舒筋活血丸中羥基紅花黃色素A的含量測定

楊銀鳳，幸 而，王 巖，曾源泉

（1.廣東藥學院，廣東廣州510006；2.廣州諾金制藥有限公司，廣東廣州513024）

舒筋活血丸中羥基紅花黃色素A的含量測定

楊銀鳳1，2，幸 而2，王 巖1，曾源泉2

（1.廣東藥學院，廣東廣州510006；2.廣州諾金制藥有限公司，廣東廣州513024）

目的 完善舒筋活血丸的企業內控標準提供試驗數據。方法 應用高效液相色譜法（HPLC）對舒筋活血丸（大蜜丸）中的羥基紅花黃色素A進行定量分析。結果 建立了本品中羥基紅花黃色素A的HPLC定量測定法，色譜圖表明主成分專屬性試驗無干擾；精密度試驗相對標準偏差（RSD）為0.13%；重復性試驗RSD為1.95%；進樣量在0.277 2～2.772 0 μg內呈良好線性關系，r=0.999 9；12 h內連續多次測定同一舒筋活血丸樣品溶液，RSD為0.80%，表明穩定性良好；平均加樣回收率為97.85%，RSD為1.88%。結論 HPLC法定量檢測舒筋活血丸中羥基紅花黃色素A方法可靠，可用于企業內部控制舒筋活血丸的質量。

活血； 筋； 紅花； 色素類； 色譜法，高壓液相； 質量控制； 舒筋活血丸； 羥基紅花黃色素A

舒筋活血丸（大蜜丸）主要包括土鱉蟲、紅花、桃仁、大黃、蘇木、續斷、馬錢子（制）等20味中藥，具有舒筋活絡功能，臨床上主要用于跌打損傷、瘀血腫痛的治療[1]。原衛生部頒布的標準中只有性狀檢查和制劑通則檢查，未能準確有效地控制舒筋活血丸的質量。本文通過系列試驗研究，應用高效液相色譜法（HPLC）定量檢測舒筋活血丸中的羥基紅花黃色素A，對其標準進行研究，以有效控制本企業所生產制劑質量。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 FC204電子天平，Shimadzu AUW-120D電子天平，KQ-1000DE型數控超聲波清洗器，TDL-60B離心沉淀機，Waters Ac Quity H UPLC class液相色譜儀，Waters PDA檢測器，Phenomenex C18柱。

1.1.2 試劑 舒筋活血丸（廣州諾金制藥有限公司，每丸6 g，批號：5A01601），羥基紅花黃色素A對照品（按91.8%計，中國藥品生物制品檢定所，批號：11637-200905），乙腈、甲醇（廣州飛恩新材料科技有限公司，色譜級），其余試劑為分析純，硅藻土（天津市大茂化學試劑廠）。

1.2 方法[2-9]

1.2.1 色譜條件 Phenomenex C18柱（250.0 mm×4.6 mm，5 μ）；流動相為乙腈-甲醇-0.7%磷酸溶液（2∶26∶72）[2]，進樣量10 μL，流速1.0 mL/min，按表1進行梯度洗脫，紫外檢測波長為403 nm。A為甲醇，B為乙腈-0.7%磷酸溶液。

表1 洗脫梯度

1.2.2 對照品溶液制備 以25%甲醇為溶劑，將適量羥基紅花黃色素A對照品（按91.8%計）置于容量瓶中[2]，制成130 μg/mL的對照品溶液，即得。

1.2.3 供試品溶液制備 取舒筋活血丸1丸，精密稱定，加2/3樣品量的硅藻土與樣品混合研細，充分轉移至具塞錐形瓶中[4]，精密加入50 mL 25%甲醇，蓋上瓶塞，超聲提取（功率300 W，頻率50 kHz）40 min[2]，搖勻，提取液以4500r/min的速率離心15min，取上清液的續濾液，即得。

1.2.4 陰性樣品溶液制備 取依據同一工藝要求制成的舒筋活血丸缺紅花陰性制劑，按1.2.3項供試品處理方法，制備紅花陰性樣品溶液[5]，即得。

1.2.5 分析方法 分別將對照品、供試品及陰性樣品溶液用0.22 μm濾頭過濾，按1.2.1項下色譜條件注入液相色譜儀測定，得相應峰面積。

1.2.6 專屬性考察 將1.2.2至1.2.4項下各溶液按前述色譜條件分別進行測定，得HPLC色譜圖觀察。

1.2.7 精密度考察 取同一份羥基紅花黃色素A對照品溶液，按1.2.1項下所述條件，重復進樣6次，記錄主峰峰面積，計算得相對標準偏差（RSD）。

1.2.8 線性試驗 精密稱定羥基紅花黃色素A對照品7.55 mg[2]，置于25 mL容量瓶中，以適量25%甲醇充分溶解，定容，即得。分別精密移取上述溶液1、2、3、5、7mL，加25%甲醇稀釋至10 mL，并對所得6個不同濃度的對照品溶液進行測定，記錄色譜峰面積，以樣品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，作回歸曲線，得相關系數。

