細胞實驗室污染原因及有效預防控制措施的分析

邱小華 ，賀文鳳 ，梁茜 ，胡龍華

(南昌大學第二附屬醫(yī)院；1、分子醫(yī)學重點實驗室；2、檢驗科，江西 南昌330006)

實驗污染一直困擾著科研和臨床醫(yī)務工作者，污染可能導致實驗結果錯誤，甚至科研失敗，污染可能導致檢驗結果錯誤，延誤患者治療或治療失敗。細胞實驗室對環(huán)境要求更為嚴格，導致醫(yī)學細胞實驗室污染因素很多，如：實驗操作過程中產(chǎn)生的氣溶膠，帶有粉末、微生物的空氣進入無菌實驗室，污染試劑，操作技術人員無菌觀念較差，無菌操作不規(guī)范等等。Wedum[1]認為實驗室感染中65%以上的感染是由微生物氣溶膠引起的，而且微生物氣溶膠在一個實驗室內產(chǎn)生后,還可以通過氣流轉移到同一建筑物的其他地方,甚至污染整個建筑物的空氣[2]。近期，我科細胞實驗室短期內出現(xiàn)幾次細胞培養(yǎng)嚴重污染情況，對此，我們進行了污染原因分析，并采取了相應的預防措施，達到了預期的效果，現(xiàn)將調查報告如下。

1 材料與方法

1.1 采樣 針對3次嚴重污染情況，均采集無菌培養(yǎng)室不同方向的空氣，培養(yǎng)箱各個層面的氣體，凈化工作臺面棉拭子，凈化工作臺四個頂角及臺面中央同時采集了5個空氣點，可疑細胞培養(yǎng)基等。1.2培養(yǎng) 將采集的各種標本置入血平板培養(yǎng)基和PDA培養(yǎng)基，置37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h及48h，分別觀察血平板和PDA平板上細菌生長情況，根據(jù)生長情況，用VITEK2-Compact全自動微生物分析儀鑒定。

2 結果

干預前3次培養(yǎng)結果觀察見表1。

表1 干預前培養(yǎng)結果

干預前培養(yǎng)基內見大量連接成長鏈狀的芽生孢子并可見到大量菌絲。此外,在部分培養(yǎng)基中見到球形細菌，經(jīng)過革蘭染色為革蘭陰性球桿菌和革蘭陽性球菌，經(jīng)VITEK2-Compact全自動微生物分析儀鑒定為鮑曼不動桿菌和白念珠菌。

干預后未見培養(yǎng)基內克隆生長。

3 討論

3.1 主要對策 (1)75%的酒精擦拭凈化工作臺及培養(yǎng)箱：酒精消毒。酒精屬于醇類消毒劑，其優(yōu)點為作用較快，性能穩(wěn)定，基本無腐蝕性，無毒，而且滲透能力強，進入細菌體內使其蛋白質凝固，從而殺死細菌。但其缺點為對細菌芽孢及鮑曼不動桿菌和白念珠菌無效。以巴氏消毒液消毒地面及操作臺面,并以紫外線照射過夜。巴氏消毒液有效成分是次氯酸鈉，有很強的氧化性，但仍對細菌芽孢無效，消毒后對培養(yǎng)基、凈化工作臺、培養(yǎng)箱及室內空氣采樣培養(yǎng)，血平板仍見克隆生長。(2)甲醛(40%)10ml/m2,高錳酸鉀5g/m2，熏蒸細胞培養(yǎng)室：封閉熏蒸24h后，開窗通風，置換室內空氣中的甲醛，并以75%的酒精拭凈化工作臺及培養(yǎng)箱。甲醛與高錳酸鉀反應產(chǎn)生甲醛氣體，甲醛氣體能使菌體蛋白質變性凝固，溶解菌體類脂，殺滅物體表面和空氣中的細菌繁殖體、真菌芽胞和病毒[3-9]。消毒后對培養(yǎng)基、凈化工作臺、培養(yǎng)箱及室內空氣采樣培養(yǎng)，血平板均未見克隆生長。

3.2 預防控制措施 (1)嚴格執(zhí)行細胞實驗室規(guī)章制度：在運行中不斷完善無菌實驗室規(guī)章制度，并加強無菌實驗室的管理。對外來的進修人員、實習學生進入實驗室前要接受培訓和教育，在掌握了一定的基本理論與實驗技能、操作規(guī)程等，并在帶教老師的指導下方可進行實驗操作。(2)培養(yǎng)箱、無菌室、凈化臺定期消毒：凈化工作臺實驗前紫外燈消毒30min，實驗后再用75%的酒精擦拭臺面，對生物樣本和實驗廢棄物進行高壓蒸汽滅菌后，丟棄醫(yī)療廢物桶，無菌室以甲醛(40%)10ml/m2,高錳酸鉀5g/m2濃度定期封閉消毒[10，11]，甲醛氣體必須分布到房間的每個角落。(3)杜絕感染源的產(chǎn)生：盡量減少實驗人員頻繁出入細胞實驗室，進入實驗室必須穿隔離衣，實驗操作時動作輕柔，避免微生物氣溶膠的產(chǎn)生。一旦發(fā)現(xiàn)細胞污染，應立即查明原因，采取有效可靠方法徹底清除污染源，阻止細胞大面積污染。(4)控制實驗室濕度與溫度：鮑曼不動桿菌和霉菌等廣泛存在于自然界中，屬于條件致病菌，有著很強的繁殖能力，溫暖潮濕的環(huán)境，就會大量滋生[12-18]。必須控制室內溫度濕度，保持細胞室的干燥與清潔來阻止其繁殖或切斷其傳播途徑。

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