苦參素注射液有關物質檢查方法建立

邢晶晶

哈藥集團生物工程有限公司

苦參素注射液有關物質檢查方法建立

邢晶晶

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目的：通過對有關物質檢查方法比較，建立本品有關物質檢查方法。方法：采用高效液相色譜，色譜柱選用氨基色譜柱,以0.1mol/L磷酸二氫鈉-甲醇-乙腈-高氯酸鈉(900∶30∶40∶30)為流動相,流速1.0ml/min,220nm為本品的檢測波長，氧化槐果堿與苦參素分離度符合規定，氧化槐果堿線性為3.0～18.0ug/ml,專屬性試驗表明供試品與降解產物可有效分離，峰純度符合規定，物料平衡，苦參素檢測限為3.1ng，氧化槐果堿檢測限為1.9ng，溶液穩定性試驗結果表明供試品溶液在8小時內穩定。結論：所建立含量測定方法可行，可用于測定本品有關物質。

苦參素；有關物質；氧化苦參堿

苦參素膠囊主要成分為氧化苦參堿，是從中藥苦豆子中提取的一種生物堿，具有直接抗乙型肝炎病毒作用，對肝細胞異常凋亡有抑制作用，治療慢性肝炎取得了良好療效。其原料藥苦參素為氧化苦參堿和極少量氧化槐果堿的混合物。目前檢查苦參素有關物質方法較多，本文通過對相關檢查方法進行比較[1-2]，篩選出適合本品有關物質檢查方法。

1.試驗材料

苦參素原料、氧化槐果堿對照品（批號：111652-200301，來源：中國藥品生物制品檢定研究院）、苦參素注射液為自制樣品，色譜柱為，迪馬Diamonsil柱(4.6*250mm，5um)；檢測波長為210 nm；，Agilent 1260型高效液相色譜儀（DAD檢測器）。

2.方法與結果

2.1 色譜條件

參照上述相關文獻，檢查苦參素有關物質的檢查的色譜條件主要有相為磷酸鹽緩沖液-甲醇(85：15)，乙腈：無水乙醇：磷酸水溶液（pH值2.0）（80：8：12），甲醇：0.2%庚烷磺酸鈉及0.1%冰醋酸水溶液：四氫呋喃（30：70：0.6），0.1mol/L磷酸二氫鈉-乙腈-甲醇-高氯酸鈉(910∶50∶10∶30)為流動相，通過對上述流動上篩選，確定本品的色譜條件為色譜柱選用氨基色譜柱,以0.1mol/L磷酸二氫鈉-甲醇-乙腈-高氯酸鈉(900∶30∶40∶30)為流動相,流速1.0ml/min,檢測波長為220nm。

2.2 雜質分離情況考察

取苦參素粗品，加流動性制成含苦參素粗品1.0mg/ml的溶液，按照上述色譜條件進樣，結果各雜質峰與主峰有效分離，主峰峰純度符合規定，苦參素粗品單一雜質小于0.5%，另取苦參素注射液處方中輔料、氧化槐果堿雜質對照，按照所確定色譜條件進樣，結果輔料不干擾有關物質測定，氧化槐果堿與主峰有效分離，對主峰峰純度進行監測，結果峰純度符合規定。

2.3 樣品溶液制備

精密量取取苦參素供試品，用流動相制成濃度為1.0mg/ml的溶液，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液1.0ml于100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，作為對照品溶液。

2.4 相對相應因子測定

苦參素中主要雜質為氧化槐果堿，該雜質為生產過程中帶入雜質，也為制劑主要降解產物。為有效并方便控制該雜質量，對該雜質與苦參素相對響應因子進行研究。取苦參素對照品及氧化槐果堿各適量，制成系列濃度溶液，根據標準曲線斜率之比，計算二者相對響應因子，氧化槐果堿與苦參素的相對相應因子0.92，可按照相對對照品色譜峰計算該雜質含量。

2.5 方法驗證

通過二極管陣列檢測器監測有關物質檢出情況，結果220nm為最佳檢測波長。

檢測限：取苦參素對照品，制成系列濃度溶液，進樣，當信噪比為4.5：1時，苦參素檢測限為3.1ng，說明供試品溶液濃度可行，可有效檢出相關雜質。另取氧化槐果堿對照品，測定氧化槐果堿的檢測限為1.9ng。另取苦參素及氧化槐果堿對照品，制成線性溶液濃度，進樣，結果苦參素溶液在5ug～1.5mg/ml濃度范圍內線性關系良好，氧化槐果堿溶液在3.0～18.0ug/ml的濃度范圍內線性關系良好。

溶液穩定性試驗：取供苦參素試品溶液及對照溶液，分別于0、1、2、4、6、8小時進樣，評價供試品溶液及對照品溶液的穩定性，供試品溶液在8小時無新雜質峰產生，各雜質峰無明顯變化，對照品溶液峰面積無變化，說明溶液在8小時內穩定。

耐用性試驗：改變本品檢測波長（±5nm）、更換相同品牌不同批號的色譜柱、改變流速（0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min）及流動相比例（±5%），考察雜質檢出情況，結果在各色譜條件下有微小變化時，雜質檢出基本一致，說明方法的耐用性好。

專屬性：取苦參素注射液樣品，對樣品進行酸、堿、氧化、高溫及強光破壞試驗，使用DAD檢測器，全波長監測，考察各種破壞條件下雜質檢出情況。結果220nm為本品最佳檢測波長，確定供試品檢測波長為220nm，供試品在各條件下降解產物約為10%，雜質與主峰可有效分離，峰純度符合規定，各破壞條件下物料平衡（95%～105%）。在主峰3倍保留時間之后未見雜質峰，確定本品相對保留時間為主峰的3倍。

2.6.樣品檢查

取苦參素注射液供試品，按照確定方法進行有關物質檢查，供試品雜質檢出基本一致，單一雜質約為0.3%，總雜質約為0.9%，雜質與主峰分離度良好。

3.結論

通過方法篩選，方法學驗證結果表明所建立的苦參素注射液有關物質檢查方法可行，可用于本品有關物質檢查。

[1]張霞張文華倪海芳.苦參素膠囊中有關物質氧化槐果堿檢查方法比較.寧夏醫學院學報,2004年6月第3卷第26期：185-186.

[2]楊風珍,呂毅,姜秋彥.高效液相色譜法測定苦參素注射液含量[J].西北藥學雜志,1997,(06)：245.

邢晶晶（1982-），女，黑龍江哈爾濱市，本科，哈藥集團生物工程有限公司，化驗員，工程師。