P r e mi e r H b 9 2 1 0糖化血紅蛋白分析儀性能驗證

鄧紀望，葉秋靈，高云翔，蔡燕玲，刁文連

(中山市大涌醫院，廣東 中山528000)

HbA1c是紅細胞中血紅蛋白與萄萄糖不可逆地進行非酶促蛋白糖基化反應的產物，其值反映了整個紅細胞半衰期(大約60d)的血糖水平并與這段時間的平均血糖水平有顯著的關系。隨著HbA1c在2型糖尿病的診斷和一級預防中的作用被人們所認可和重視[1,2],HbA1c的準確測定越來越重要。HbA1c檢測較OGTT試驗簡便易行，結果穩定，變異性小，且不受進食時間及短期生活方式改變的影響，患者依從性好。2010年ADA指南已將HbA1c≥6.5%作為糖尿病診斷標準之一。2011年WHO也建議在條件具備的國家和地區采用這一切點診斷糖尿病[3]。為了了解PremierHb9210糖化血紅蛋白分析儀配套檢測系統在本室能否達到廠家的分析性能指標以及我國《糖化血紅蛋白實驗室檢測指南》[4]的要求，是否適用于我室進行臨床檢測，我們對其分析性能進行了驗證，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 全部標本均來自2014年8-9月我院健康體檢、門診及住院患者，HbA1c檢測值在3.9%～6%之間有28例，HbA1c檢測值在6%～15%之間有18例，HbA1c檢測值超過15% 者2例，共48例，整個驗證過程未采集與患者隱私相關的個人信息。

1.2 儀器與試劑 Premier Hb9210全自動糖化血紅蛋白分析儀及配套試劑 (HPLC和硼酸鹽親和原理)，試劑 A(批號:4544)，試劑 B(批號:4423)，色譜柱 (批號：4551)，WASH(批號:4437) ，DIL( 批號:4479)。VARIA2全自動糖化血紅蛋白分析儀及配套試劑 (中山大學附屬中山醫院醫學檢驗中心，表1中用A代表)。

1.3 方法 嚴格按照校準程序進行儀器校準，方法評價期間每日測定2個水平定值質控品，在室內質控在控的情況下進行檢測。實驗方案如下。

1.3.1 準確度驗證 選用20個不同濃度的樣本，將其等分成兩份，一份在我室分別進行全血模式及手工稀釋模式檢測，一份送中山大學附屬中山醫院醫學檢驗中心用全血模式檢測，計算結果并進行比對，要求同時滿足：(1)相對偏差達到廠家聲明標準<5%；(2)絕對差值在±0.5%HbA1c內，以控制在±0.3%HbA1c為宜[4]；(3)配對資料 T檢驗差異無統計學意義。

1.3.2 攜帶污染評估

1.3.2.1 方案 根據說明書要求，需要準備兩個紅細胞比積大致接近的樣本，一個高HbA1c濃度值樣本，一個低HbA1c濃度值樣本，將低HbA1c濃度值樣本等分成11個樣本，將高HbA1c濃度值樣本等分成10個樣本，等分后共21個樣本。在分析這21個樣本時，不允許有其他樣本或測試在儀器上運行，分析時樣本必須按下列順序分析，否則實驗將會無效。樣本序列：3低/2高/1低/2高/4低/2高/1低/2高/1低/2高/1低。

1.3.2.2 計算攜帶污染(殘余值)=高-低結果的平均值—低-低結果的平均值、誤差限度=3倍的低-低結果的標準方差)、兩個水平的CV值。

1.3.2.3 要求 (1)每個水平的CV值計算要低于2%；(2)攜帶污染＜誤差限度。

1.3.3 精密度評價 根據EP15-A2文件[5]，對高、中、低3個濃度水平的HbA1c標本，每個標本每天檢測4次，每次間隔2h，共5d[6-8]。對每個濃度水平獨立進行精密度評價，計算其平均值、標準差和CV值。要求不精密度在廠家聲明的不精密度(≤2%)范圍。

1.3.4 線性范圍評估 參考 《臨床化學設備線性評價指南》[9]對線性范圍進行驗證，將接近分析儀檢測上限的高值樣本和檢測下限的低值樣本按不同比例混合成5個不同濃度的標本，濃度分別為A：100%低值，B：75%低值+25%高值，C：50%低值+50%高值，D：25%低值+75%高值，E：100%高值。混合均勻后將各個濃度的標本分別測定4次，取其均值，采用直線回歸方程進行數據分析，直線回歸方程，y=mx+b。 要求:0.97≤m≤1.03,R2≥0.95。

