藏藥方劑石榴健胃丸質量標準研究

王天臻 楊金草

(甘肅省甘南州食品藥品檢驗檢測所，甘肅 合作 74700)

藏藥石榴健胃丸為常用藏藥制劑，由石榴子、肉桂、蓽茇、紅花、豆蔻5 味藥材組成，石榴健胃丸適用于溫胃益火。用于消化不良，食欲不振，寒性腹瀉等疾病。收載于衛(wèi)生部藥品標準藏藥第一冊，原標準僅有顯微鑒別項和石榴子藥材的薄層色譜鑒別及常規(guī)檢查項，不利于藥品的質量控制，為了進一步控制該制劑的質量，本實驗采用對肉桂定性鑒別，用HPLC 法測定了該制劑中紅花的有效成分羥基紅花黃色素A 含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：島津SPD-20A 高效液相色譜儀(日本島津)及其配套工作站，包括：紫外檢測器SPD -20A、LC -20A 泵(四元梯度單元)、SIL-20A 自動進樣器、CTO -10AS 柱溫箱、CBM-20A 控制器、SUS20A 混合器、流路在線脫氣機;BT224S 型分析天平、CP-225D 型分析天平(賽多利斯科學儀器有限公司);KH-250DB 型數(shù)控超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司);硅膠H 薄層板，硅膠G 薄層板(青島海洋化工廠);薄層呈像系統(tǒng)(Visualizer CAMAG)

1.2 試藥：羥基紅花黃色素A 對照品(批號：111637 -201207，中國藥品生物制品檢定所);桂皮醛對照品(批號：110710 -201217 中國藥品生物制品檢定所);乙腈、甲醇(色譜純，山東禹王實業(yè)有限責任公司);水為娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純;石榴健胃丸(批號：20130315 20130502 20130709 20131006 20131102 )及陰性對照品(甘南藏族自治州碌曲縣西倉寺院藏醫(yī)院醫(yī)院制劑)。

2 肉桂TLC 鑒別

稱樣品5g，加入乙醇15mL，密塞，靜置20min，取上清液做為供試品溶液。另取缺肉桂的陰性對照5g，同法制成陰性對照溶液。再取桂皮醛對照品，加乙醇制成每1mg/1mL 的溶液做對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取對照品2μL、供試品溶液和陰性對照溶液各5μL 分別點于同一硅膠G 薄層板上，以石油醚(60 -90℃)：乙酸乙酯(17：3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴二硝基苯肼乙醇試液顯色劑，日光下檢視。供試品色譜中，在與照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，而陰性對照無干擾，見圖1

3 羥基紅花黃色素A 含量測定

3.1 色譜條件：以十八烷基鍵合硅膠為填充劑;Thermo C18 色譜柱：(250 mm ×4.6 mm，5μm);甲醇：乙腈：0.7%磷酸溶液(26：2：72)為流動相;檢測波長：403 nm;流速：0.8 mL·min-1;柱溫：30 ℃;進樣量：10 μL;理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A 峰計算應不低于3000。

3.2 溶液的制備

3.2.1 對照品溶液的制備：精密稱取羥基紅花黃色素A對照品0.01268g 置50mL 容量瓶中，加25%甲醇適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成約0.13mg/ mL 的對照溶液，即得。

3.2.2 供試品溶液的制備：精密稱取本品細粉約1.0g，置具塞錐形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，稱定重量，超聲處理(功率300W，頻率50KHZ)40min，放冷，用25%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.2.3 陰性對照溶液的制備：按處方制備工藝制成缺紅花的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。

3.3 干擾試驗：精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μL 按照上述色譜條件，分別注入液相色譜儀。結果：供試品羥基紅花黃色素A 中與相鄰組分基線完全分離，且峰形良好，樣品中其他組分對羥基紅花黃色素A 的測定無干擾，見圖2

3.4 精密度試驗：取“3.2.1”項下對照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進樣5 次，以峰面積的值為指標計算RSD，考察精密度。結果羥基紅花黃色素A 的RSD 為0.59%，表明儀器精密度良好。

