石榴皮多酚有效部位單次給藥毒性及對(duì)無(wú)水乙醇致大鼠胃潰瘍的保護(hù)作用

史李娜，王雪飛，馬桂芝，康金森，高曉黎

(新疆醫(yī)科大學(xué) 1.藥學(xué)院、2.藥理教研室、3.藥物分析教研室，新疆 烏魯木齊 830000)

石榴皮多酚有效部位單次給藥毒性及對(duì)無(wú)水乙醇致大鼠胃潰瘍的保護(hù)作用

史李娜1，王雪飛2，馬桂芝3，康金森2，高曉黎1

(新疆醫(yī)科大學(xué) 1.藥學(xué)院、2.藥理教研室、3.藥物分析教研室，新疆 烏魯木齊 830000)

目的 研究石榴皮多酚有效部位對(duì)小鼠單次給藥毒性,評(píng)價(jià)其安全性，為新藥研發(fā)和臨床用藥提供理論依據(jù)。觀察石榴皮多酚有效部位對(duì)無(wú)水乙醇致大鼠胃潰瘍的保護(hù)作用。方法 選擇健康昆明種小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別灌胃給予不同劑量的石榴皮多酚有效部位，連續(xù)觀察14 d，每日記錄各組小鼠一般情況、毒性反應(yīng)及死亡情況,采用Bliss 法計(jì)算半數(shù)致死量。選擇健康大鼠70只，隨機(jī)分為：正常組、模型組(等體積生理鹽水)、三九胃泰顆粒組(1 850 mg·kg-1)、枸櫞酸鉍鉀組(33 mg·kg-1)和石榴皮多酚有效部位低、中、高劑量組(430、852、1 704 mg·kg-1)，連續(xù)灌胃10 d；d 10,除正常組外，其余各組采用無(wú)水乙醇灌胃(每只1.5 mL)致大鼠胃潰瘍；計(jì)算各組胃潰瘍指數(shù)、潰瘍抑制率、觀察胃黏膜組織形態(tài)學(xué)改變、測(cè)定胃黏膜組織中PGE2、NO、SOD、MDA含量。結(jié)果 石榴皮多酚有效部位的半數(shù)致死量(LD50)為8 520.9 mg·kg-1,其95%的可信限范圍為(7 291.2～9 914.4) mg·kg-1；病理學(xué)顯示，給藥劑量為16 000 mg·kg-1的小鼠臟器有不同程度的損傷。實(shí)驗(yàn)表明，與模型組比較，石榴皮多酚有效部位對(duì)胃黏膜損傷有明顯修復(fù)作用，且明顯升高胃潰瘍大鼠胃黏膜NO含量、提高胃潰瘍大鼠胃黏膜SOD活性及降低MDA含量、增加PGE2含量。結(jié)論 石榴皮多酚有效部位給藥劑量為5 063 mg·kg-1未出現(xiàn)死亡，隨著石榴皮多酚有效部位給藥劑量的增加，給藥劑量為16 000 mg·kg-1可造成小鼠的心、肝、肺、腎臟有不同程度的損傷，甚至導(dǎo)致死亡。石榴皮多酚有效部位的LD50為8 520.9 mg·kg-1,其95%的可信限范圍為(7 291.2～9 914.4) mg·kg-1。石榴皮多酚有效部位對(duì)無(wú)水乙醇致大鼠胃潰瘍具有良好的保護(hù)作用，這種作用可能與促進(jìn)胃潰瘍上皮細(xì)胞合成、提高再生黏膜功能、增強(qiáng)抗氧化能力和誘導(dǎo)、促進(jìn)NO合成有關(guān)。

