2012～2014年尿液標本病原菌的分布特征及耐藥性分析*

羅文英，吳顯勁，麥 奇，林 湛，許藍月(廣東醫學院附屬醫院檢驗科，廣東湛江 524001)

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·論 著·

2012～2014年尿液標本病原菌的分布特征及耐藥性分析*

羅文英，吳顯勁，麥 奇，林 湛，許藍月(廣東醫學院附屬醫院檢驗科，廣東湛江 524001)

目的 探討該院尿路感染患者的臨床分布和耐藥性特征，為臨床診治尿路感染提供參考依據。方法 收集2012～2014年該院住院或門診患者的尿液標本中分離培養獲得的菌株數據進行統計分析。結果 該院尿路感染患者不同年份男女性別比較差異有統計學意義(P<0.05)。以泌尿外科、腎病內科、神經內科、顱腦外科居多，致病菌主要以革蘭陰性菌為主，分離菌以大腸埃希菌居首位。腸桿菌科細菌對碳青霉烯類藥物厄他培南、亞胺培南的耐藥率最低，其耐藥率為0.0%～25.9%，但在2014年耐藥率相對于前2年均有升高表現。有些致病菌在2014年的耐藥率低于2012、2013年。結論 該院尿路感染患者呈逐年遞增趨勢，每年感染菌株種類有所不同，開展耐藥機制研究對臨床合理、規范用藥及防治泛耐藥或全耐藥菌株很有幫助。

尿路感染； 細菌培養； 耐藥

尿路感染是臨床常見的感染性疾病之一，由于廣譜抗菌藥的廣泛使用和臨床抗菌藥物的不合理應用，尿路感染病原菌的耐藥性也越來越顯著，導致尿路感染治愈難度加大。為了解本院尿液標本的臨床分布特征和耐藥性變遷，為臨床診治尿路感染提供參考依據，回顧性分析本院2012～2014年尿液標本病原菌的臨床分布特征和耐藥性特征，現將有關情況報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 收集2012～2014年本院住院或門診患者的尿液標本中分離培養獲得的菌株，剔除同一患者同一部位重復分離菌株。

1.2 標本采樣及菌株鑒定 嚴格按照《全國臨床檢驗操作規程》3版及《臨床微生物尿道感染實驗室操作規范》進行[1]。

1.3 儀器與試劑 應用法國生物梅里埃公司VITEK2 COMPACT全自動細菌鑒定及藥敏分析系統進行菌株鑒定及藥敏試驗，部分手動藥敏試驗采用K-B紙片擴散法，參照美國臨床實驗室標準化委員會2011～2013年版標準判斷藥敏試驗結果。念珠菌采用顯色平板鑒定和K-B法藥敏試驗。藥敏紙片購自英國Oxoid公司，哥倫比亞血瓊脂平板購自江門市凱琳公司，M-H瓊脂平板購自上海科瑪嘉公司，酵母菌鑒定試劑盒(比色法) 購自華鑫科技有限公司。

1.4 質量控制 以金黃色葡萄球菌ATCC 25923、大腸埃希菌ATCC 25922及銅綠假單胞菌ATCC27853進行質量控制。

1.5 統計學處理 所有數據用WHONET5.6軟件及SPSS13.0進行分析，計數資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 一般資料 2012～2014年尿液標本分離病原菌的性別分布狀況顯示，2012年男74例，女54例；2013年男211例，女239例；2014年男791例，女720例。不同年份之間性別分布數經χ2檢驗差異有統計學意義(χ2=6.309,P=0.043)。2012、2013、2014年平均年齡分別為60.92、60.02、61.90歲，最小年齡分別為0、1、1歲，最大年齡分別為92、93、95歲。

2.2 不同科室病原菌分布情況 2012～2014年病原菌在不同科室的分布情況顯示，不同年份不同科室間分離菌株經非參數檢驗具有明顯差異(χ2=128.362，P=0.000)。3年共分離病原菌2 748株，泌尿外科分離病原菌最多(704株，構成比為25.62%)，腎病內科其次(256株，構成比為9.32%)，神經內科第3(233株，構成比為8.48%)，顱腦外科第4(218株，構成比為7.93%)。

