雞骨香提取物抗炎鎮(zhèn)痛作用的實驗研究

趙杰等

【摘 要】 目的：研究雞骨香提取物的抗炎鎮(zhèn)痛作用。方法：采用二甲苯實驗、毛細(xì)血管通透性實驗、角叉菜膠致大鼠足腫脹實驗觀察抗炎作用；采用醋酸扭體實驗、熱板實驗觀察鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果：雞骨香醇提物、水提物能抑制二甲苯致小鼠耳腫脹、醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加、角叉菜膠致大鼠足腫脹，醇提物作用顯著優(yōu)于水提物；醇提物能明顯延長醋酸致小鼠扭體反應(yīng)潛伏期，醇提物、水提物能減少醋酸致小鼠扭體次數(shù)、對小鼠熱板實驗痛閾值無顯著影響。結(jié)論：雞骨香醇提物和水提物均有抗炎、抗外周性疼痛作用，醇提物的抗炎鎮(zhèn)痛作用優(yōu)于水提物。

【關(guān)鍵詞】 雞骨香；抗炎；鎮(zhèn)痛

【中圖分類號】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2015）12-0008-03

雞骨香為大戟科巴豆屬植物雞骨香Croton crassifolius Geisel.的干燥根，性溫、味苦，具有理氣止痛、祛風(fēng)除濕的功效。在嶺南民間常用雞骨香根水煎或泡酒治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、跌打損傷和黃疸等疾病[1-2]。迄今為止，雞骨香化學(xué)成分的研究較多，對活性部位的藥效學(xué)研究較少，本文對雞骨香不同提取物的抗炎鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行初步探討，為確定雞骨香活性部位/活性成分提供藥效學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥材及試劑 雞骨香購自廣東省藥材公司，經(jīng)廣東藥學(xué)院姜曉林副教授鑒定為雞骨香Croton crassifolius Geisel的干燥根；角叉菜膠（批號：132K1003：美國Sigma公司）；鹽酸噴他佐辛（批號：20110607，北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司）；吲哚美辛（批號20110215：廣東華南藥業(yè)集團(tuán)公司）；伊文思藍(lán)（批號：100118，美國Sigma公司，）。

1.2 動物 SPF級ICR小鼠，體重18～22g；SPF級SD大鼠，體重180～220g，均由南方醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供，動物合格證號2011-0054。

1.3 儀器 752N紫外可見分光光度計（上海菁華科技儀器有限公司）；201型酶標(biāo)儀（美國Sigma公司）；Almemo2390-5足腫脹度測定儀（深圳瑞沃德生命科技有限公司）；YLS-6A型智能熱板儀（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院）。

1.4 方法

1.4.1 雞骨香提取物制備 醇提物的制備：稱取雞骨香藥材1.5kg，粉碎后用10倍量的95%乙醇浸泡30min，回流提取3次，提取時間依次為2h、1h、45min，合并提取液，過濾，減壓濃縮回收溶劑，噴霧干燥，得醇提物干燥粉，用前用1%羧甲基纖維素鈉（CMC）溶液研磨、配制成所需濃度的混懸液。

水提物制備：醇提后剩余藥渣加10倍量水，加熱提取2次，分別為2h、1h，合并提取液，過濾，減壓濃縮，噴霧干燥，得水提物干燥粉，臨用前用1% CMC溶液研磨、配制成所需濃度的混懸液。

1.4.2 二甲苯實驗[2] 取小鼠60 只，隨機(jī)分為六組：模型對照組、吲哚美辛組、雞骨香醇提物高、低劑量組、水提物高、低劑量組，每組10只，雌雄各半。按表1劑量灌胃給藥，模型對照組給予等容積1%CMC溶液，1次/d，連續(xù)給藥5d。末次給藥后30min，取二甲苯30μl均勻涂于小鼠右耳前后兩面，30min后將小鼠頸椎脫臼處死，剪下左右耳廓，用直徑7mm打孔器于左右耳同一部位打下圓耳片，稱重，以左右耳片質(zhì)量之差為腫脹度，計算腫脹度抑制率。

1.4.3 毛細(xì)血管通透性實驗[2] 取小鼠60只，隨機(jī)分為六組，每組10只，雌雄各半，動物分組及給藥方法同“1.4.2”。末次給藥30min后給予小鼠尾靜脈注射0.6%伊文思藍(lán)溶液10ml/kg，隨即腹腔注射0.6%冰醋酸10ml/kg，30min后脫臼處死，打開腹腔，用5ml生理鹽水洗滌腹腔，吸出洗滌液，合并，3000r/min離心15min，取上清液于595nm波長處測定吸收度A值，計算抑制率。

