乙型肝炎病毒E抗原、大蛋白與乙肝病毒DNA的關系

樊燕，王永忠，鄭國軍，朱珍，蔣莉

(常州市第三人民醫院，江蘇常州213001)

乙型肝炎病毒E抗原、大蛋白與乙肝病毒DNA的關系

樊燕，王永忠，鄭國軍，朱珍，蔣莉

(常州市第三人民醫院，江蘇常州213001)

目的 探討乙型肝炎病毒(HBV)表面E抗原(HBeAg)、大蛋白(LHBs)與乙肝病毒DNA(HBV DNA)的關系。方法 分別檢測109例HBeAg陽性和116例HBeAg陰性的乙型肝炎患者的LHBs、HBV DNA表達情況，并進行對比分析。結果 HBeAg陽性組中，LHBs、HBV DNA的檢測率分別為89.9%和84.4%，二者比較無統計學差異(P>0.05)；HBV DNA定量與HBeAg定量和LHBs均呈正相關(r分別為0.81、0.94，P均<0.05)，不同HBV DNA載量組間HBeAg定量和LHBs含量均有統計學差異(P均<0.01)。結論 對HBeAg陰性患者而言，LHBs能在一定程度上反映體內HBV的復制情況，可作為HBV DNA的補充，指導臨床診治和用藥。

乙型肝炎病毒大蛋白；乙型肝炎病毒E抗原；乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸

乙型肝炎病毒(HBV)外膜蛋白由HBV DNA的S區編碼，包括大蛋白(LHBs)、中蛋白和主蛋白三種成分。LHBs存在于感染性Dane顆粒和亞病毒顆粒中，它獨特的雙重跨膜拓撲結構使其在病毒生活周期中執行了兩個重要功能，一是作為配體和病毒受體結合，二是在病毒體形成過程中負責與核殼體相接觸，包裝外膜，同時介導HBeAg亞病毒顆粒在細胞中的滯留[1，2]。本研究對HBV感染患者進行LHBs、HBV DNA、HBeAg檢測，分析三者間的關系。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇我院2013年6月～2014年6月收治的225例乙型肝炎患者，均符合2000年全國病毒性肝炎學術會議修訂的診斷標準[3]。根據HBeAg檢測結果將患者分為陽性組109例和陰性組116例，陽性組男51例、女58例，年齡(50.6±14.8)歲；陰性組男64例、女52例，年齡(49.0±15.6)歲。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 采集受試者清晨空腹靜脈血5 mL，分離血清，-80 ℃保存待檢。HBV DNA檢測采用美國ABI 7500型熒光定量PCR儀，試劑由上海復星醫學科技有限公司提供；HBeAg檢測采用Wallac公司生產的DELFIA1235全自動時間分辨免疫熒光分析儀，試劑由廣州市達瑞抗體工程技術有限公司提供；LHBs檢測采用ELSIA方法，試劑由北京熱景生物技術有限公司提供。所有檢測均按照SOP規程操作。

1.2.2 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件，率的比較用配對資料χ2檢驗。計量資料組間差異采用方差分析，相關性分析采用線性相關分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 LHBs、HBV-DNA檢測結果比較 根據HBeAg抗原檢測結果分為陰性和陽性兩組，LHBs、HBV DNA陽性率比較均無統計學差異(P均>0.05)，見表1。

表1 兩組LHBs、HBV DNA檢測結果比較[例(%)]

2.2 HBV DNA與HBeAg及HBLs的相關性 根據HBV DNA拷貝數不同數量級分為四個組，HBV DNA拷貝數與HBeAg定量具有相關性(r=0.81，P<0.05)，HBV DNA拷貝數與HBLs 具有相關性(r=0.94，P<0.05)，不同HBV DNA拷貝數組間HBeAg含量差異具有統計學意義(F=93.0，P<0.01)，不同HBV DNA拷貝數組間LHBs含量差異具有統計學意義(F=118.0，P<0.01)。見表2。

3 討論

HBeAg是臨床判定HBV復制程度及判斷慢性乙型肝炎患者預后的一個重要指標，是抗病毒治療終點的重要依據之一。HBV DNA是HBV存在和復制的重要指標，臨床常應用于判斷HBV感染者病毒復制的情況及臨床有無傳染性。Bruns等[4]對鴨肝模型的研究發現，含有嗜肝病毒血清的感染性不僅依賴于具有感染性的Dane顆粒的多少，而且還依賴缺乏核酸、富含LHBs的亞病毒顆粒的數量，后者主要包括管狀顆粒和小球型顆粒，這些顆粒具有反式激活作用，能夠顯著增強細胞內的病毒復制和基因表達。LHBs包括HBsAg、PreS1、PreS2蛋白，是HBV Dane顆粒和亞病毒顆粒的主要包膜成份，與HBV復制密切相關，LHBs檢測反映的是患者血清中是否存在Dane顆粒和亞病毒顆粒，因而對判定體內HBV復制或有無傳染性可能具有更重要的意義[5～7]。

