外周血淋巴細胞免疫分型早期預測結締組織病并發間質性肺病變的價值

張 亮，侯松萍，王 麗

（吉林大學中日聯誼醫院呼吸科，吉林長春130033）

外周血淋巴細胞免疫分型早期預測結締組織病并發間質性肺病變的價值

張 亮，侯松萍＊，王 麗

（吉林大學中日聯誼醫院呼吸科，吉林長春130033）

細胞免疫是人體免疫系統中非常重要的一部分，由T淋巴細胞各亞群的比例來進行調節和維持人體免疫內環境的穩定，現已發現越來越多的疾病發生和發展與T淋巴細胞亞群的變化有關。結締組織疾病常合并雙肺間質性病變，在此基礎上合并肺部感染時，常見的臨床癥狀有發熱、呼吸困難、咳嗽等，胸部CT表現為雙肺彌漫性間質性肺病變，臨床上有時很難將單純結締組織疾病造成的肺病變與結締組織疾病合并肺炎時造成的雙肺彌漫性病變鑒別清楚，治療上自然也難以抉擇是否給予糖皮質激素治療及是否加大抗感染強度。結締組織疾病常伴有體內免疫異常反應造成的肺損傷［1，2］，如果能及早發現體內的免疫異常反應，則對下一步如何治療疾病大有幫助。本文通過檢測結締組織疾病患者的外周血淋巴細胞免疫分型，探討其對于結締組織疾病出現肺彌漫性病變的原因是感染，還是免疫損傷所致提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取吉林大學中日聯誼醫院于2011年5月至2013年5月期間收治的25例結締組織疾病并發間質性肺病變患者。早期間質性肺病變的胸部CT影像表現：兩肺彌漫性分布的磨玻璃影、網狀陰影，診斷按2012年風濕病新版全套指南標準［3］。年齡24－80歲，平均54.2±16.8歲，其中男11例，女14例。結締組織疾病組病種構成為：類風濕關節炎7例，多發性肌炎7例，皮肌炎4例，干燥綜合征4例，系統性紅斑狼瘡3例，另選取25例健康人作為正常對照組，年齡30－77歲，平均52.2±15.7歲，其中男13例，女性12例。3例患者采取淋巴細胞免疫分型血液標本前使用激素，其余患者及健康對照組均未使用糖皮質激素。所有病例均排除合并肺部感染引起肺間質改變。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑：CD45－FITC／CD4－PE／CD8－ECD／CD3－PC5（貨號：6607013）；細胞裂解液：OptiLyse○RNO－lysing Solution（貨號：A11894）；流式細胞儀：Beckman Coulter FC500；以上所有試劑均購自美國Beckmen Coulter公司。

1.2.2 血液樣本制備：采集患者及正常健康人外周血2ml，加入到EDTA抗凝的真空管中，混勻。取三只流式細胞儀上樣管，分別命名為同型對照管和實驗管1和實驗管2，每管中均加入100μl抗凝全血，然后分別加入20μl同型對照抗體和CD45－FITC／CD4－PE／CD8－ECD／CD3－PC5抗體和CD45－FITC／CD56－PE／CD19－ECD／CD3－PC5，充分混勻，避光室溫孵育15min；然后向每管中加入紅細胞裂解液500μl，充分混勻，避光孵育10min后加入500 μl PBS，1 000r／min離心5min，棄上清，每管加入500μl鞘液，混勻，等待上機檢測。

1.2.3 指標測定：外周血淋巴細胞亞群及NK細胞檢測均采用流式細胞檢測技術，由我院中心實驗室專人操作檢測。

1.3 統計學分析采用GraphPad InStat軟件包，數據用ˉx±s表示，組間分析采用方差齊性分析及t檢驗，P＜0.05為差別有統計學意義。

2 結果

結締組織疾病組與健康人的外周血淋巴細胞免疫分型結果比較見表1。

表1 兩組外周血淋巴細胞免疫分型結果比較±s）

表1 兩組外周血淋巴細胞免疫分型結果比較±s）

注：＊示與正常對照組比較P＜0.05。

組別n CD3＋CD3＋CD4＋CD3＋CD8＋CD3－CD19＋CD3－CD56＋CD4＋／CD8＋結締組織疾病組25 70.8±12.5 37.5±7.5 31.0±11.8＊14.4±9.7 11.0±6.9＊1.43±0.56正常對照組25 66.2±5.0 36.3±3.9 25.3±3.4 13.3±3.7 15.3±5.2 1.46±0.25

3 討論

T細胞免疫是由于各種細胞亞群共同參與的結果，不同疾病可導致T淋巴細胞亞群發生不同程度的改變，如與健康人進行比較，可以客觀地反映機體的免疫狀況，判斷患者的病情進展快慢以及評價療效。間質性肺病可能與全身炎癥性紊亂和自身免疫損傷有關，在彌漫性肺疾病時，CD8＋T細胞被認為起細胞毒性或抑制性作用，依據抗原刺激不同而有差異［4］。本文研究結果顯示結締組織疾病組CD8＋淋巴細胞明顯高于正常對照組，說明此時體內發生免疫功能的紊亂，引起機體免疫性病變的發生、發展，從而導致結締組織疾病合并間質性肺炎的出現。因此，結締組織疾病活動初期合并間質性肺病變時，T淋巴細胞亞群的數量及功能改變可能早于其原發病的特異性免疫學指標的改變，如果能在這個階段對機體的免疫學異常進行干預，則對改善結締組織疾病和肺部病變的治療效果和預后大有益處，外周血淋巴細胞分型可幫助鑒別肺部間質病變是感染、還是免疫損傷所致。

CD56分子是自然殺傷細胞（NK細胞）表面主要的表面標記，NK細胞不僅是機體內的第一道免疫防御屏障，而且也具有免疫調節能力，NK細胞主要功能有：①抗腫瘤（免疫監視），尤其是對淋巴瘤、白血病殺傷作用最佳。②抗感染（免疫防御）：抗病毒、細菌、真菌等感染。③對T、B淋巴細胞、骨髓干細胞具有調控作用（免疫自穩）。本文研究結果顯示結締組織疾病組NK細胞明顯低于正常對照組，任英等報道NK細胞片段可能參與調節肺纖維化的進展［5］，具體作用機制還不清楚。

總之，在間質性肺病變中，外周血淋巴細胞免疫分型可能幫助鑒別結締組織疾病合并間質性肺炎是免疫損傷、還是感染所致，在今后的工作中，應進一步加大觀察標本的例數，同時對單純結締組織疾病造成的肺病變與結締組織疾病合并肺炎時的T細胞亞群的變化進行觀察，從而為臨床實踐提供更有效的實驗室依據。

［1］Fischer A，West SG，Swigris JJ，et al.Connective Tissue Disease－Associated Interstitial Lung Disease：A Call for Clarification［J］.Chest，2010，138（2）：251.

［2］Vij R，Noth I，Strek ME.Autoimmune－Featured Interstitial Lung Disease：A Distinct Entity［J］.Chest，2011，140（5）：1292.

［3］中華醫學會風濕病學分會.風濕病新版全套指南24個［J］.2012.

［4］Daniene J，Gaidamoniene D，Liubartaite M，et al.Subpopulations of T lymphocytes in patients with disseminated lung diseases［J］.Tubercle and Lung Disease，1995，Supplement（2）：76.

［5］任 英，朱 平.炎癥細胞及細胞因子在間質性肺病炎癥和纖維化中的作用［J］.細胞與分子免疫學雜志，2011，27（11）：1272.

2014－01－14）

1007－4287（2015）02－0237－02

＊通訊作者