蜂王漿中9種磺胺類藥物殘留測定方法研究

呂斌（浙江省江山市質量技術監督測試所，浙江江山324100）

蜂王漿中9種磺胺類藥物殘留測定方法研究

呂斌
（浙江省江山市質量技術監督測試所，浙江江山324100）

摘要：建立蜂王漿中9種磺胺類藥物殘留的固相萃取-高效液相色譜紫外分析方法。蜂王漿樣品中的磺胺類藥物殘留用乙腈渦旋提取，提取液旋轉濃縮近干后，用硫酸鈉水溶液溶解，再經OasisHLB固相萃取柱凈化，洗脫液經氮氣吹干后，用乙腈和磷酸溶解，用高效液相色譜分析，采用外標法定量。該方法的檢測限為10μg/kg～15μg/kg，回收率在79.4%～84.3%之間，能滿足目前蜂王漿中磺胺類藥物殘留測定要求。

關鍵詞：蜂王漿；磺胺類藥物殘留；高效液相色譜紫外檢測器；固相萃取

磺胺類藥物（sulfonamides，SAs）是指具有對氨基苯磺酰胺結構的一類藥物的總稱，是一類用于預防和治療細菌感染性疾病的藥物。磺胺類藥物具有抗菌譜較廣、性質穩定、使用簡便等特點，因此被廣泛添加到飼料中飼喂給蜂蜜。磺胺藥物在食品或農產品中的殘留，會致使其在人體中蓄積，導致人類對許多細菌產生抗藥性，從而對人類的身體健康造成很大的危害。因此，很多國家對食品中磺胺的使用種類和用量有嚴格的規定。國際食品法典委員會（CAC）和歐美等大多數國家規定食品（包括蜂產品）和飼料中的SAs總量及磺胺二甲基嘧啶等單個SAs的含量不得超過0.1mg/kg。日本則規定食品中不得檢出SAs。

目前我國對磺胺類項目只有蜂蜜檢測標準，分別采用液相色譜-熒光檢測和LC/MS[1-2]，但鮮有相關蜂王漿中磺胺類藥物殘留檢測方法報道，這給我國蜂王漿產品的正常出口造成潛在風險。為了減少抗菌藥物的濫用，進一步控制磺胺類藥物在蜂王漿中的殘留，并與國際檢測的先進水平接軌，必須建立簡單易行的蜂王漿中磺胺類藥物的殘留檢測方法。通過調查，選擇9種磺胺（磺胺喹惡琳、磺胺氯噠嗪、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲氧噠嗪、磺胺噻唑、磺胺多辛、磺胺硝苯、磺胺吡啶）進行方法研究，建立蜂王漿中9種磺胺類藥物殘留分析方法-高效液相色譜紫外測定法。

1　材料與方法

1.1材料

蜂王漿：由浙江江山健康蜂業有限公司提供。

SAs標準品（磺胺喹惡琳、磺胺氯噠嗪、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲氧噠嗪、磺胺噻唑、磺胺多辛、磺胺硝苯、磺胺吡啶）：Sigma公司；磷酸、硫酸鈉均為分析純；乙腈、甲醇均為色譜純；Oasis HLB萃取柱（200mg，6m L）。

高效液相色譜儀配紫外檢測器（日本島津LC-20AB）；無油真空泵（天津奧特賽恩斯儀器有限公司，AP-01D）；旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠，RE-52A）；高速離心機（上海安亭科學儀器廠，TDL-50B）；超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司，KQ2200）；UP超純水器（成都超純科技有限公司，UPT-I-20T）。

1.2方法

1.2.1提取

準確稱取蜂王漿樣品3.00g至50mL離心管中，加入5mL10%硫酸鈉水溶液振搖分散，然后加入30mL乙腈，渦旋提取8min，在6 000 r/min離心5min，吸取上清液，加入20mL乙腈溶液重復提取一次，離心，合并上清液到100mL雞心瓶中，在40℃下用旋轉蒸發儀減壓濃縮至近干，加入5m L硫酸鈉水溶液溶解待凈化。

1.2.2凈化

將樣液過Oasis HLB萃取柱（200mg，6mL，使用前分別用5m L甲醇，5m L水活化），待洗脫液完全流出后，再用3mL水洗柱，在負壓下抽干30min，最后用10mL甲醇洗脫，洗脫液收集到15mL離心管中，在40℃下，氮吹濃縮至近干，用1mL流動相溶解，經0.45μm濾膜后，供HPLC用。

