HPLC法測定香菊膠囊中總黃酮的含量

隆旭紅，金文麗，劉光斌

1嘉峪關市食品藥品檢驗所，甘肅 嘉峪關 735100；2酒泉醫院

HPLC法測定香菊膠囊中總黃酮的含量

隆旭紅1，金文麗1，劉光斌2△

1嘉峪關市食品藥品檢驗所，甘肅 嘉峪關 735100；2酒泉醫院

目的：建立HPLC測定香菊膠囊中總黃酮含量的方法。方法：采用Unimicro Technologies, Inc.4.6×250 Daiso SP-120-5-ODS-AP色譜柱，梯度洗脫，流動相A為甲醇，B為0.05mol/L磷酸溶液，流速為0.8mL/min,檢測波長為257nm，室溫下進樣量20μL。結果：線性范圍分別為10.34～165.36μg/mL(R2=0.9999),平均回收率為100.6%，RSD為0.56%(n=9)。結論：該方法簡便、準確、靈敏、重現性好，可作為香菊膠囊中總黃酮含量的測定方法。

高效液相色譜法；香菊膠囊；總黃酮；含量測定

香菊膠囊是治療急慢性鼻竇炎、鼻炎的特效中成藥。化香樹果序是該藥治療鼻竇炎以及傷風鼻塞、鼻窒(急慢性鼻炎)的主藥，具有清熱解毒、活血化瘀、消腫排膿、通竅止痛的功效，主要化學成分為黃酮類化合物，具有抗菌、消炎、抗突變、降壓、鎮靜、利尿、抗氧化等功效［1］。現代研究表明鼻竇炎的病因是病菌感染，致病菌多為化膿性桿菌如肺炎雙球菌、溶血性鏈球菌等，其次為桿菌，如流感桿菌、大腸埃希菌等，多數為混合感染，而黃酮類化合物具有較強的抗菌作用［2］。因此建立定量檢測總黃酮含量的方法，用于香菊膠囊質量控制是非常必要的。

1 儀器與試藥

L C-20A T高效液相色譜儀；U-3900H紫外-可見分光光度計；M E TT L ERE L204-I C、M E TT L ER M S205D U電子天平。甲醇為色譜純；磷酸為分析純；水為超純水；蘆丁對照品(100080-200707)購自中國食品藥品檢定所；樣品香菊膠囊由山東步長制藥股份有限公司生產(批號：130451)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性實驗 色譜柱：U ni m i cro T ec h n o l o g i es，I n c.4.6×250 D a i so S P-120-5-O D S-A P；流動相：甲醇為流動相A，0.05m o l/L磷酸為流動相B；流速：0.8 m L/m in，檢測波長：257 n m，進樣體積：20μL，梯度洗脫；理論板數以蘆丁峰計，應不低于3 000，見表1、圖1。

表1 梯度洗脫程序

圖1 色譜圖

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品25.84 m g，置25 m L量瓶中，加甲醇約20m L水浴微熱使溶解，放冷，再用甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。

2.3 對照品溶液的制備 精密量取對照品溶液2.0m L置50m L量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。

2.4 供試品溶液的制備 取供試品60粒的內容物，精密稱定，混勻，取內容物約3 g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙醚120m L，加熱回流2小時，放冷，棄去乙醚液。再加甲醇90m L，加熱回流2小時，移至100m L量瓶中，用甲醇洗滌容器，洗液并入量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。

2.5 線性關系考察 取上述對照品溶液，分別進樣5、10、20、40、60、80μL，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程為A=8.70×105C-4.07×105(r2=0.9999)，表明濃度與峰面積在10.34～165.36μg/m L范圍內呈良好的線性關系。

2.6 檢出限與定量限 精密量取對照品溶液，用甲醇逐級稀釋后取20μL在“2.1”項色譜條件下測定，記錄色譜圖，并對色譜系統進行基線檢測。分別以信噪比3∶1與10∶1考察檢測限和定量限。檢出限為0.02μg/g，定量限為0.06μg/g。

2.7 精密度實驗 精密量取對照品溶液20μL，連續進樣5次，記錄色譜圖，以峰面積計算，RS D為0.47%。結果表明儀器的精密度良好。

2.8 穩定性實驗 取混合對照品溶液，按“2.1”項色譜條件，于0、2、4、8、12、24小時進樣，記錄色譜圖，結果峰形無改變，峰面積的RS D為0.64%，表明對照品溶液在24小時內穩定。

