不同時間去除卵丘細胞對短時受精結果的影響

李國臻，鄭波，郭鈺英，楊志偉，陶林林

(邢臺不孕不育專科醫院，河北邢臺054000)

不同時間去除卵丘細胞對短時受精結果的影響

李國臻，鄭波，郭鈺英，楊志偉，陶林林

(邢臺不孕不育專科醫院，河北邢臺054000)

目的 探討短時受精技術進行體外受精(IVF)時，不同時間去除卵丘細胞對短時受精結果的影響。方法 選擇行IVF助孕的原發不孕且取卵后本周期移植的患者226例，隨機分為A組119例和 B組107例，A組移植精卵結合4～6 h后去除卵丘細胞發育來的胚胎，B組移植精卵結合4～6 h后保留卵丘細胞發育來的胚胎。比較兩組的胚胎種植率和妊娠率。結果 A、B組胚胎種植率分別為36.51%和52.09%，兩組比較有統計學差異(P<0.05)；妊娠率分別為52.94%和66.35%，兩組比較無統計學差異(P>0.05)。結論 短時受精過程中，在保證患者受精的情況下，將剩余的卵母細胞保留卵丘細胞可以提高胚胎的種植率。

體外受精；去除卵丘細胞時間；種植率

使用短時受精技術進行體外受精(IVF)時，卵子脫顆粒時間何時為最佳存在爭議。早脫顆粒可能會增加多精受精率，影響胚胎基因表達與甲基化修飾，影響胚胎質量；晚脫顆粒可能導致少數患者受精失敗，失去補救單精子卵胞漿顯微注射(ICSI)的最佳時機[1]。本研究觀察了IVF去除卵丘細胞和保留卵丘細胞發育來的胚胎的種植率和妊娠率，為短時受精及短時受精早補救ICSI周期移植胚胎的選擇提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2010年6月～2013年11月在我院行IVF短時受精第三天移植的原發性不孕患者226例，年齡25～35歲，獲卵數大于10枚。病因為女方原發不孕并男方精液正常或輕度少弱精子癥。將患者隨機分為A組119例和B組107例，A組年齡(28.26±4.34)歲，基礎卵泡刺激素(FSH)(5.23±1.65)IU/L；B組年齡(27.85±4.85)歲，基礎FSH(4.95±2.07)IU/L。兩組年齡、基礎FSH具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 受精方法及分組 患者超促排卵，肌注人絨毛膜促性腺激素(hCG)6 000～10 000 U后36～37 h經陰道B超取卵，取卵后常規給予黃體酮(P)肌肉注射80～100 mg/d。取卵后3～4 h進行微滴法授精。每微滴為30～50 μL含5%血清白蛋白的G-IVF，加入10 000～20 000條精子(精液處理均為密度梯度法)，加卵1～2枚。精卵共孵育4～6 h后用巴氏德吸管隨機取出5～10枚卵母細胞，輕輕吹打去除卵丘細胞，置于新鮮培養液微滴中(含5% HSA的G-IVF)中觀察第二極體出現情況(無卵丘細胞)；若>50%的卵母細胞出現第二極體判定受精成功。將剩余的卵母細胞保留卵丘細胞自微滴移出，放入另一新鮮的培養液中繼續培養(含5% HSA的G-IVF)。受精后18～20 h(D1天)全部去除卵丘細胞，觀察受精情況，并進行原核評分。根據移植胚胎來源分組：A組為移植受精后4～6 h去除卵丘細胞發育來胚胎的患者，B組為移植受精后4～6 h保留卵丘細胞(18～20 h去除卵丘細胞)發育來胚胎的患者。

1.2.2 胚胎培養 受精卵繼續培養至72 h觀察發育情況，并進行胚胎分級。以胚胎細胞數≥6枚，卵裂球大小較為均勻，碎片≤10%為可用胚胎。于取卵后72 h移植。移植胚胎數目1～3枚，胚胎移植后給予黃體酮支持黃體。移植后14 d測血hCG，移植28～35 d行B超檢查，發現孕囊即為臨床妊娠，種植率為B超下可見孕囊數/移植胚胎數×100%。

1.2.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件，組間均數比較采用配對t檢驗，率的比較采用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

兩組平均獲卵數、平均移植數、移植日內膜、妊娠率比較均無統計學差異(P均>0.05)，兩組種植率比較有統計學差異(P<0.05)。

表1 兩組發育胚胎移植后的結局比較

注：與B組比較，*P<0.05。

3 討論

Chen等[2]提出，在常規IVF短時受精后6 h通過剝除卵丘細胞觀察第二極體是否排出可預測受精與否。此后，許多研究表明早補救ICSI能有效預防受精失敗，提高妊娠率，獲得良好的臨床結局[3～6]。也有學者報道，早期脫顆粒多精受精的比例偏高。其原因可能是：在受精早期，過早脫卵丘細胞的機械操作很可能對卵母細胞造成損傷，特別是透明帶的損傷[4]，可能影響皮質反應和透明帶反應，如果造成透明帶上的微小缺口，也會增加多精入卵的機會；卵丘顆粒細胞上的特有成分可降低多精受精率，受精早期去除卵丘細胞會使其微環境發生改變，也可能造成增加多精受精的機會。我們在實際工作中發現，短時受精過程中4～6 h全部去除卵丘細胞多精受精的比例偏高，所以采取部分剝除法(5～10枚)去除卵丘細胞，若大于50%就不再去除卵丘細胞，避免了多精受精的概率，也可以達到早判斷受精結果的目的，與文獻[7]報道一致。關于顆粒細胞對后續胚胎的發育潛能的影響，以及短時受精早去除卵丘細胞對胚胎基因表達與甲基化修飾的影響、對胚胎發育潛能和種植率的影響，目前尚無定論。李蕾等[8，9]研究認為，顆粒細胞可以分泌一些對早期胚胎發育有利的物質，如生長因子、糖蛋白等，其可作為共培養細胞促進胚胎的發育。而且顆粒細胞也可以通過代謝去除胚胎體外微環境中的不利于胚胎發育的物質，如重金屬二價離子等。Raman等[10]研究認為，卵丘細胞與卵母細胞之間存在的包括縫隙連接在內的細胞間復雜的連接機制，對卵泡的發育及胚胎的質量都至關重要。有研究對常規IVF(精卵共孵育16～18 h)與短時受精的情況進行比較，發現短時受精不能提高胚胎利用率和臨床妊娠率[11]，另外一些研究的結論則相反[10，12]。本研究只比較了短時受精后去除卵丘細胞與保留卵丘細胞所發育來胚胎的移植后結局。結果顯示，移植選擇短時受精后全部為4～6 h去除卵丘細胞發育來的胚胎與受精后18～20 h去除卵丘細胞發育來的胚胎的種植率比差異有統計學意義。提示卵母細胞周圍的顆粒細胞不僅與受精有重要關系，而且對胚胎之后的發育潛能也具有重要意義，為移植時的胚胎選擇(胚胎評分同等級別的情況下首選保留卵丘細胞的胚胎移植)提供了一個參考。由于例數所限，本文數據顯示雖然保留卵丘細胞組的妊娠率高于無卵丘細胞組，但無統計學差異，需擴大樣本量進一步研究。

綜上所述，在短時受精去除卵丘細胞判斷受精情況時，在能保證正確判斷受精的前提下要盡可能減少數目。在新鮮移植過程中優先選擇沒有去除卵丘細胞發育來的胚胎，有助于改善輔助生殖的結局，安全性更高。

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郭鈺英

10.3969/j.issn.1002-266X.2015.01.031

R711.6

B

1002-266X(2015)01-0074-02

2014-01-08)