1.4.4 角叉菜膠致大鼠足腫脹實驗[3] 取大鼠48只，隨機(jī)分為六組，每組8只，雌雄各半，分組及給藥方法同“1.4.2”，末次給藥后30min，于右后足皮下注射1%角叉菜膠生理鹽水溶液0.1ml，分別在致炎前和致炎后1、4、6h用足腫脹儀測量足爪容積，以致炎前后足爪容積的差值表示腫脹度。

1.4.5 醋酸扭體實驗[4] 取小鼠60只，隨機(jī)分為六組，每組10只，雌雄各半，動物分組給藥方法同“1.4.2”，末次給藥后30min，小鼠腹腔注射0.6%冰醋酸溶液10ml/kg，記錄小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的潛伏期以及20min內(nèi)小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)。

1.4.6 熱板實驗[4] 將雌性小鼠置于預(yù)熱（55±0.5）℃熱板儀，以小鼠舔后足潛伏期為痛閾指標(biāo)，實驗前篩選出60只痛閾值在5～30s小鼠為合格小鼠，隨機(jī)分為六組，每組10只，雌雄各半，動物分組給藥方法同“1.4.2”，按表5劑量灌胃給藥，空白對照組給予等容積1%CMC溶液，首次給藥前測痛閾值2次，間隔5min，取其平均值作為基礎(chǔ)痛閾值，為防止足部燙傷，設(shè)定60s為截止時間，超過60s記做痛閾值為60s，然后按表5給藥，記錄末次給藥后30、60min動物熱板痛閾值。

1.4.7 統(tǒng)計分析 數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)以（x±s）表示，均數(shù)比較用One-way ANOVA分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響 與模型對照組比較，醇提物、水提物高劑量能明顯抑制二甲苯致小鼠耳腫脹，醇提物高劑量作用與吲哚美辛相當(dāng)；醇提物高劑量組與水提物高劑量組比較，耳腫脹度無統(tǒng)計學(xué)差異，醇提物低劑量組的耳腫脹抑制率高于水提物低劑量組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 對醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加的影響 與模型對照組比較，醇提物能抑制小鼠毛細(xì)血管通透性的增加；水提物高劑量有明顯抑制作用（P<0.05），但低劑量差異無統(tǒng)計學(xué)意義。與水提物組比較，醇提物組抑制作用更強(qiáng)（P<0.05），見表2。

2.3 對角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響 角叉菜膠致炎后，模型對照組、水提物組足腫脹度持續(xù)增加，醇提物組于4h時足腫脹度達(dá)到高峰，隨后開始下降。與模型對照組比較，致炎后1h，各組腫脹度無統(tǒng)計學(xué)差異；4h時醇提物高劑量、水提物高劑量有明顯抑制作用；6h時，醇提物以及水提物高劑量能抑制足腫脹，醇提物作用比水提物強(qiáng)（P<0.05），見表3。

2.4 對醋酸致小鼠扭體實驗的影響 與模型對照組比較，醇提物高劑量能明顯延長醋酸致小鼠扭體潛伏時間；醇提物、水提物高劑量能減少小鼠扭體次數(shù)，醇提物、水提物作用比較無統(tǒng)計學(xué)差異，見表4。

2.5 對熱板實驗的影響 各組基礎(chǔ)痛閾值比較無統(tǒng)計學(xué)差異；與空白對照組比較，噴他佐辛在30，60min時痛閾值均明顯延長（P<0.01），其余各實驗組均無統(tǒng)計學(xué)差異，見表5。

3 討論

炎癥是人類疾病最常見的病理過程，從民間的天然藥用資源中尋找抗炎藥物是發(fā)現(xiàn)與創(chuàng)制新藥的重要途徑之一。二甲苯致小鼠耳腫脹、醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加以及角叉菜膠致大鼠足腫脹實驗為三個經(jīng)典的急性炎癥模型；熱板實驗用以評價中樞性鎮(zhèn)痛藥的效果，而醋酸扭體實驗則常用以評價藥物外周性鎮(zhèn)痛作用。本試驗結(jié)果表明雞骨香醇提物、水提物確有抗炎、抗外周性疼痛作用，但醇提物抗炎鎮(zhèn)痛作用顯著優(yōu)于水提物，為雞骨香活性部位的篩選奠定了基礎(chǔ)，亦為其臨床應(yīng)用提供了實驗依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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[2] Xue M， Jiang ZZ， Liu JP， et al. Comparative study on the anti-inflammatory and immune suppressive effect of Wilforlide A[J]. Fitoterapia，2010， 81（8）：1109-1112.

[3] Whittle BA. The use of changes in capillary permeability in mice to distinguish between narcotic and nonnarcotic analgesics[J]. Br J Pharmacol Chemother， 1964， 22（1）：246-253.

[4] Zhao Jie ， Fang Fang， Yu Linzhong， et al. Anti-nociceptive and anti-inflammatory effects of Croton crassifolius ethanol extract[J]. J Ethno pharmacol， 2012， 142（2）：367-373.

（收稿日期：2015.04.19）