石榴皮多酚有效部位；單次給藥毒性；半數(shù)致死量；胃潰瘍；PGE2;NO;SOD;MDA

消化性潰瘍(PU)是發(fā)生在胃和十二指腸的慢性潰瘍，是消化系統(tǒng)的常見(jiàn)病、多發(fā)病[1],目前以攻擊因子[2](主要指胃酸、胃蛋白酶)與防御因子[3-7](主要包括胃黏膜血流量、碳酸氫鹽和黏液的分泌、細(xì)胞膜完整性、細(xì)胞再生以及前列腺素生成等)失衡為主[8]。石榴(PunicagranatumL.)別名安石榴、甘石榴等,是石榴科石榴屬的落葉灌木或小喬木[9]。我國(guó)引入栽培后，各省都有分布，其中，新疆石榴的栽培面積和產(chǎn)量均居全國(guó)第一，是新疆和田、喀什等產(chǎn)地特色果品。其果皮、籽、花均可入藥，以石榴皮的藥用最為顯著。近年的藥理學(xué)研究表明，石榴皮具有抗氧化[10]、抗炎、廣譜抗菌、抗病毒[11]、抗癌[12]、降血糖[13]、降脂、預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化[14]、保護(hù)心血管系統(tǒng)[15]、保護(hù)消化性潰瘍[16]、降低神經(jīng)退化、免疫調(diào)節(jié)、改善腎功能[17]、抗腹瀉等藥理作用。研究證明，石榴皮提取物對(duì)多種原因引起的消化系統(tǒng)有保護(hù)作用，如石榴皮提取物對(duì)大鼠阿司匹林和酒精引發(fā)的胃潰瘍有保護(hù)作用[18]。石榴皮多酚有效部位以安石榴苷、鞣花酸、沒(méi)食子酸為主要成分。本實(shí)驗(yàn)以中試制備的石榴皮多酚有效部位為供試物，觀察其對(duì)小鼠的單次給藥毒性及對(duì)無(wú)水乙醇致大鼠胃潰瘍的保護(hù)作用，為其進(jìn)一步的臨床開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 昆明種小鼠，SPF級(jí)，♀♂各半，體質(zhì)量20～22 g，由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供, 合格證號(hào)：SCXK(新)2003-0001。Wistar 大鼠，SPF級(jí)，♀♂各半，體質(zhì)量180～220 g,由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SYXK(新)2011-0004。

1.1.2 藥物與試劑 石榴皮(采集于新疆喀什市疏附縣伯什克然木鄉(xiāng)、阿瓦提鄉(xiāng))；石榴皮多酚有效部位(新疆醫(yī)科大學(xué)藥劑教研室制備，批號(hào)：20121212)；三九胃泰顆粒(華潤(rùn)三九制藥有限公司，批號(hào)：1307014)；枸櫞酸鉍鉀顆粒(麗珠集團(tuán)麗珠制藥廠，批號(hào)：1308351)；一氧化氮測(cè)試盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20140307)；丙二醛測(cè)試盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20140310)；SOD試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20131129);PGE2試劑盒(上海原葉進(jìn)口分裝，批號(hào)：20140301A)；考馬斯亮蘭試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20140417)。

1.1.3 儀器 AL204-N電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；TD5A-WS離心機(jī)、TDL-5M冷凍離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；HH-S4數(shù)星恒溫水浴鍋(金壇市醫(yī)療儀器廠)；680 酶標(biāo)儀(日本)；DHP-9082電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科技有限公司)；UV-2550紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津)；游標(biāo)卡尺(上海九量五金工具有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 石榴皮多酚有效部位中試工藝流程

1.2.2 石榴皮多酚有效部位最大濃度的配制方法 精密稱(chēng)取中試產(chǎn)品石榴皮多酚有效部位粉末4.35 g，用3 mL生理鹽水配成1 450 g·L-1混懸液。

1.2.3 石榴皮多酚有效部位對(duì)小鼠單次給藥毒性試驗(yàn)

1.2.3.1 預(yù)試驗(yàn) 取昆明種小鼠10只，♀♂各半，每組5只，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，隨機(jī)分為2組：石榴皮多酚有效部位組和生理鹽水對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12 h后，石榴皮多酚有效部位組給藥量為29 000 mg·kg-1,按0.2 mL·10 g-1灌胃給藥1次，對(duì)照組灌胃等體積的生理鹽水，灌胃后連續(xù)觀察3 d，結(jié)果小鼠全部死亡。根據(jù)小鼠的死亡情況對(duì)給藥劑量作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，分別找出石榴皮多酚有效部位引起動(dòng)物死亡的LD100值(100%死亡率)、LD0值(0%死亡率)和相應(yīng)的劑量組間距r值，進(jìn)行LD50值的測(cè)定。經(jīng)預(yù)試驗(yàn)得出，石榴皮多酚有效部位的最小全致死量(Dm)為16 000 mg·kg-1，最大全不致死量(Dn)為5 000 mg·kg-1，正式試驗(yàn)設(shè)定5個(gè)劑量組，求出劑量比，確定r值為0.75。