3.5 線性關系考察：精密吸取上述對照品溶液4.0、8.0、12.0、16.0、20.0μL，按上述色譜條件分別進樣，測定峰面積。以羥基紅花黃色素A 對照品的進樣量(μg)的常用對數(shù)值為橫坐標，以峰面積的常用對數(shù)值為縱坐標，進行線性回歸。Y =20270318X -12146(r =0.9999);結果表明：羥基紅花黃色素A 在0.5432 ～2.716μg 范圍內呈良好的線性。

3.6 重復性試驗：取同一批樣品(批號：20130502 )6 份，按“3.2.2.”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定。結果羥基紅花黃色素A 平均值(n=6)為4.4276 mg·g-1;RSD 分別為0.763%，表明本方法重復性較好。

3.7 穩(wěn)定性試驗：取“3.2.2.”項下供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，8，12，24 h 在上述色譜條件下進樣10μL測定，測得峰面積約4760903。計算RSD 為0.98%。表明供試品溶液在24 h 內穩(wěn)定性良好。

3.8 加樣回收率試驗：精密稱取已知含量(4.1968mg/g)的同一批樣品(批號：20130315 )6 份，每份各精密加入對照品溶液(1.0082mg/mL)2mL，按“3.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“3.9”項下方法測定樣品含量，計算加樣回收率，結果見表1。

3.9 樣品含量測定：取5 批樣品，分別按“3.2.2”項下方法制備供試品溶液。分別取對照品溶液10μL，供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，計算樣品中羥基紅花黃色素A 含量。結果見表2。

編號 批號 羥基紅花黃色素Amg·g -1 20130315 4.1968 2 20130502 4.2198 3 20130709 4.1866 4 20131006 3.9978 1 20131102 4.1201 5

組別 樣品中images/BZ_87_422_409_423_411.png含量/mg加入對照品量/mg實測量/mg回收率/% /% RSD/%1 2.0126 2.0165 4.1762 99.45 2 2.1002 2.0165 4.0962 98.27 3 2.2166 2.0165 4.1631 98.69 4 2.0057 2.0165 3.9862 97.16 5 2.0106 2.0165 4.1276 98.49 98.15 0.78 6 2.0581 2.0165 3.9066 96.8 6

4 討 論

TLC 鑒別在溶劑選擇上，分別用氯仿和乙醇不同提取，展開劑使用上，分別用苯-乙酸乙酯(10：3)和石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(17：3)進行比較，最后發(fā)現(xiàn)肉桂在乙醇提取下，用石油醚(60 ～90℃)-乙酸乙酯(17：3)進行展開，噴以二硝基苯肼乙醇溶液，斑點顯色，分離效果最佳。

在樣品中羥基紅花黃色素A 的測定實驗中發(fā)現(xiàn)，樣品采用25%甲醇超聲提取，提取液過濾較慢，樣品采用50%甲醇、75%甲醇超聲提取，較采用25%甲醇超聲提取，提取液過濾速度末能得到有效改善，采用甲醇提取提取液過濾速度得到很大改善，但提取不完全，含量較低。最后選用25%甲醇。

在流動相的優(yōu)化中，參考文獻資料，選用了乙腈、甲醇、磷酸系統(tǒng)的不同配比進行試驗，以甲醇：乙腈：0.7%磷酸溶液(26：2：72)為流動相時，能夠獲得較好的分離效果，理論板數(shù)應不低于5000，所以選擇此流動相系統(tǒng)作為本試驗的流動相。

在檢測波長的選擇上，參考文獻資料，我先將對照品溶液在紫外分光光度儀下進行200nm ～700nm 范圍內掃描，結果在402.5nm 處有最大吸收，因此選擇403nm 作為檢測波長。

［1］國家藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標準藏藥［S］.1995：302

［2］國家藥典委員會.中國藥典(一部)［S］.中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［3］常新全，丁麗霞.中藥活性成分分析手冊(上冊)［M］.

［4］吳鋒，豆久鋒，陳忠良.HPLC 測定祛風止痛膠囊中羥基紅花黃色素A［J］.中草藥，2010，11.

［5］許波，萇玲，高玲，等.HPLC 測定膚癢顆粒中羥基紅花黃色素A 的含量［J］.中國醫(yī)院藥學雜志2008，28(21).

［6］彭偉文，高玉橋，梅全喜，等.HPLC 法測定骨科洗劑1號方中羥基紅花黃色素A 的含量［J］.中國藥房，2006：24.