1.3.5 參考區間驗證 根據 《臨床實驗室檢驗項目參考區間的制定》[10]小樣本驗證方方案，選20例健康體檢人員樣本測定HbA1c，要求超出參考區間(HbA1c4%~6%)樣本≤2。

1.4 統計學處理 數據采用SPSS17.0統計軟件處理。對離群值的檢驗用格拉布斯(Grubbs)法，兩樣本均數比較，采用配對樣本t檢驗，P<0.05表示兩種方法的檢測結果之間的差異有統計學意義[11]。

2 結果

2.1 準確度及全血稀釋驗證 A：檢驗中心結果，B：全血模式結果，C：手工稀釋(1：150)模式結果；全部結果相對偏差滿足廠家聲明要求；絕對偏差滿足我國《糖化血紅蛋白實驗室檢測指南》的要求；配對資料T檢驗結果：A組與B組、A組與C組，B組與C組P值分別為0.718、0.673、0.936，兩者差異無統計學意義。見表1。

表1 準確度驗證結果

2.2 攜帶污染驗證 按照3低/2高/1低/2高/4低/2高/1低/2高/1低/2高/1低的順序HbA1c%結果為4.83、4.86、4.92、15.88、15.81、5.02、15.91、15.82、5.11、5.03、4.95、4.87、15.78、15.86、4.97、15.73、15.94、5.03，其中高-低標本檢測值(±s)為 5.02±0.057，CV%為 1.14%；低-低標本值(±s)為 4.93±0.069．CV%為 1.39%;攜帶污染為 0.09，誤差限度為0.21。所有結果均符合要求。

2.3 精密度驗證 對于3個不同水平的HbA1c樣本， 檢測結果 (HbA1c%，±s) 為 4.78±0.077、7.93±0.086、11.56±0.083，不精度 (CV%) 分別為 1.61、1.08、0.72，不精密度均符合要求。見表2。

2.3 線性范圍驗證 線性范圍驗證結果見表3，經回歸分析糖化血紅蛋白濃度在4.0%~18.7%內呈線性，直線回歸方程:y=1.005x-0.142。R2=1≥0.95，符合線性要求。

2.4 參考區間驗證結果 20例健康體檢者HbA1c(%)全部在參考區間4%~6%范圍內，驗證通過。

3 討論

在2002年，美國糖尿病學會(ADA)將HbA1c定義為糖尿病病人血糖監控的 “金標準”，HbA1c＜7%時，一般可采用飲食和運動療法。HbA1c＞7%時，不管OGTT的診斷是糖耐量減退還是糖尿病，均需要藥物治療。由于HbA1c在糖尿病管理中的重要作用，2010年ADA在其正式更新的指南中將HbA1c作為一種更快速、更簡易的診斷試驗推薦用于糖尿病的診斷[12]。由于HbA1c檢測儀器種類繁多，各實驗室的正常參考值亦存在一定差異[13]，為了規范HbA1c的檢測，我國 《糖化血紅蛋白實驗室檢測指南》對HbA1c分析系統的性能指標及使用做出了詳細規定，實驗室在引入這一項新技術或新設備時必須要對分析系統的性能進行驗證。

表2 精密度驗證結果

表3 線性范圍驗證結果

準確度驗證結果顯示相對偏差滿足廠家聲明要求；絕對偏差滿足我國《糖化血紅蛋白實驗室檢測指南》的要求；手工稀釋結果與全血結果差異無統計學意義。精密度驗證結果三個濃度水平不精度(CV%)分別為 1.61、1.08、0.72，與張傳寶等報道的基本一致[14]。攜帶污染驗證攜帶污染為0.09，誤差限度為0.21，符合要求。糖化血紅蛋白濃度在4.0%~18.7%內呈線性，與陳雨等報道一致[15]。參考區間驗證結果20例健康體檢者HbA1c(%)全部在參考區間4%~6%范圍內。由于缺少變異血紅蛋白標本，本文未對由此引起的干擾進行驗證。

綜上所述，Hb9210糖化血紅蛋白分析儀Premier在準確度、攜帶污染、精密度、線性范圍、參考區間等方面的驗證結果達到廠家聲明的分析性能指標以及我國《糖化血紅蛋白實驗室檢測指南》的要求，適用于我室臨床檢測糖化血紅蛋白A1c(HbA1c)。

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