1.2.3.2 石榴皮多酚有效部位半數(shù)致死量LD50的測(cè)定 昆明種小鼠50只，♀♂各半，體質(zhì)量18～22 g，按性別和體重隨機(jī)分為A、B、C、D、E 5個(gè)組，每組10只，各組劑量按1 ∶0.75的比例進(jìn)行設(shè)置為16 000、12 000、9 000、6 750、5 063 mg·kg-1；各組動(dòng)物禁食不禁水12 h后，分別以上述5個(gè)劑量的石榴皮多酚有效部位進(jìn)行灌胃，灌胃體積為0.2 mL·10 g-1，灌胃1次，灌胃后觀察每組小鼠給藥后的反應(yīng)并記錄小鼠的精神狀態(tài)、行為活動(dòng)、飲食飲水、死亡情況等，連續(xù)觀察14 d，對(duì)死亡小鼠及時(shí)解剖，肉眼觀察主要臟器體積、顏色和質(zhì)地的變化，對(duì)異常臟器進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

1.2.3.3 LD50計(jì)算 LD50采用Bliss幾率單位法進(jìn)行計(jì)算。

1.3 石榴皮多酚有效部位對(duì)無(wú)水乙醇致大鼠胃潰瘍的保護(hù)作用

1.3.1 動(dòng)物分組、造模與給藥 Wistar 大鼠70只，♀♂各半，體質(zhì)量180～220 g，按性別和體重隨機(jī)分為正常組、模型組(給予生理鹽水1 mL·100 g-1)、三九胃泰顆粒組(中藥對(duì)照組，1 850 mg·kg-1)、枸櫞酸鉍鉀顆粒組(西藥對(duì)照組，33 mg·kg-1)、石榴皮多酚有效部位低、中、高劑量組(給藥劑量根據(jù)LD50值的1/5、1/10、1/20計(jì)算為430、852、1 704 mg·kg-1)，每組10只。各組大鼠按設(shè)定劑量灌胃給藥，灌胃體積為1 mL·100 g-1,每天1次,連續(xù)灌胃給藥10 d。d 9給藥后禁食不禁水24 h[19],末次灌胃給藥2 h后,除正常組外，其余各組均灌胃給予無(wú)水乙醇，每只1.5 mL，制備急性胃黏膜損傷模型。1 h后[20]，處死大鼠，打開(kāi)腹腔并結(jié)扎賁門(mén)和幽門(mén)，向胃腔內(nèi)注入1%甲醛溶液2 mL,取出胃并浸入1%甲醛溶液中，30 min后沿胃大彎剪開(kāi)胃壁，展平，用冰生理鹽水沖洗胃內(nèi)壁，用小棉球輕輕將胃黏液及血凝塊擦掉，在10倍放大鏡下觀察胃黏膜損傷程度，胃黏膜的完整度、顏色，有無(wú)充血、水腫、糜爛、潰瘍及瘢痕組織增生等。

1.3.2 觀察指標(biāo)

1.3.2.1 胃黏膜潰瘍指數(shù)和潰瘍抑制率的計(jì)算 參照Guth[21]標(biāo)準(zhǔn)，以局限于胃上皮的糜爛、潰瘍、出血等的長(zhǎng)度累計(jì)積分，正常為0分，斑點(diǎn)糜爛計(jì)1分，糜爛長(zhǎng)度<1 mm計(jì)2分，1～2 mm計(jì)3分，3～4 mm計(jì)4分，>4 mm計(jì)5分，各分值相加為該動(dòng)物的損傷指數(shù)總分。按下列公式計(jì)算潰瘍抑制率：潰瘍抑制率/%=(對(duì)照組潰瘍指數(shù)-給藥組潰瘍指數(shù)) /對(duì)照組潰瘍指數(shù)×100%。

1.3.2.2 胃黏膜組織形態(tài)學(xué)觀察 從胃竇至胃體取一條狀組織，用4%多聚甲醛固定，梯度乙醇脫水，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察。

