致口腔黏膜下纖維化的檳榔銅含量測定及降低其含量的方法研究

藺琳，程麗紅 ，章佩

(江西省人民醫院，1、口腔科；2、內分泌科；3、藥劑科；江西 南昌330006)

銅與許多纖維化疾病都有著密切關系,口腔黏膜下纖維化(Oral submucous fibrosis,OSF)是一種慢性、隱匿性、具有癌變可能的炎性疾病，與咀嚼檳榔習慣有明顯的關系[1，2]。本研究采用原子吸收光譜法(火焰法)[3-5]檢測不同品牌的檳榔果中銅的含量，尋找到檳榔中銅的測定方法；再經過不同的處理方法處理檳榔果，檢測銅的含量，力求尋找到一種能夠有效降低檳榔中銅含量的方法，從而降低咀嚼檳榔對口腔黏膜的損傷。

1材 料與方法

1.1 儀器與試劑 AA(240FS+240Z)原子吸收光譜儀(美國瓦里安公司 Varian)。銅元素貯備液:C=1000μg/ml(天津市光復精細化工研究所),用時用0.5%硝酸逐級稀釋至所需標準使用液。試驗所用試劑為分析純,所用玻璃儀器均以硝酸(10%)浸泡24h以上,最后用水洗凈晾干。實驗用水為去離子水。

1.2 實驗方法 (1)取不同品牌的檳榔果沿縱軸剖開后置80℃烤箱中烘烤至恒重，用中藥藥碾將烤干的檳榔碾碎成粉末狀，稱取5g待測，每組重復20次。(2)取干燥檳榔果若干，分別浸入不同溶液中處理，蒸餾水浸泡組、鹽酸(hydrochloric acid，HCl)(0.1%)、HCl(0.5%)、 HCl(1.0%)，EDTA-Na2(0.01 mol/L)、EDTA-Na2(0.05 mol/L)、 EDTA-Na2(0.1 mol/L)，每組分為兩個時間組，時間分別為24、48h，處理后的檳榔置80℃烤箱中烘烤至恒重，用中藥藥碾將烤干的檳榔碾碎成粉末狀，稱取5g待測，每組重復20次。(3)銅含量的測定：將5g待測樣品放入50 ml錐形瓶中,加入 25ml混合酸(硝酸∶高氯酸=4∶1),加蓋浸泡過夜,置電熱板上消化,至低溫冒白煙,使樣品溶解為濕鹽狀態(切勿蒸干),以HNO3定容至10 ml,同樣做試劑空白試驗。將樣品和空白稀釋10倍后待測。在儀器工作條件下,對處理好的樣品進行測定,由該元素的校準曲線計算銅的含量。(4)統計學分析 數據用(x±s)表示。均數比較采用單因素方差分析。采用SPSS 18.0統計軟件分析完成,P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

見表 1、表 2。

表1 不同品牌檳榔中銅的含量(±s)

表1 不同品牌檳榔中銅的含量(±s)

注：各組檳榔銅含量兩兩比較，青果與其他各組比較，差別具有顯著性意義，#P<0.05,煙熏果與其他各組比較，差別具有顯著性意義，*P<0.05，其余5組之間差別均無顯著性意義。

5.71±0.72 5.20±0.67 5.60±0.91 4.95±0.52 5.31±0.71 15.36±1.54#10.62±1.07*品牌 銅含量(μg/g)小龍王皇爺友文胖哥賓之郎青果煙熏果

表2 不同處理后檳榔中銅的含量(x±s)

3 討論

銅與許多纖維化疾病都有著密切關系，例如Wilson’s肝纖維化、硬皮病肺纖維化、心肌纖維化等[6，7]。據報道，檳榔果中銅含量明顯高于其他咀嚼果類[8-10]；咀嚼檳榔后5~30min后口腔全唾液中可溶性銅的含量明顯升高，并且OSF病變組織中銅含量較正常黏膜者高[11]；有學者在體外培養的成纖維細胞中加入CuCl2發現膠原合成增加[12-14]，因此認為檳榔中富含銅是OSF致病因素之一。

我國湖南、湖北和江西等省的一些民眾喜嚼加工過的干檳榔，這幾個地方也是OSF的高發地區[15]。在不同的地區不同的檳榔生產廠家，加工檳榔的方法有所不同，從樹上摘下檳榔后有的僅經簡單處理，如青果、煙熏果，有的則經過較為復雜的加工流程，會加入不同的添加成分如桂枝油、蜂蜜、芝麻等。本研究檢測了各種品牌檳榔中銅的含量，發現各種品牌檳榔中都含有一定量的銅，其中青果及煙熏果中銅的含量較其他品牌為高，這表明在經過現有加工工藝加工后，能在一定程度上降低銅離子的含量，從而減少對黏膜的刺激和損傷。但從現有的檳榔咀嚼人群OSF發病率來看，還需設法進一步降低檳榔中銅離子的含量。

如何盡量減少銅離子的含量，對于預防檳榔咀嚼人群OSF的發生、降低其發病率、保護該人群的口腔健康有重要的意義。本研究嘗試用不同濃度HCl和EDTA-Na2處理檳榔不同時間，結果顯示除低濃度的HCl(0.1%24h)和EDTA-Na2(0.01mol/L24h)組外，其余各組均能有效地降低檳榔中銅離子的含量，其中 HCl(1.0%24h)、HCl(1.0%48h)組的效果最顯著，但這兩組差別無顯著性。這表明在檳榔加工過程中可以通過用一定濃度的HCl處理加工，特別是1.0%HCl處理檳榔，可降低成品檳榔的銅含量，從而降低咀嚼檳榔對口腔黏膜的損傷，這不僅能夠造福人民群眾，使檳榔咀嚼人群OSF發病率降低，同時亦可使檳榔加工企業獲得可持續發展,但本研究尚屬于實驗室研究階段，如需應用于檳榔加工工藝中還需進一步研究。

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