大鼠急性心肌缺血模型，檢測血清中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、谷草轉氨酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)、血清丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、一氧化氮(NO)等指標。結果：鬼箭羽高、中劑量組能降低模型大鼠血清CK、CK-MB、AST、LDH和MDA水平，提高模型大鼠血清SOD、NO含量，與模型組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。結論：鬼箭羽對急性心肌缺血大鼠的心肌細胞具有一定的保護作用，有一定防治心肌缺血的作用。

急性心肌缺血；冠狀動脈結扎；鬼箭羽；心肌酶

鬼箭羽為衛矛科植物(Euonymusalatus B u c h.)，又名衛矛。味苦、辛，性寒，入肝脾經，具有活血化瘀、破血、通經之功，用于治療癥瘕、閉經、產后瘀滯腹痛等癥［1］。主要含有黃酮類、甾體類、多糖等多種化學成分［2］。具有抗心肌缺血、降血糖及延緩動脈粥樣硬化等作用［3-4］。本實驗探討鬼箭羽抗急性心肌缺血的藥理作用及作用機制，為新藥開發及指導臨床用藥提供依據。

1 材料與方法

1.1 實驗用藥 鬼箭羽水提物(簡稱鬼箭羽，16.13 g生藥/g)由黑龍江中醫藥大學中藥化學實驗室提供；陽性對照藥為心得安片(常州康普藥業有限公司，批號：0509011)。

1.2 實驗動物 選Wi star大鼠，體質量180～220 g，雌雄各半，由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供。實驗動物合格證號：黑動字第P00101006號。

1.3 實驗儀器 L i sa300全自動生化分析儀(法國)；M ed l ab多通道生物信號分析系統(南京美易科技有限公司)；H X-200動物呼吸機(成都泰盟科技有限公司)；755型分光光度計(山東高密分析儀器廠)；電子天平(梅特勒－托利多儀器有限公司)；K D C-40離心機(科大創新有限公司)。

1.4 主要試劑 肌酸激酶(C K)試劑盒(批號：090061)；肌酸激酶同工酶(C K-M B)試劑盒(批號：100031)；乳酸脫氫酶(L D H)試劑盒(批號：130021)；谷草轉安酶(A S T)試劑盒(批號：120032)，以上試劑盒均購于中生北控生物科技有限公司。丙二醛(M D A)試劑盒(批號：20100621)；超氧化物岐化酶(S O D)試劑盒(批號：20101109)；一氧化氮(N O)試劑盒(批號：20101217)，均購于南京建成生物工程研究所。

1.5 方法

1.5.1 分組及給藥 將健康Wi star大鼠進行E C G篩選，棄去S-T段、T波及心律異常者。將篩選合格大鼠隨機分為鬼箭羽高、中、低組劑量組，模型組，假手術組，陽性對照組，每組10只。鬼箭羽高、中、低組給藥劑量分別為12.0、6.0、3.0g/k g。模型組和假手術給予同體積蒸餾水，陽性對照組劑量為2.8m g/k g。均灌胃給藥。1次/d，給藥7天。

1.5.2 模型制備 大鼠末次給藥2小時后，戊巴比妥麻醉(30m g/k g)，備毛，分離肌肉層，剪斷第四、五肋骨，氣管插管，連接呼吸機輔助呼吸(吸呼比為1∶2，頻率為64次/m in，潮氣量為12m L/k g)。鈍性分離心包膜，暴露心臟，結扎冠狀動脈左前降支，結扎后放回心臟，關閉胸腔，縫合肌肉及皮膚。模型制備過程中大鼠死亡8只，其中假手術組2只，模型組1只，鬼箭羽高組2只、中組2只，陽性對照組1只，均為手術過程中痰液清理不及時窒息死亡。

1.5.3 血樣采集與處理 結扎5小時后，下腔靜脈取血，離心(3 000轉，l0分鐘)取血清，測定C K-M B、C K、L D H、M D A等指標。

1.5.4 梗死面積計算 取血后迅速剪下心臟，生理鹽水沖洗，清除血管及脂肪組織，吸去水分，全心稱重。將心臟置于冰箱中速凍，取出后由心尖至心底切成等厚5片，放入新配制的1%氯化三苯基四氮唑(TT C)溶液中，37℃恒溫水浴，染色15分鐘。染色后流水沖洗去除多余染料，梗死區不染色，未梗死區呈紅色。切取梗死區稱重，計算梗死面積(%)。

1.6 統計學方法 數據采用S P SS 10.0統計學軟件分析，計量資料以(±s)表示，采用方差分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對急性心肌缺血模型大鼠心肌梗死面積的影響 與模型組比較，各給藥組心肌梗死面積均減少，其中以鬼箭羽高、中組作用顯著，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 對急性心肌缺血模型大鼠心肌梗死面積的影響(±s)

表1 對急性心肌缺血模型大鼠心肌梗死面積的影響(±s)

注：同模型組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。

組別 例數 劑量/(g·kg-1) 梗死面積/%假手術組 8 - 0模型組 9 - 11.76±2.49鬼箭羽高組 8 12.0 8.39±1.95**鬼箭羽中組 8 6.0 9.46±2.21*鬼箭羽低組 10 3.0 9.97±1.78陽性對照組 9 0.0028 8.26±2.50**