1.3.2.3 胃黏膜PGE2、NO、SOD、MDA含量測(cè)定 將“1.3.2.2”項(xiàng)下取完條狀組織后余下鼠胃，于冰浴上用濾紙吸干，迅速刮去胃黏膜，于-70℃冰箱貯藏，備用。稱(chēng)重，用冰生理鹽水制成10%胃黏膜組織勻漿。4℃下2 500 r·min-1離心10 min，取上清液，檢測(cè)步驟均嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行NO、MDA、SOD、PGE2的測(cè)定。

2 結(jié)果

2.1 單次給藥毒性試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 石榴皮多酚有效部位對(duì)小鼠死亡率的影響及LD50的計(jì)算 各組小鼠的死亡多發(fā)生在灌胃后24～72 h內(nèi)，小鼠的死亡率隨劑量的增加而增高。小鼠灌胃給予石榴皮多酚有效部位的 LD50=8 520.9 mg·kg-1； LD5095%的可信限=(7 291.2～9 914.4) mg·kg-1。石榴皮多酚有效部位對(duì)小鼠死亡率的影響見(jiàn)Tab 1。

Tab 1 Effect of polyphenols’ effective parts from P.

2.1.2 石榴皮多酚有效部位對(duì)小鼠精神狀態(tài)及行為活動(dòng)的影響 低劑量組A中，小鼠未出現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)，且無(wú)1例死亡；劑量組B中，個(gè)別小鼠出現(xiàn)呼吸頻率減慢，行動(dòng)遲緩，嚴(yán)重者甚至死亡；高劑量組C、D、E中，小鼠灌胃72 h內(nèi)出現(xiàn)不同程度的毒性反應(yīng)，具體表現(xiàn)為呼吸頻率減慢、精神萎靡、眼瞇趴伏、自發(fā)活動(dòng)減少、行動(dòng)遲緩、蜷縮、對(duì)刺激性反應(yīng)減弱等現(xiàn)象，嚴(yán)重者甚至死亡。隨給藥劑量增大，毒性反應(yīng)癥狀越明顯、嚴(yán)重，死亡數(shù)目增加。

2.1.3 石榴皮多酚有效部位最大劑量組對(duì)主要臟器毒性作用的病理學(xué)觀察 大體解剖觀察死亡小鼠的心、肝、脾、肺和腎臟，與對(duì)照組相比，均無(wú)明顯變化。但從病理組織切片顯示，最大給藥劑量為16 000 mg·kg-1小鼠的臟器組織有不同程度的損傷：肝臟組織中有的發(fā)生不同程度的充血，少數(shù)細(xì)胞出現(xiàn)固縮、變性；心、肺、腎臟組織發(fā)生不同程度的充血，見(jiàn)Fig 1。

Fig 1 Effect of polyphenols’ effective parts from P. granatum in the maximal dose on the pathological morphology in the main organs of mice(HE×200)

2.2 石榴皮多酚有效部位對(duì)無(wú)水乙醇致大鼠胃潰瘍保護(hù)作用的結(jié)果

2.2.1 胃黏膜潰瘍指數(shù)與潰瘍抑制率 與正常組比較，模型組胃潰瘍指數(shù)明顯升高，說(shuō)明模型制備成功；與模型組比較，石榴皮多酚有效部位高、中劑量組大鼠胃潰瘍指數(shù)明顯降低(P<0.01)，均能明顯抑制大鼠乙醇型胃黏膜損傷，潰瘍抑制率分別為98%、76%；且效果優(yōu)于枸櫞酸鉍鉀，見(jiàn)Tab 2。

Tab 2 Effect of effective parts of pomegranate peel polyphenols on UI of gastric ulcer in ethanol-induced ±s,n=10)

