PKC-a、K-Ras蛋白在結直腸癌中的表達及意義

王 燕 趙月霞 (寧夏醫科大學總醫院腫瘤內科，寧夏 銀川 750004)

腫瘤形成的原因是由于原癌基因激發活性與抑癌基因失去活性聯合作用而形成〔1〕。蛋白激酶 C(PKC)主要是參與細胞信號轉導、對細胞增殖進行調控、促進腫瘤發生〔2〕。PKC-a屬于PKC的亞型，主要作用于胞質到胞核的信號轉導過程，發揮著關鍵作用〔3〕。Ras基因存在于機體大部分細胞中，臨床研究顯示，K-Ras屬于最常被激活的原癌基因，在結直腸癌患者中顯示，K-Ras基因突變率達到14%～42%〔4〕。通過探討PKC-a、K-Ras蛋白在結直腸癌中的表達及其意義，取得了良好效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院病理科收集的結直腸組織石蠟包埋標本，其中結直腸腺癌組織70例(腺癌組)，男32例，女38例;年齡35～82〔平均(67.2±14.9)〕歲，按照病理類型進行劃分:高分化腺腫瘤24例，中分化腺腫瘤31例，低分化腺腫瘤15例，合并淋巴結轉移患者37例;按照Dukes進行分期:其中A期12例，B期20例，C+D期38例。患者經術后病理診斷均符合直腸癌斷標準〔5〕。另選取結直腸腺瘤組織12例(腺瘤組)及正常結直腸黏膜8例(正常組)。

1.2 方法 主要實驗試劑:PKC-a、K-Ras試劑盒，二氨基聯苯胺(DAB)顯色試劑盒，由博士德生物公司提供。檸檬酸抗原修復液(0.01 mol/L，pH 6.0)、磷酸鹽緩沖液(PBS)(0.01 mol/L，pH7.2～7.4)。免疫組織化學法:采用石蠟切片機對蠟塊進行切片處理，厚度為4 μm。采用PV-9000法對 PKC-a、K-Ras蛋白表達進行檢測，實驗過程嚴格按照試劑盒說明書進行操作。PKC-a、K-Ras的稀釋度分別為 1∶100、1∶200，給予檸檬酸抗原修復，DAB試劑進行顯色;使用已知陽性切片作為陽性對照，使用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 評價指標 ①PKC-a蛋白〔6，7〕:PKC-a蛋白表達結果評估根據染色強度以及陽性細胞所占比例。染色強度:未染色表示細胞0分，淺黃色表示1分，棕黃色表示2分，棕褐色表示3分。陽性細胞所占比例:0分表示陰性，1分表示陽性細胞≤10% ，2分表示陽性細胞11%～50% ，3分表示陽性細胞51%～75% ，4分表示陽性細胞≥75% ，染色強度×陽性細胞所占比例≥2分評估為陽性。②K-Ras蛋白〔8〕:無著色細胞表示“－”，著色細胞在10%～30%之間表示“+”，著色細胞在30%～50% 之間表示“”，著色細胞在 ＞50% 表示“”。“－”、“+”評估為陰性表達，“”、“”評估為陽性表達。分析PKC-a、K-Ras蛋白表達與結直腸癌臨床病理相關性及PKC-a與K-Ras表達的相關性。

1.4 統計學方法 應用SPSS17.0軟件進行χ2檢驗。

2 結果

2.1 免疫組化結果 PKC-a蛋白表達:免疫陽性物質多聚集于細胞質與部分細胞膜位置，主要表現為棕黃色顆粒沉著。腺癌組PKC-a蛋白陽性表達率31.42%(22/70)、腺瘤組50.00%(6/12)、正常組25.00%(2/8)，腺癌組明顯低于腺瘤組與正常組(P＜0.05)。K-Ras蛋白表達:免疫陽性物質多聚集于細胞質。腺癌組K-Ras蛋白陽性表達率52.85%(37/70)、腺瘤組58.33%(7/12)，正常組為25.00%(2/8);腺癌組及腺瘤組明顯高于正常組(P＜0.05)。

2.2 PKC-a、K-Ras蛋白表達與結直腸癌臨床病理相關性分析PKC-a蛋白陽性率與組織病理學分級、合并淋巴結轉移存在相關性(P＜0.05);K-Ras蛋白陽性率與組織病理學分級存在相關性(P＜0.05)。K-Ras蛋白表達與PKC-a蛋白表達呈負相關性(r= －0.734，P=0.00)。見表1。

