黑參提取物體內(nèi)抗腫瘤作用研究

袁 媛，甘 雨，王 菲，黃 赫，杜佳林，李顯華

（遼寧省中醫(yī)藥研究院，遼寧 沈陽 110034）

腫瘤是威脅人類健康的重大疾病之一，目前放化療抑制腫瘤的同時對人體有很大的傷害。較多的研究報道表明人參的抗腫瘤作用明顯，紅參的抗腫瘤活性優(yōu)于人參。為探討黑參的抗腫瘤活性，筆者通過實體瘤S180生長的抑制作用、HepA肝癌腹水瘤的生命延長作用以及免疫功能調(diào)整作用，對黑參提取物、紅參提取物的抗腫瘤活性進行了比較，確定了黑參的抗腫瘤療效。

1 實驗材料

動物與瘤株：昆明種小鼠270只，體質(zhì)量18～22g，雌雄各半，購自遼寧長生生物技術(shù)有限公司，許可證號SCXK（遼）2010-0001。S180瘤株、HepA肝癌腹水瘤均購于上海軒研生物科技有限公司。

儀器：超凈工作臺（型號class Ⅱ TYPE A2 BSC系列生物安全柜，北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司生產(chǎn)）。

藥品：消癌平（南京圣和藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號201304241），環(huán)磷酰胺（通化茂祥制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號130201），黑參提取物（低、中、高劑量）自制得到[1，2]，紅參提取物（低、中、高劑量）自制得到。

2 實驗方法[3，4]

2.1 實體瘤S180抑瘤作用

荷瘤小鼠造模。將S180瘤株用生理鹽水以1000r/min經(jīng)10min離心洗滌2次后，洗掉細胞中胰蛋白酶和培養(yǎng)液中血清等成分，用臺盼藍染色法計數(shù)活細胞數(shù)，用生理鹽水將腫瘤細胞稀釋成1×106～1×107濃度，進行傳代。無菌條件下取S180腹水瘤小鼠，抽取傳代第8日的荷瘤小鼠的腹水置于盛有生理鹽水的帶塞試管中，按瘤株與生理鹽水1∶3稀釋，每個接種點以0.2mL，1×106～1×107個細胞數(shù)，用1mL的皮下注射器注射接種到右前肢腋窩處腋下部皮下，共90只，整個操作于30min內(nèi)完成。

給藥及計算抑瘤率。接種24h后將小鼠按體質(zhì)量隨機分為9組，每組10只。環(huán)磷酰胺西藥對照組，給藥濃度為25mg/kg；消癌平中藥對照組，給藥濃度為25mg/kg；6個給藥組分別給予紅參、黑參提取物低、中、高劑量，折合生藥量分別為13.6mg/kg、27.2mg/kg和40.8mg/kg；模型對照組給予同體積的蒸餾水。以上各組均為灌胃給藥，0.8mL/20g，1日1次，連續(xù)給藥10日，荷瘤小鼠末次給藥24h后稱體質(zhì)量，脫臼處死，剝離取下腋下腫瘤并用濾紙吸干，立即稱取瘤重，計算抑瘤率，進行療效評價。計算公式為腫瘤生長抑制率（%）=（空白對照組平均瘤質(zhì)量－給藥組平均瘤質(zhì)量）/空白對照組平均瘤質(zhì)量×100%。

2.2 HepA肝癌腹水瘤生命延長作用

荷瘤小鼠造模。無菌條件下抽取傳代第8日的荷瘤小鼠的腹水置于盛有生理鹽水的帶塞試管中，按瘤株與生理鹽水1∶3稀釋，作為HepA小鼠肝癌腹水瘤細胞懸液。用一次性注射器或經(jīng)高壓消毒的注射器吸取HepA小鼠肝癌腹水瘤細胞懸液0.2mL，于經(jīng)碘酊、乙醇消毒過的腹部皮膚作腹腔注射。共90只，整個操作于30min內(nèi)完成。