##P<0.01vsmodel control group

2.2.2 胃黏膜病理組織切片觀察 HE染色后，光鏡下觀察可見(jiàn)，正常組大鼠胃竇皺壁均勻分布，上皮細(xì)胞排列規(guī)則，黏膜肌、腺體、黏膜下層及肌層結(jié)構(gòu)正常。模型組大鼠，乙醇所致胃竇黏膜皺壁表面變性、崩解，部分黏膜上皮細(xì)胞呈嗜酸性壞死或融合成片狀結(jié)構(gòu)，腺體未見(jiàn)病變，黏膜肌下各層結(jié)構(gòu)正常。石榴皮多酚有效部位低劑量組，大鼠胃竇部黏膜皺壁上皮排列整齊，無(wú)明顯病變，但部分黏膜表層變性、脫落，固有層無(wú)明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體結(jié)構(gòu)正常。石榴皮多酚有效部位中劑量組，大鼠胃竇部分黏膜上皮完整，腺體結(jié)構(gòu)正常，黏膜層厚度較低劑量組厚，但有部分黏膜變性、壞死，結(jié)構(gòu)不清。石榴皮多酚有效部位高劑量組，大鼠大部分胃竇黏膜比較完整，上皮細(xì)胞有輕度變性，固有層未見(jiàn)明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)，黏膜下層肌結(jié)構(gòu)正常，見(jiàn)Fig 2、3。

2.2.3 石榴皮多酚有效部位對(duì)無(wú)水乙醇致大鼠胃潰瘍PGE2含量影響 與模型組相比，枸櫞酸鉍鉀組、石榴皮多酚有效部位中、高劑量組胃黏膜組織中PGE2含量明顯增高(P<0.05)，見(jiàn)Tab 3。

Fig 2 Effect of effective parts of pomegranate peel polyphenols on the pathological morphology in ethanol-induced rats(HE×200)

A：Normal control； B：Model control；C：Sanjiuweitai particles；D：Colloidal bismuth subcitrate；E：Low dose；F：Middle dose；G：High dose

Fig 3 Effect of effective parts of pomegranate peel polyphenols on ethanol-induced rats

A：Normal control； B：Model control；C：Sanjiuweitai particles；D：Colloidal bismuth subcitrate；E：Low dose； F：Middle dose；G：High dose

GroupDose/mg·kg-1PGE2ingastrictissue/μg·L-1Normalcontrol-369.26±22.60Modelcontrol-322.22±54.90*Sanjiuweitaiparticles1850338.09±25.40Colloidalbismuthsubci-trate33397.41±26.65##Lowdose430347.41±33.24Middledose852357.24±29.80#Highdose1704360.37±41.44#

*P<0.05vsnormal control group，#P<0.05，##P<0.01vsmodel control group

2.2.4 石榴皮多酚有效部位對(duì)無(wú)水乙醇致大鼠胃潰瘍NO含量的影響 與模型組比較,枸櫞酸鉍鉀組、石榴皮多酚有效部位高劑量組能明顯提高無(wú)水乙醇損傷性胃黏膜組織內(nèi)NO水平(P<0.05)，見(jiàn)Tab 4。

GroupDose/mg·kg-1NOingastrictissue/μmol·g-1ProNormalcontrol-238.46±17.68Modelcontrol-217.32±19.53Sanjiuweitaiparticles1850246.10±40.49Colloidalbismuthsubcitrate33249.07±32.57##Lowdose430227.07±62.48Middledose852230.47±33.53Highdose1704271.52±12.03**##

**P<0.01vsnormal control group；##P<0.01vsmodel control group

2.2.5 石榴皮多酚有效部位對(duì)無(wú)水乙醇致大鼠胃潰瘍SOD活性的影響 與模型組比較，石榴皮多酚有效部位高劑量組能提高大鼠胃黏膜SOD活力(P<0.01)，見(jiàn)Tab 5。

GroupDose/mg·kg-1SODingastrictissue/μmol·g-1ProNormalcontrol-200.97±36.50Modelcontrol-157.57±33.00**Sanjiuweitaiparticles1850153.95±23.53**Colloidalbismuthsubcitrate33175.54±31.21Lowdose430142.35±18.99**Middledose852155.04±15.92**Highdose1704187.01±19.47**#

**P<0.01vsnormal control group；#P<0.05vsmodel control group

2.2.6 石榴皮多酚有效部位對(duì)無(wú)水乙醇致大鼠胃潰瘍MDA含量的影響 與正常組比較，模型組大鼠胃黏膜組織中MDA含量增加；與模型組比較，枸櫞酸鉍鉀組、石榴皮多酚有效部位中、高劑量組可明顯降低MDA含量(P<0.01)，見(jiàn)Tab 6。