表1 PKC-a、K-Ras蛋白表達與結直腸癌臨床病理相關性分析〔n(%)〕

3 討論

腫瘤的形成發展過程是多種因素共同作用的結果，其中包括先天遺傳的變更、后天基因的改變以及基因轉錄后進行等〔9〕。機體正常細胞轉變為腫瘤細胞的過程中會失去細胞本身具有的性質，同時得到了腫瘤細胞具有的性質，在整個過程中包含了腫瘤基因的活化以及多個抑制腫瘤基因的失活。

研究〔10〕表明，PKC的主要作用是促進機體細胞的增殖、分化、凋亡及激素的分泌、基因表達等。PKC-a是PKC的重要亞型之一，也是人體細胞轉導系統中的重要分子，其作用對胞質到胞核的信號進行轉導。臨床研究〔11〕顯示，PKC-a在不同類型的腫瘤中，其表達也是存在差異的。PKC-a在肝細胞腫瘤、惡性膠質腫瘤、肺部腫瘤等腫瘤組織中呈現高表達，且可以促進腫瘤細胞的增殖，同時抑制腫瘤細胞凋亡及促進腫瘤細胞的進一步分化。但在大腸腫瘤中卻呈現出低表達〔12〕。

K-ras是機體內最易被激活的原腫瘤基因，基因突變在結腸腫瘤、胰腺腫瘤以及肺部腫瘤的發生率比較高。本研究表明，PKC-a蛋白在結直腸癌發生、發展中發揮著抑制癌基因作用，K-Ras發揮著原腫瘤基因的作用。

綜上所述，在結直腸癌的發生、發展過程中，PKC-a、K-Ras蛋白發揮著重要的作用，兩者的平衡紊亂會導致細胞癌變。

1 谷化平，尚培中.EGFR、VEGF和PTEN在結直腸癌中表達及與其臨床病理特征的關系〔J〕.實用癌癥雜志，2011;26(3):259-62.

2 王偉建，劉海龍，譚首海，等.朊蛋白表達對結直腸癌細胞增殖及侵襲能力的影響〔J〕.中華實驗外科雜志，2014;31(2):269-71.

3 張麗靜，趙增仁，王園園，等.結直腸癌血清Nup88、CEA、CA19-9的表達及其臨床意義〔J〕.中國醫科大學學報，2011;40(8):722-4.

4 廖 存，賀永明，吳留成，等.血清CEA陰性結直腸癌患者血清差異蛋白質的初步篩選〔J〕.結直腸肛門外科，2011;17(3):131-6.

5 喻 鑫，劉 弋.tM2-PK蛋白在結直腸癌中的表達及臨床意義〔J〕.安徽醫科大學學報，2014;49(2):236-9.

6 林明哲.結直腸癌中橋粒芯糖蛋白和核孔蛋白復合體蛋白88表達價值〔J〕.中國老年學雜志，2013;33(19):4848-9.

7 郝立強，傅傳剛，薛 賡，等.結直腸癌患者預后與膜聯蛋白A2高磷酸化的關系〔J〕.中華實驗外科雜志，2014;31(3):630-3.

8 王萬之，丁厚中，史恩溢，等.MTSS1、Ezrin及AnnexinⅡ在結直腸癌中的表達及其臨床意義〔J〕.江蘇大學學報(醫學版)，2012;22(3):265-8，274.

9 馮 潔，黃曉俊，王 祥，等.上消化道黏膜下腫瘤的內鏡下診斷及治療進展〔J〕.現代生物醫學進展，2014;14(7):1398-400，1356.

10 黃俊杰，梅廣林，胡衛東，等.Cortactin表達水平與結直腸癌細胞分裂狀態及臨床病理關系的研究〔J〕.中華普通外科雜志，2014;29(4):280-4.

11 黃澤彬，張澤延，張曉東，等.非洲爪蟾驅動蛋白樣蛋白2靶蛋白C'末端SBP-3×Flag標記的HCT116結直腸癌細胞模型的建立〔J〕.中國醫學科學院學報，2011;33(6):624-8.

12 楊紅莉，李瑞婧，李子木，等.何首烏R50部位誘導人結直腸癌細胞凋亡的作用機制〔J〕.中國藥理學與毒理學雜志，2014;28(1):51-6.