2.2 對急性心肌缺血模型大鼠血清心肌酶CK、CK-MB、LDH及AST的影響 與模型組比較，假手術組血清C K、C K-M B、L D H、A S T含量均降低(P＜0.01)；鬼箭羽高、中組血清C K、C K-M B、L D H、A S T含量降低(P＜0.05)，見表2。

表2 對急性心肌缺血模型大鼠血清CK、CK-MB、LDH及AST的影響(±s)

表2 對急性心肌缺血模型大鼠血清CK、CK-MB、LDH及AST的影響(±s)

注：與模型組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。

組別 例數 劑量/(g·kg-1) 肌酸激酶/(U·L-1)肌酸激酶同工酶/(U·L-1)乳酸脫氫酶/(U·L-1)谷草轉氨酶/(U·L-1)假手術組 8 - 43.30±9.48**28.3±5.09**89.9±12.4**212.2±21.3**模型組 9 - 75.10±18.00 44.0±9.83 158.7±22.8 333.3±43.5鬼箭羽高組 8 12.0 52.80±11.90**30.5±7.31**123.3±17.3**270.6±34.2**鬼箭羽中組 8 6.0 58.10±13.80*34.1±9.44 133.8±17.4*282.7±36.0*鬼箭羽低組10 3.0 65.60±16.60 37.8±7.45 142.3±20.2 298.7±38.7陽性對照組 9 0.0028 51.30±11.60**35.1±8.14**109.0±17.3**285.4±39.5**

2.3 對急性心肌缺血模型大鼠血清MDA、SOD、NO的影響 同模型組比較，假手術組M D A升高(P＜0.01)，S O D、N O均下降(P＜0.01)；鬼箭羽高、中組血清M D A含量降低(P＜0.05)，S O D、N O升高(P＜0.05)，其差異有統計學意義，見表3。

表3 對急性心肌缺血大鼠血清MDA、SOD及NO的影響(±s)

表3 對急性心肌缺血大鼠血清MDA、SOD及NO的影響(±s)

注：與模型組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。

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3 討論

冠心病是一種由冠狀動脈粥樣硬化或痙攣導致其狹窄或堵塞引發的心肌缺血缺氧性病變［5-9］。近年來，隨著人民生活水平的提高，冠心病的發病率逐年上升，作為高發病率、高危險性、高死亡率的重大疾病嚴重威脅著人類的健康［10-12］。心肌缺血缺氧使心肌細胞受損，導致多種酶體大量釋放進入血液。因此，檢測血中相關酶的活性變化可反映心肌壞死的演變過程，這些酶學指標有L D H、A S T、C K等［13］。M D A是脂質過氧化產物，可作為脂質過氧化反應強弱的指標，所以檢測M D A的含量可間接反映細胞損傷的程度［14-15］；超氧化物歧化酶(S O D)的活力可反映機體清除氧自由基的能力，可對缺血的心肌起保護作用［16-17］；N O具有減弱心肌收縮力的作用，使心肌耗氧量減少［18］。

本研究表明，鬼箭羽能夠縮小冠狀動脈結扎引起的模型大鼠心肌梗死面積，能降低模型大鼠血清C K、C K-M B、A S T、L D H、M D A的含量，提高模型大鼠血清N O、S O D含量，說明鬼箭羽可通過不同途徑對心肌細胞起保護作用，具有一定的抗心肌缺血作用。

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Experim entalStudieson the Anti-ischem ic Function of GuiJianYu

ZHAO Chengguo1,QIN Shuzhi1，2,ZHANG Yao1,XIA Ting1,XIAO Hongbin2△
1 ZhuhaiCollege of Jilin University,Zhuhai519041,China; 2 Heilongjiang University of Chinese Medicine

Objective:To evaluate themechanism of GuiJianYu fighting against the impairment induced by acutemyocardial ischem ia(AM I)in rats.Methods:A fter performed ECG screening,the healthyW istar ratswere random ly divided into the high,middle and low dose groups of GuiJianYu,themodelgroup,the sham group aswellas the positive control group w ith 10 cases in each.The AM Imodelswere established by coronary artery ligation and the levelsof serum creatine kinase(CK),creatine kinase MBmass(CK-MB),aspartate am inotransferase(AST),lactate dehydrogenase(LDH),serum malondialdehyde(MDA),superoxide dismutase(SOD)and nitric oxide(NO) were detected in differentgroups.Results:The levelsof ratsserum CK,CK-MB,AST,LDH and MDAmarkedly decreased in the high and m iddle dose groups of GuiJianYu and the serum SOD and NO significantly increased,and the differences in comparing these groupsw ith themodelgroup had statisticalmeaning(P＜0.05).Conclusion:Gui－JianYu has certain protective function for the themyocardial cells of the AM Irats and can prevent AM Ioccurrence in a certain degree.

acutemyocardial ischem ia AM I;coronary artery ligation;GuiJianYu(euonymusalatus); myocardium enzyme

R285.5

A

1004-6852(2015)03-0019-03

2014-02-10

趙成國(1978—)，男，碩士學位，講師。研究方向：中藥分析及藥理學。

△通訊作者：肖洪彬(1957—)，男，博士后合作導師，博士研究生導師，教授。研究方向：方劑配伍規律及方劑療效客觀化的研究。