GroupDose/mg·kg-1MDAingastrictissue/μmol·g-1ProNormalcontrol-73.77±36.48Modelcontrol-97.87±51.59Sanjiuweitaiparticles185072.11±41.90Colloidalbismuthsubcitrate3365.32±31.98##Lowdose43087.16±18.01Middledose85254.35±17.71##Highdose170440.63±12.35*##

*P<0.05vsnormal control group；##P<0.01vsmodel control group

3 討論

石榴皮多酚作為石榴皮中一種重要的生理活性成分，其主要成分為安石榴苷、鞣花酸、沒(méi)食子酸。根據(jù)單次給藥毒性試驗(yàn)結(jié)果，石榴皮多酚有效部位的LD50為8 520.9 mg·kg-1,其95%的可信限范圍為(7 291.2～9 914.4) mg·kg-1，根據(jù)全球統(tǒng)一毒性分級(jí)系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)，石榴皮多酚有效部位毒性未分類(lèi)；根據(jù)歐盟毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)未分類(lèi)，故石榴皮多酚有效部位在一定濃度范圍內(nèi)臨床使用較安全。

胃潰瘍發(fā)病的原因比較復(fù)雜，一般認(rèn)為是多種原因引起胃黏膜損傷，導(dǎo)致對(duì)胃酸、胃蛋白酶的抵御能力降低，從而出現(xiàn)潰瘍癥狀。潰瘍病理模型可用化學(xué)性、物理性刺激以及通過(guò)應(yīng)激狀態(tài)誘發(fā)。乙醇誘導(dǎo)的胃潰瘍模型較其它胃潰瘍模型制備方法簡(jiǎn)單，潰瘍發(fā)生率高，并且乙醇引起的胃黏膜急性損傷機(jī)制明確，有利于研究中藥對(duì)潰瘍預(yù)防和保護(hù)的機(jī)制。

本實(shí)驗(yàn)采用乙醇誘導(dǎo)的胃黏膜急性損傷模型，觀察石榴皮多酚有效部位對(duì)大鼠急性胃潰瘍的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，石榴皮多酚有效部位能明顯降低急性胃潰瘍大鼠的潰瘍指數(shù)，并有促進(jìn)潰瘍愈合的作用。PGE2是由胃黏膜內(nèi)花生四烯酸或亞油酸在環(huán)氧酶催化下合成的，具有促進(jìn)胃黏膜上皮細(xì)胞分泌黏液與碳酸氫鹽、維持黏膜完整性、抑制胃酸分泌和刺激組織修復(fù)來(lái)促進(jìn)潰瘍愈合的作用。石榴皮多酚有效部位中、高劑量組與模型組比較有明顯差異，說(shuō)明石榴皮多酚有效部位可促進(jìn)胃潰瘍大鼠上皮細(xì)胞合成分泌PGE2,增強(qiáng)胃黏膜防御功能，提高再生黏膜功能,這可能是其促進(jìn)胃潰瘍愈合的機(jī)制之一。

NO作為一種內(nèi)源性血管舒張因子，能調(diào)節(jié)胃酸和胃黏液分泌及碳酸氫鹽生成，在維持黏膜完整性和黏膜防御中直接發(fā)揮作用[22]，從而與胃潰瘍修復(fù)之間存在密切聯(lián)系。研究表明，石榴皮多酚有效部位可以提高無(wú)水乙醇型大鼠胃潰瘍模型胃黏膜組織中NO含量，說(shuō)明該藥物可能有增強(qiáng)胃黏膜屏障作用。

SOD是機(jī)體內(nèi)一種重要的內(nèi)源性氧自由基清除劑，具有修復(fù)細(xì)胞的功能，故機(jī)體內(nèi)環(huán)境中SOD活性的高低間接性反映機(jī)體清除自由基的能力。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)得到的終末產(chǎn)物，在體內(nèi)的含量可反映脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，從而間接反映出細(xì)胞受損程度。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，石榴皮多酚有效部位可提高SOD活性及降低MDA含量，表明石榴皮多酚有效部位能增強(qiáng)胃潰瘍大鼠的抗氧化能力，進(jìn)而抑制潰瘍的發(fā)生和發(fā)展。