2.3 病原菌的分布特征 2012～2014年尿液標本不同年份分離病原菌的變化趨勢顯示，3年從臨床送檢的尿液標本中共分離培養出2 748株病原菌，其中革蘭陰性(G-)桿菌合計2 342株(構成比為85.23%)，革蘭陽性(G+)球菌合計307株(構成比為11.17%)，白色念珠菌合計為99株(構成比為3.23%)。主要菌株株數及構成比為：大腸埃希菌1 359株(構成比為49.45%)；肺炎克雷伯菌355株(構成比為12.92%)；銅綠假單胞菌212株(構成比為7.71%)，糞腸球菌172株(構成比為6.26%)，奇異變形桿菌135株(構成比為4.91%)，鮑曼不動桿菌145株(構成比為5.28%)，屎腸球菌94株(構成比為3.42%)，白色念珠菌99株(構成比為3.60%)，陰溝腸桿菌56株(構成比為2.04%)，摩根菌摩根亞種34株(構成比為1.24%)，弗勞地檸檬酸桿菌32株(構成比為1.16%)，金黃色葡萄球菌27株(構成比為0.98%)，表皮葡萄球菌14株(構成比為0.51%)，黏質沙雷菌黏質亞種14株(構成比為0.51%)。2014年病原菌分離數量均高出其他2年每年分離菌株數。黏質沙雷菌黏質亞種僅在2014年分離出。弗勞地檸檬酸桿菌及白色念珠菌僅在2013、2014年分離出，奇異變形桿菌及陰溝腸桿菌在2012年未分離出。

2.4 產ESBLs細菌檢出率 2012～2014年大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌產超廣譜β-內酰胺酶(ESBLs)菌株檢出情況顯示，2012年290株大腸埃希菌檢出產ESBLs菌104株，檢出率為35.86%；89株肺炎克雷伯菌檢出產ESBLs菌32株，檢出率為35.96%。2013年258株大腸埃希菌檢出產ESBLs菌129株，檢出率為50.00%；64株肺炎克雷伯菌檢出產ESBLs菌45株，檢出率為70.31%。2014年811株大腸埃希菌檢出產ESBLs菌413株，檢出率為50.92%；202株肺炎克雷伯菌檢出產ESBLs菌104株，檢出率為51.49%。

2.5 主要病原菌的藥敏結果 尿液培養主要分離細菌的耐藥率見表1～3。

表1 主要腸桿菌科對常用抗菌藥物的耐藥率(%)

注：-表示未檢測。

表2 主要非發酵菌對常用抗菌藥物的耐藥率(%)

注：-表示未檢測。

表3 主要G+菌對常用抗菌藥物的耐藥率(%)

注：-表示未檢測。

3 討 論

正常尿液是無菌的，尿路感染病原菌常于患者機體免疫力低下時侵入泌尿生殖系統引起原發或繼發性尿路感染。本研究分離出2 748株病原菌，病房以泌尿外科分離病原菌最多(共704株，構成比為25.62%)，腎病內科其次(共256株，構成比為9.32%)，神經內科第3(共233株，構成比為8.48%)，顱腦外科第4(共218株，構成比為7.93%)。由此可見，尿路感染患者主要來自于泌尿外科手術患者、長期臥床需要導尿患者或者原發性尿路感染患者，這與相關文獻報道相符[2-3]。因此，對于外科手術患者或需要長期導尿患者，需定時清潔消毒導尿工具，以防發生繼發性院內感染。本研究中，2012～2014年尿液分離標本性別分布差異具有統計學意義(P<0.05)，男性稍高于女性，這與其他文獻報道女性高于男性有所不同，考慮可能本院尿路感染原發性感染患者較少，主要為繼發性感染患者所致[4-5]。

2012～2014年分離病原菌主要以G-桿菌為主，構成比為85.23%，G+球菌構成比為11.17%，白色念珠菌構成比為3.23%。弗勞地檸檬酸桿菌及白色念珠菌僅在2013年及2014年分離出，奇異變形桿菌及陰溝腸桿菌在2012年未分離出，隨著時間變化，本院尿路感染患者致病菌也發生了改變。尿路分離菌以大腸埃希菌排在首位，與文獻[6-7]報道類似。排在第2、3位的為肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌，與文獻[4-5]報道又有所區別。可見，本院尿路感染患者大多以快速生長G-桿菌為主。糞腸球菌與鮑曼不動桿菌分別位居第4、5位。目前國內文獻大多限于尿路感染患者病原菌的臨床分布情況，但對于尿路致病菌的致病機制報道較少，尚有待于進一步探討。本研究中分離菌株逐年增加，一方面可能由于本院住院患者逐年增加，另一方面可能由于臨床醫生對合理用藥認識水平增加，尿液標本送檢率增加所致。2012年尿路標本中未分離出白色念珠菌，真菌分離率逐年升高，主要為白色念珠菌，對于日益增多的真菌感染，考慮主要原因是由于廣譜抗菌藥物大量使用，造成人體菌群失調，免疫力下降，條件致病菌大量繁殖所致，本研究中真菌對常用抗真菌藥物仍有很高的敏感性。

