桑芪首烏片提取工藝的實驗研究

張韶湘　余曉玲　魏丹霞等

摘要：目的采用正交試驗法優選桑芪首烏片的提取工藝。方法鉤藤用乙醇超生提取，以乙醇濃度，提取時間，液料比為三因素L9（33），干膏得率為指標，優選鉤藤最佳提取工藝；剩余藥味與鉤藤藥渣一并進行水煎煮，以液料比、煎煮次數、煎煮時間為三因素L9（33），總黃酮含量和干膏得率為指標，優選最佳提取工藝。結果該處方提取最佳工藝條件為：6倍量60%的乙醇超聲提取鉤藤60 min，藥渣與其余藥味用8倍量水，提取2次，每次1 h。結論該工藝操作簡便易行，適用于桑芪首烏片的提取。

關鍵詞：桑芪首烏片；提取工藝；鉤藤超聲提取；總黃酮UV測定

中圖分類號：R284文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2015）06-0086-03

云南省榮譽名中醫陸家龍主任醫師潛心研究的經驗方“桑芪首烏湯”以中醫基礎理論為依據，主要由桑寄生、黃芪、制首烏、鉤藤、天麻、三七須根等十余味天然藥物組成。在中醫治療高血壓及相關心腦血管疾病時，對于改善患者臨床癥狀及提高生活質量方面是具有較好的療效。西醫對于控制高血壓有很多類藥物，但其癥狀改善效果并不盡人意，部分血壓雖已控制正常但上述癥狀仍然持續存在，且大部分藥物價格昂貴，長期服用病人負擔過重，甚至存在或這或那的副反應。該處方經過了二十余年的臨床觀察，具有改善癥狀快、療效持續平穩，安全、價低等優點，倍受廣大患者的認可。現將原有湯劑改為片，以便于患者攜帶、服用。本實驗為片劑提取工藝的研究，為該劑型進一步研究奠定基礎。

1儀器和試藥

1.1儀器BJ-II崩解時限儀，SHB-III 循環水式多用真空表，電熱恒溫水浴鍋，FN202-2A型 電熱干燥箱，KS-3000ULTRASSONIC CLEANER.

1.2試藥藥品購于云南白藥集團股份有限公司中藥飲片分公司

2提取

2.1鉤藤的提取根據文獻[1～2]，鉤藤屬茜草科植物，為中醫傳統臨床中草藥，其性涼，味甘苦，具有清熱平肝，息風定驚的功效，臨床用于高血壓病頭暈等。中醫學理論中明確提及“鉤藤后下”，現代藥學研究表明鉤藤中所含有效成分鉤藤堿，異鉤藤堿等受熱易破壞，所以在提取過程中，應控制其溫度不高于81℃[3]。因此，我們以乙醇濃度，提取時間，液料比為三因素L9（33），干膏得率為指標，優選鉤藤超聲提取的最佳工藝。因素水平表見表1。

從3個因素的極差來看，影響提取效果的因素順序A>B>C，即醇濃度是影響最大的因素，其次為提取時間，液料比的影響最小。正交試驗結果顯示，最佳的提取工藝條件是6倍量60%的乙醇，提取時間為 1 h。

2.2其余藥材的提取

2.2.1正交設計有文獻報道[4]首烏的乙醇提取物具有肝細胞毒性，且其余藥味的有效成分多為皂苷、黃酮等水溶性物質，同時，考慮到乙醇提取在今后大規模生產中對設備等硬件設施的高要求，將剩余藥味與鉤藤藥渣一并進行水煎煮，以液料比、煎煮次數、煎煮時間為三因素L9（33），總黃酮含量和干膏得率為指標，優選最佳提取工藝。因素水平表見表3。

2.2.2總黃酮含量測定（UV法）

2.2.2.1儀器與試藥儀器：UV-7502PC（上海尖銳光電科技有限公司）；對照品：蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為：100080–201309）；供試品：桑芪首烏片干膏，昆明市中醫醫院提供；試劑：蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2.2.2.2對照品溶液的制備精密稱取經 108 ℃ 干燥至恒重的蘆丁對照品約10.7 mg，用甲醇溶解，轉移入 100 mL 容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，得蘆丁對照品溶液濃度為0.107 mg/mL，備用。

2.2.2.3供試品溶液的制備取干膏5 g研細，加入 25 mL甲醇稱重，超聲30 min，補足重量，過濾，濾液揮干后用水溶解至10 mL，取用等體積乙酸乙酯萃取4次后，回收乙酸乙酯的殘渣用甲醇定容至25 mL容量瓶中，即得供試品溶液。

2.2.2.4測定方法量取1 mL供試品溶液置25 mL量瓶中，加5% NaNO2溶液1mL，混勻，放置6 min，加10% Al（NO3）3溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加4%NaOH溶液10 mL，放置15 min，甲醇稀釋至刻度，搖勻。以相應的溶液為空白，在500 nm處測定吸光度。連續測定3次，取平均值，以蘆丁為對照品，采用標準曲線法測定總黃酮含量。

從3個因素的極差來看，影響提取效果的因素順序A>B>C，即提取次數是影響最大的因素，其次為提取時間，液料比的影響最小。就A因素來說，2，3水平對結果的影響較為接近，且明顯優于1水平；出于降低成本考慮，我們選擇了較為經濟的工藝，即：8倍量水，提取2次，每次1 h。

3結果與討論

3.1根據實驗結果得到鉤藤超聲提取的最佳的提取工藝條件是6倍量60%的乙醇，提取 1 h；鉤藤醇提后的藥渣與其余藥味一并用8倍量水，提取2次，每次1 h。該工藝操作簡便易行，適用于桑芪首烏片的提取。

3.2根據處方藥味組成，方中天麻及鉤藤為中藥降壓之藥對，而鉤藤中的主要活性成分為鉤藤堿和異鉤藤堿，但是此類生物堿遇熱容易改變。而傳統的水煎煮涉及較多高溫環節，對其藥效影響明顯。根據文獻報道以乙醇提取為主，但醇提的大生產對設備和環境的限制頗多；也有文獻[5]采用超聲提取加酵解的方法對鉤藤中活性成分提取，得率較高。因此，結合實際，對鉤藤采用了超聲提取的方法。由于（異）鉤藤堿的標準品（含量測定用）無法從中國生物制品檢定所購得。基于其熱敏性特點，我們在嚴格控制提取溫度的前提下對其收膏率進行量化，在一定程度上極大的保證了其藥效學的物質基礎。

3.3基于原處方為湯劑入藥，為不改變其原有物質基礎，故選用水作為提取溶媒。

參考文獻：

[1]李晶晶.鉤藤總堿提取工藝優化及其抗焦慮作用藥效學和作用機制的初步研究[D].第三軍醫大學碩士學位論文，2013.

[2]王瑞儉.鉤藤堿提取工藝研究[J].吉林林學院學報，1998，14（2）.

[3]李雅臣.鉤藤中鉤藤總生物堿提取溶劑的選擇探討[J].天津中醫藥，2003，20（4）：67.

[4]呂旸，王伽伯等.提取溶劑對何首烏肝細胞毒性的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（20）.

[5]彭國平.應用微生物發酵與超聲波聯合處理高效提取鉤藤[J].現代生物醫學進展，2009，9（3）：497.