綜上所述，石榴皮多酚有效部位可提高無(wú)水乙醇致胃潰瘍模型大鼠中PGE2、NO水平、SOD活性及降低MDA含量，對(duì)無(wú)水乙醇致大鼠胃潰瘍模型具有胃黏膜保護(hù)作用，其機(jī)制可能與促進(jìn)胃潰瘍上皮細(xì)胞合成、增強(qiáng)胃黏膜防御功能，維持黏膜屏障的完整性，進(jìn)而減少自由基生成、降低抗脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)酶的消耗和調(diào)控NO水平有關(guān)。

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Single dose toxicity of polyphenols effective parts fromPunicagranatumand their protective effect on ethanol-induced gastric ulcer in rats

SHI Li-na1,WANG Xue-fei2, MA Gui-zhi3,KANG Jin-sen2, GAO Xiao-li1

(1.CollegeofPharmacy, 2.DeptofPharmacology,3.DeptofPharmaceuticalAnalysis,XingjiangMedicalUniversity,Urumqi830000,China)

Aims To study single dose toxicity of polyphenols effective parts fromPunicagranatum, to evaluate their safety, and thus to provide a theoretical basis for drug development and clinical use. To observe their protective effect on ethanol-induced gastric ulcer in rats. Methods 50 healthy Kunming mice were randomly divided into five groups and given different doses of polyphenols’ effective parts fromPunicagranatumvia intragastric administration.Toxicity and death in each group of mice were observed and recorded after administration for 14 d. The median lethal dose was calculated by Bliss method. 70 rats were randomly divided into normal group, model group(constant volume of normal saline),sanjiuweitai particles(1 850 mg·kg-1) group, colloidal bismuth subcitrate (33 mg·kg-1) group and polyphenols effective parts fromPunicagranatumlow-dose, medium-dose, high-dose(430,852,1 704 mg·kg-1)groups. On the 9th day of 10 days’ gavage, all except the normal group were fed ethanol (1.5 mL/only) to induce gastric mucosal injury in rats with acute gastric ulcer. Gastric ulcer index, the rate of ulcer inhibition were calculated for each group. The morphological changes of gastric mucosa were observed. The gastric mucosa levels of PGE2,NO,SOD and MDA were determined.Results The LD50and 95% confidence limit of the polyphenols’ effective parts fromPunicagranatumwere 8 520.9 mg·kg-1and 7 291.2～9 914.4 mg·kg-1,respectively. Pathology showed that the organs receiving dose of 16 000 mg·kg-1had different degrees of damage .Compared with the model group, the extract fromPunicagranatumsignificantly repaired the gastric mucosa, and significantly increased the gastric mucosa levels of NO and reduced MDA content, and improved SOD content and the levels of PGE2.Conclousion The dose of 5 063 mg·kg-1of polyphenols effective part fromPunicagranatumshowed no death. The dose of 16 000 mg·kg-1of polyphenols effective parts fromPunicagranatumcould cause varying degrees of damage in heart, liver, lung, kidney or the death of mice.The LD50and 95% confidence limit of the polyphenols effective parts fromPunicagranatumwere 8 520.9 mg·kg-1and 7 291.2～9 914.4 mg·kg-1,respectively.The extract fromPunicagranatumplays a protective role against gastric mucosa damage induced by absolute ethanol，and the mechanism may be related to promoting ulcer epithelial cells synthesis, enhancing mucosal regeneration function, regulating NO content and enhancing antioxidant capacity.

effective part of pomegranate peel polyphenols; single dose toxicity;LD50;gastric ulcer;PGE2;NO;SOD;MDA

時(shí)間：2015-4-15 15:44 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20150415.1545.020.html

2015-01-31,

2015-02-30

新疆維吾爾自治區(qū)科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(No 201233135)

史李娜(1990-)，女，碩士生，研究方向：新藥研發(fā),E-mail：1059129034@qq.com; 高曉黎(1962-)，女，博士，教授，研究方向：新藥研發(fā),通訊作者,E-mail:xli_g@sina.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2015.05.023

A

1001-1978(2015)05-0709-07

R-332；R284.1；R322.44；R573.110.531