1.3液相色譜操作條件

色譜柱：AgilentHC-C18（2）（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：乙腈+0.015mol/L磷酸梯度洗脫，見表1。

表1　乙腈-0.015mol/L磷酸為流動相梯度洗脫條件Table1　G radientelution condition ofacetonitrile-0.015m ol/L phosphoric acid

檢測波長：270 nm；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；進樣量：10μL。

1.4標準曲線的繪制

準確稱取各磺胺類藥物標準品于容量瓶中，以甲醇定容作為標準貯備液，吸取各標準貯備液，以甲醇稀釋至質量濃度為0～20μg/mL的標準系列，各取10μL進樣分析，根據峰面積與相應的質量濃度進行線性回歸，繪制標準曲線。

2　結果與分析

2.1標準樣品及樣品添加分析色譜圖

實際標樣和添加樣品分離色譜圖見圖1。

圖1　9種磺胺類藥物色譜圖Fig.1　Chrom atogram sofnine su lfonam idesstandardsand samp les

在設定的條件下對標準樣品和樣品進行分析，從添加色譜圖上可以看出，9種磺胺藥物分離較好，沒有明顯的色譜雜質峰干擾。

2.2線性關系和檢出限

分別配制不同濃度的9種磺胺類藥物混合標準溶液，在選定的色譜條件下進行測定，用峰面積對混合標準溶液中各組分的濃度作圖。線性方程和線性相關系數見表2。

2.3回收率和精密度

用不含9種磺胺類藥物的樣品進行兩個添加水平回收率和精密度試驗，結果列于表3。

從表3可以看出9種磺胺類藥物在兩個水平添加的回收率在79.4%～84.3%之間，變異系數小于5.4%，說明該方法能夠滿足對蜂王漿中9種磺胺類藥物的殘留測定。

表2　9種磺胺類藥物的線性方程、相關系數和檢出限Table2　Regression equationsand detection lim itsofnine sulfonam ides

表3　9種磺胺類藥物的回收率（%）和精密度試驗（n=5）Table3　Precisions and recoveries rateofnine su lfonam ides（n=5）

2.4實際樣品測定

應用本方法對一些我市市場上的蜂王漿樣品進行9種磺胺類藥物分析，未檢出上述9種磺胺類藥物殘留。

3　結論

本測定方法操作簡單快速、重現性良好。9種磺胺類藥物在蜂王漿中兩個水平的添加回收率在76.2%～84.3%之間，兩個不同水平的樣品測定（n=5）相對標準偏差為2.6%～6.2%，最低檢出限為10μg/kg。

參考文獻：

[1]中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局.GB/T 18932.5—2002.蜂蜜中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基、嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺對甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲基異噁唑、磺胺二甲氧嘧啶殘留量的測定方法液相色譜法[S].北京:中國標準出版社,2003

[2]中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局.GB/T 18932.17—2003.蜂蜜中16種磺胺殘留量的測定方法液相色譜-串聯質譜法[S].北京:中國標準出版社,2004

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.22.033

收稿日期：2014-05-04

基金項目：江山市事后補助科研項目（2011D09）

作者簡介：呂斌（1983—），男（漢），工程師，碩士研究生，主要從事檢驗檢測工作。

Research of Determ ination of Nine Sulfonam ides Residue in Royal Jelly

LüBin
（Jiangshan Measurement&Test InstituteofQuality&Technical Supervision，Jiangshan 324100，Zhejiang，China）

Abstract：A method for determination of nine sulfonamides residue in royal jelly by using solid-phase extraction high performance liquid chromatography with ultraviolet detector was established.Sulfonamides residuewasextractedwith acetonitrile.The sampleextractwasevaporated under reduced pressure and dissolved with sodium sulfate aqueous solution，and then purified by usingan Oasis HLB column，while the sulfonamides residuewaseluted offvia solid-phase extraction（SPE）cartridgewithmethanol and evaporated to drynesson nitrogen dry evaporator，and the residues were dissolved in acetonitrile and phosphoric acid solution.The sulfonamides derivateswere detected by a liquid chromatography with ultraviolet detector.The recoveries are 79.4%～84.3%，and the limit of detection of themethod is 10μg/kg to 15μg/kg.The developedmethod is suitable tomonitor sulfonamides residue in royal jelly samples.

Keywords：royal jelly；sulfonamides residue；HPLC-SPD；solid-phaseextraction（SPE）