給藥及計算生命延長率。接種24h后將小鼠按體質(zhì)量隨機分為9組，每組10只。環(huán)磷酰胺西藥對照組，給藥濃度為25mg/kg；消癌平中藥對照組，給藥濃度為25mg/kg；6個給藥組分別給予紅參、黑參提取物低、中、高劑量，折合生藥量分別為13.6mg/kg、27.2mg/kg和40.8mg/kg；模型對照組給予同體積的蒸餾水。以上各組均為灌胃給藥，0.8mL/20g/次/日，連續(xù)給藥10日，荷瘤小鼠末次給藥24h后稱重，從第11天開始停止給藥，繼續(xù)飼養(yǎng)觀察，在觀察期間記錄小鼠的一般情況（飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物、中毒表現(xiàn)和死亡情況等）。計算存活時間及生命延長率。計算公式為生命延長率（%）=（給藥組平均生存時間－空白對照組平均生存時間）/空白對照組平均生存時間×100%。

2.3 免疫功能調(diào)整作用

將接種S180瘤株24h的小鼠按體質(zhì)量隨機分為9組，每組10只。環(huán)磷酰胺西藥對照組，給藥濃度為25mg/kg；消癌平中藥對照組，給藥濃度為25mg/kg；6個給藥組分別給予紅參、黑參提取物低、中、高劑量，折合生藥量分別為13.6mg/kg、27.2mg/kg和40.8mg/kg；模型對照組給予同體積的蒸餾水。以上各組均為灌胃給藥0.8mL/20g，日1次，連續(xù)給藥10日，荷瘤小鼠末次給藥24h后稱重，斷尾取血，測白細胞數(shù)。之后處死小鼠，摘取胸腺、脾臟稱重，計算胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)。計算公式為胸腺指數(shù)=（胸腺質(zhì)量/小鼠質(zhì)量）×10，脾臟指數(shù)=（脾臟質(zhì)量/小鼠質(zhì)量）×10

2.4 統(tǒng)計分析

采用spss軟件對數(shù)據(jù)進行處理，數(shù)據(jù)以（±s）表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 實驗結(jié)果

各組對S180實體瘤抑制作用見表1。

表1 各組對S180實體抑瘤作用

各組對HepA肝癌腹水瘤的生命延長作用見表2。

表2 各組對HepA肝癌腹水瘤生命延長

各組免疫功能調(diào)整作用見表3。

表3 各組胸腺及脾臟指數(shù)比較

4 討 論

常規(guī)化療藥物多為細胞毒性藥物，在殺傷瘤細胞同時也損害機體的免疫系統(tǒng)，而免疫功能低下又可促進腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，因此腫瘤的發(fā)生與機體的免疫狀況密切相關(guān)。因此，通過用一些增強免疫功能的藥物可使腫瘤消退或延緩其發(fā)展。

人參（Panax ginseng C.A.Meyer）為五加科植物人參的干燥根，是亞洲常見藥材，具有很高的藥用和歷史文化價值，被譽為“草藥之王”，在科學(xué)研究領(lǐng)域和國際市場一直占有極其重要的地位，被廣泛應(yīng)用。其性平，味甘、微苦，微溫，用于大補元氣、復(fù)脈固脫、補脾益肺、生津止渴、安神益智。現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)和藥理學(xué)研究表明，人參具有提高機體免疫力、抗疲勞、抗腫瘤、降血糖以及抗炎等多種活性，在醫(yī)學(xué)及養(yǎng)生方面具有可觀的價值。近年來，各種各樣的人參炮制品作為功能食品用于飲食，其中包括白參、紅參、黑參等。黑參是利用傳統(tǒng)的九蒸九曝炮制方法將人參反復(fù)蒸制烘干而得到的一種人參深加工品，是繼紅參后的又一人參新產(chǎn)品[1]。黑參比白參和紅參有更強的抗腫瘤、抗炎、提高免疫力等生物活性。實驗表明，黑參高劑量組可以抑制荷瘤小鼠S180實體瘤腫瘤生長，延長HepA肝癌腹水瘤小鼠的存活時間，改善免疫功能指標。提示黑參在抗腫瘤以及腫瘤免疫調(diào)節(jié)方面具有進一步研究和開發(fā)的價值。

[1] 袁媛，徐榮培.人參新炮制品—黑參的研究進展[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2013，31（11）：2379-2381.

[2] 袁媛，于艷，徐榮培.HPLC法測定19個人參新炮制品—黑參樣品中的人參皂苷含量[J].遼寧中醫(yī)雜志，2013，40（10）：1993-1995.

[3] 徐淑云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學(xué)[M].3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1766.

[4] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：1006.