本院根據藥敏報告，若菌株對藥物耐藥率大于75.0%，建議臨床對此菌感染不宜選用上述各類抗菌藥物；若菌株對藥物耐藥率超過50.0%，提示應參照藥敏結果選用；若耐藥率超過40.0%，提示要慎重經驗用藥；耐藥率超過30.0%，提示預警信號。大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇異變形桿菌對哌拉西林/他唑巴坦、頭孢吡肟、頭孢他啶、妥布霉素耐藥率均小于30.0%。腸桿菌科細菌對碳青霉烯類藥物厄他培南、亞胺培南、美羅培南的耐藥率最低，但在2014年耐藥率相對于前3年均有升高表現，這與國內外報道相符[8-10]。腸桿菌科細菌碳青霉烯類藥物耐藥的主要機制是產碳青霉烯酶，碳青霉烯酶能水解大部分β-內酰胺類，對碳青霉烯類藥物水解率高，主要檢測方法有改良Hodge試驗，是檢測腸桿菌科細菌產碳青霉烯酶的表型方法，能檢測到活性較低的碳青霉烯酶，但該方法存在假陽性。而PCR方法則可更加準確地確證其產酶類型。及時開展耐碳青霉烯類菌株的耐藥表型與基因型檢測，對指導臨床合理使用抗菌藥物、延緩細菌耐藥表型產生、有效控制耐藥菌株播散具有十分重要的臨床意義，本實驗室有待于開展此類研究。本實驗室在2014年對大腸埃希菌及陰溝腸桿菌提供了替加環素手動藥敏試驗，敏感率100.0%，它是一種新型靜脈注射用甘氨酰四環素類抗菌藥物。本研究中，大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌產ESBLs菌株逐年增多，可能為此類菌株對β-內酰胺酶類藥物耐藥的原因之一，對于ESBLs菌株的出現“應避免長期應用第3代頭孢菌素或同類間頻繁更換”以減少細菌對ESBLs類抗菌藥物耐藥性的產生。本研究非發酵菌中，銅綠假單胞菌2012～2014年對氨芐西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦類藥物耐藥率小于30.0%，對頭孢吡肟、舒普深、妥布霉素、左氧氟沙星、阿米卡星及碳青霉烯類藥物耐藥率較低，但在2012～2014年相繼出現有耐藥率大于30.0%情況，提示要慎重使用此類藥物。鮑曼不動桿菌對大多數藥物耐藥率超過75.0%，提示鮑曼不動桿菌大多為全耐或泛耐菌株。為了給臨床提供更多藥物選擇，本院微生物室在2014年進行了舒普深、替加環素藥敏試驗，耐藥率均小于30.0%。糞腸球菌對氨芐西林、呋喃妥因、利奈唑胺、青霉素G、萬古霉素類藥物耐藥率均小于30.0%，尤其對利奈唑胺、青霉素G、萬古霉素類藥物敏感率為100.0%。屎腸球菌對利奈唑胺、奎奴普丁/達福普汀、替加環素、萬古霉素耐藥率小于30.0%。本研究中，有些致病菌在2014年的耐藥率低于2012、2013年，考慮可能與本院加強耐藥監測、臨床不斷規范抗菌藥物使用有關。

總之，本院尿路感染患者逐年增加，尿路感染主要致病菌是大腸埃希菌，每年感染菌株種類也有所不同，及時開展耐藥機制研究對臨床合理規范用藥，防治泛耐藥或全耐藥菌株很有幫助。

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Distribution characteristics and drug resistance analysis of pathogenic bacteria in urine specimens during 2012-2014*

LUOWen-ying,WUXian-jing,MAIQi,LINZhan,XULan-yue

(DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedHospitalofGuangdongMedicalCollege,Zhanjiang,Guangdong524001,China)

Objective To explore the clinical distribution and drug resistance characteristics of the patients with urinary tract infection in our hospital to provide the reference basis for clinical diagnosis and therapy of urinary tract infection.Methods The data of bacterial strains isolated from urinary specimens in hospitalized patients or outpatients from January 2012 to December 2014 were collected and statistically analyzed.Results The urinary tract infection in our hospital had statistical differences among different ages of male and female patients(P<0.05).The majority were in the departments of urology surgery,nephrology,neurology and craniocerebral surgery.Gram-negative bacteria and Escherichia coli were the main pathogenic bacteria.The resistance of Escherichia coli against ertapenem and imipenem was lowest，its resistance rates ranged 0.0%-25.9%．The drug resistance rate in 2014 presented an upward trend compared with the past two years.The drug resistance rate of some pathogenic bacteria in 2014 was lower than that in 2012 and 2013.Conclusion The patients with urinary tract infection in our hospital show an increasing trend year after year.The infection strains every year are different.Conducting the study of resistance mechanism is very helpful for the clinical reasonable and standard medication and prevention and treatment of pan-drug resistant strains.

urinary tract infection; bacterial culture; drug resistance

國家自然科學基金資助項目(81301478)；廣東醫學院博士啟動課題(XB1325)。

羅文英，女，博士，主管技師，主要從事病原菌致病機制及耐藥機制研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.18.002

A

1672-9455(2015)18-2650-04

2015-03-15

2015-04-24)