表2 HBV DNA定量和HBeAg定量檢測結果對比

本研究采用針對LHBs特殊構象制備的單克隆抗體對225例HBV感染者血清中HBV外膜LHBs進行檢測，結果顯示LHBs與HBV DNA的陽性率無統計學差異，可認為LHBs在一定程度上反映了HBV復制。但同時我們也發現部分樣本LHBs陽性而HBV DNA陰性，其原因可能是LHBs的亞病毒顆粒的數量是完整病毒顆粒的10 000倍以上，血液中消退時間也晚于HBV DNA[8]。以往認為，HBeAg陰轉是HBV復制減弱、傳染性降低和預后良好的表現。本研究116例HBeAg陰性患者中，HBV與LHBs陽性率分布為52.6%和50.9%，說明這部分患者體內病毒復制相當活躍，其原因可能是免疫清除不完全或HBV前C區或BCP區發生變異，HBeAg合成障礙，但不影響病毒復制[8，9]。顯然在判斷病毒復制和傳染性方面，LHBs比HBeAg具有明顯優勢，在不具備HBV DNA檢測條件的基層醫院，LHBs可作為判斷病毒復制的血清學指標。

研究證實，LHBs與HBeAg和HBV DNA之間具有良好的相關性[10]。本研究顯示，HBV DNA與HBeAg和LHBs呈正相關，不同數量級HBV DNA載量組間HBeAg和LHBs含量均存在顯著統計學差異，顯示三者一定程度上都能夠反映HBV復制情況，但對于HBeAg陰性患者，LHBs和HBV DNA或更具有價值，檢測LHBs能彌補HBeAg的缺陷，反映患者體內HBV復制的真正水平，LHBs和HBV DNA可能更適合抗病毒治療效果的判斷，對指導臨床合理用藥、避免過早停藥導致病情反復具有一定意義[11]。

[1] 徐叢榮,魏建成,鄭登滋,等.慢性乙型肝炎病毒表面抗原E大蛋白檢測的臨床意義[J].檢驗醫學與臨床,2010,7(8):673-675.

[2] Lambert C, Mann S, Prange R. Assessment of determinants affecting the dual topology of hepadnaviral large envelope proteins[J]. J Gen Vior, 2004，85(Pt5):1221-1225.

[3] 中華醫學會傳染病和寄生蟲病學分會、肝病學會.病毒性肝炎防治方案[J].中華肝臟病雜志，2000,8(4):324-329.

[4] Bruns M, Miska S, Chassot S, et al. Enhancement of hepatitis B virus infection by noninfectious subviral particles[J]. J Virol, 1998,76:1462-1468.

[5] Bruss V. Envelopment of the hepatitis B virus nucleocapsi[J]. Virus Res, 2004,106(2):199-209.

[6] 王永忠,吳國祥,秦有來,等.乙型肝炎病毒外膜大蛋白血清學檢測及臨床意義[J].中華傳染病雜志,2007,25(4):244-245.

[7] 王永忠,吳國祥,秦有來,等.肝癌患者血清HBV基因型、外膜大蛋白定量檢測的臨床意義[J].山東醫藥,2007,47(16):1-2.

[8] Yamada T, Iwabuki H, Kanno T, et al. Physicochemical and immunological characterization of hepatitis B virus envelope particles exclusively consisting of entire L(pre-S1+pre-S2+S)protein[J]. Vaccine, 2001,19(23-24):3154-3163.

[9] 譚太昌,王智斌.乙肝病毒外膜大蛋白臨床應用價值研究[J].臨床和實驗醫學雜志,2008,10(7):27-28.

[10] Fan X, Fang D, Bin D, et al. Serum levels of surface large envelope protein: prognostic marker for hepatitis B e antign-negative patients with adefovir dipivoxil treatment[J]. Antivir Ther, 2009,14(8):1149-1156.

[11] 斯崇文.對當前慢性乙肝病毒抗病毒治療的看法[J].中華傳染病雜志,2005,23(2)：73-74.

常州市衛生局重大項目(201312)。

王永忠

10.3969/j.issn.1002-266X.2015.01.016

R512.6

B

1002-266X(2015)01-0041-02

2014-08-27)