1.2.9 穩定性考察 分別在0、120、240、360、480、600、720 min按照色譜方法對同一份舒筋活血丸樣品溶液進行測定，記錄色譜峰面積，得目標峰面積的RSD。

1.2.10 重復性試驗 取6份相同批次的樣品，按1.2.3項下方法制得樣品待測液，按1.2.1所述條件分別測定，得色譜峰面積，計算樣品溶液中主成分含量的RSD。

1.2.11 回收率試驗 精密稱取6份已測知主成分含量的舒筋活血丸3.0 g[9]，各加入2.0 g硅藻土研細，精密加入對照品溶液1.7 mL（0.277 2 mg/mL）[4]，按照指定方法檢測，得RSD。

2 結 果

2.1 各組樣品HPLC色譜圖 數據統計結果顯示，舒筋活血丸樣品溶液在羥基紅花黃色素A對照品相同保留時間處有一色譜峰，且陰性樣品溶液在目標峰附近無干擾，達到了系統適應性要求。見圖1～3。

2.2 專屬性考察 HPLC色譜圖顯示陰性樣品主成分保留時間附近無干擾。見圖3。

圖1 對照品溶液HPLC色譜圖

圖2 供試品溶液HPLC色譜圖

圖3 陰性樣品溶液HPLC色譜圖

2.3 精密度考察 6次主峰峰面積分別為3 416 008、3 406 401、3 404 738、3 405 946、3 410 298、3 412 327 μV·s，RSD為0.13%，結果表明本法精密度良好。

2.4 線性試驗 相關系數為 0.999 9，回歸方程 Y= 29 000 000X-39 090（n=6），結果表明進樣量在0.277 2～2.772 0 μg內線性關系良好。

2.5 穩定性考察 目標峰面積的RSD為0.80%。結果表明舒筋活血丸樣品溶液在12 h內具有良好穩定性。

2.6 重復性試驗 樣品溶液中主成分含量的RSD為1.95%。

2.7 回收率試驗 RSD為1.88%，見表2。

表2 回收率試驗結果

3 討 論

本品為大蜜丸，需要用硅藻土進行分散，才能使藥品有效成分得到充分提取。硅藻土的用量約為舒筋活血丸的2/3。由于舒筋活血丸中的藥材細粉粒直徑小，提取液采用濾紙過濾后，濾液很難通過0.22 μm的濾膜，故采用離心沉淀的方法除去細粉藥渣，并對離心的時間和轉速進行了考察，先后采用3 000 r/min 5 min，3 000 r/min 10 min，4 500 r/min 10 min，4 500 r/min 15 min進行離心，根據離心后上層溶液通過0.22 μm微孔濾膜的難易程度，最終選定轉速4 500 r/min離心時間15 min。

傳統工藝采用等度洗脫，20 min內各色譜峰分離度良好，但120min處仍有雜質峰，若洗脫時間少于120min，雜質峰會順延至下一進樣的譜圖，影響譜圖的真實性，故為了減少測定時間，洗除雜質，通過試驗研究，改用梯度洗脫，大大提高了測定效率，并對本方法進行考察，經驗證，方法可靠。因此，本法可作為企業內部控制舒筋活血丸質量的項目之一，也為后續制定法定標準提供了參考。

舒筋活血丸中羥基紅花黃色素A的含量測定目前仍鮮見報道，本文在2010版藥典紅花藥材含量測定項的基礎上進行改進，峰型仍舊有些許拖尾，后續可針對此問題繼續研究。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.23.042

B

1009-5519（2015）23-3629-03

2015-08-17）

關于論文“討論”的基本要求

本刊編輯部

楊銀鳳（1989-），女，廣東普寧人，在讀碩士研究生，主要從事中藥制劑研究與開發工作；E-mail：yangyinfeng1017@163.com。

王巖（E-mail：gdpuwy@126.com）。

現就有關論文中討論的基本要求介紹如下：（1）討論應圍繞論文的主題及中心內容，闡明本論文研究的原理和概念；（2）分析結果中各種數據或現象的理論根據；（3）對結果的理論或實踐意義進行科學評價，但應與主題和結果緊密聯系；（4）客觀、恰當地評價研究成果的應用價值，指出結果的可能誤差；（5）指出存在的問題，提出新的研究方向或展望，給讀者以啟迪；（6）用語應精煉，避免對前文內容、方法與結果的過多重復；（7）應重點突出，主次分明。