2.9 加樣回收率實驗 取已測總黃酮含量的同一批號(130451)約3 g，共9份，3份為1組，分別精密加入對照品溶液3.2、4.0、4.8 m L，即按對照品溶液濃度的80%、100%、120%配制，置100m L量瓶中，按“2.4”項制備，在“2.1”項色譜條件下，按外標法以峰面積計算回收率，平均回收率為100.6%，RS D為0.56%(n=9)。結果表明本法有良好的回收率。

2.10 重復性實驗 選取市售同一批號(130451)樣品60粒的內容物，精密稱定，混勻，精密稱取約3 g共5份，按“2.4”項制備。分別精密量取混合對照品溶液和供試品溶液20μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算其含量，結果分別為：10.26、10.47、10.44、10.41、10.36m g/粒，RS D為0.79%。

2.11 耐用性實驗 對照品溶液和供試品溶液于“2.1”項色譜條件下，分別用下列色譜柱測定：T h er m o O D S-2 H YP ERS I L 250mm×4.6mm，5μm色譜柱；I n erts i l O D S(250 mm×4.6 mm，5μm)色譜柱，結果表明含總黃酮分別為10.42 m g/粒，RS D=0.68%(n=5)；10.34m g/粒，RS D=0.82%(n=5)，且峰形良好，各性能參數均達實驗要求，說明本法耐用性好。

3 討論

3.1 波長的選擇 通過紫外可見分光光度計在190～330 n m的波長范圍內進行掃描，在257 n m波長處均有良好的吸收，故本研究選擇在257 n m測定。

3.2 色譜條件的選擇 先采用乙腈-水為流動相，不斷改變比例，出峰時間太快且峰形不好，再選擇甲醇-水為流動相，不斷改變比例，峰面積不穩定，且峰形不好。故本研究選擇甲醇-0.05 m o l/L磷酸溶液，進行梯度洗脫，能夠保證各參數的要求，并能保證供試品中被檢成分與相鄰峰之間的分離度。

3.3 樣品的預處理［3］先采用甲醇超聲30分鐘提取，過濾，測定，得到的總黃酮量少，提取不完全，且雜質較多，分離不好。本研究先用乙醚加熱回流提取2小時，棄去乙醚液，再用甲醇加熱提取2小時，使黃酮類化合物被提取到甲醇液中，保證了提取液成分的較單一性和提取的完全性，達到含量的準確性，且分離度符合要求。

［1］ 黃河勝，馬傳庚，陳志武.黃酮類化合物藥理作用研究進展［J].中國中藥雜志，2000，25(10)：589-592．

［2］ 高蓉，李穩宏，劉明霞，等.化香樹果序中總黃酮不同提取方法對比研究［J].食品科學，2007，28(8)：230-232．

［3］ 李冬，李穩宏，廉媛媛，等.化香樹果序總黃酮提取動力學研究［J].天然產物研究與開發，2011，23(4)：689-708.

The HPLC Determ ination of Total Flavonoids in XiangJu Capsules

LONG Xuhong1,JINWenli1,LIU Guangbin2△
1 Jia Yuguan Institute for Food and Drug Control,Jia Yuguan 735100,China;2 Jiugang Hospital

Objective:To establish a HPLCmethod for determ ination of total flavonoids in XiangJu capsules. Methods:The HPLC conditionswere follows:chromatographic column:unimicro technologies,Inc.4.6×250 Daiso SP-120-5-ODS-AP;gradient elution;mobile phase:A wasmethanol and B was 0.05 mol/L phosphoric acid;flow rate:0.8m L/m in;detection wavelength:257 nm;injection volume under room temperature:20μL.Results:The linear range of total flavonoidswas from 10.34 ug/m L to 165.36μg/m L(R2=0.999 9),the average recovery ratewas 100.6%and RSD was0.56%(n=9).Conclusion:Themethod iseasy,accurate and sensitivew ith good reproduction, therefore itcan beused to determ ine the contentsof total flavonoids in XiangJu capsules.

HPLC;XiangJu capsule;total flavonoids;contentdeterm ination

R284

A

1004-6852(2015)03-0032-03

2014-02-22

隆旭紅(1968—)，男，副主任藥師。研究方向：藥物分析。

△通訊作者：劉光斌(1970—)，男，主任藥師。研究方向：藥物分析、醫院制劑及臨床藥學。