整合素連接激酶、醌氧化還原酶-1和增殖細胞核抗原在肝細胞癌中的表達及意義

張書俊 (南陽市中心醫(yī)院普外科，河南 南陽 473000)

肝細胞癌病變進展快，轉(zhuǎn)移率高。近來相關(guān)研究認為肝細胞癌生物學行為與多種基因和蛋白的表達異常有關(guān)〔1〕。整合素連接激酶(ILK)能夠參與整合素、生長因子、WNT等信號傳導通路，與細胞的持續(xù)增殖、黏附性喪失、遷移及血管的生成可能有關(guān)〔2〕。NADPH:醌氧化還原酶1(NQO-1)是一種黃素酶，在不同腫瘤的表達不盡相同〔3，4〕，關(guān)于NQO-1在肝細胞癌中的表達及其與ILK和增殖細胞核抗原(PCNA)的關(guān)系尚未見報道。本研究關(guān)注肝細胞癌術(shù)后組織中ILK、NQO-1和PCNA的表達，探討其關(guān)系及臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2004年1月至2008年10月我院行肝細胞癌根治手術(shù)患者的術(shù)后蠟塊資料作為觀察組79例。納入均符合WHO中關(guān)于肝細胞癌的診斷標準。男40例，女39例;年齡50～79歲，平均65.4歲;高分化40例，中分化16例，低分化23例。術(shù)前均未進行放、化療。同時選取距離腫瘤邊緣＞3 cm的正常肝組織55例作為對照組，其中男30例，女25例;年齡51～78歲，平均64.3歲。兩組一般資料差異無統(tǒng)計學意義。

1.2 ILK、NQO-1和PCNA蛋白表達的檢測方法 ILK、NQO-1和PCNA蛋白的濃縮液均購自美國Santa Cruz公司。枸櫞酸抗原修復液、DAB顯色試劑等相關(guān)試劑盒均購自北京中杉金橋公司。ILK、NQO-1和PCNA依不同比例稀釋后進行預實驗，并設陽性對照和陰性對照。選擇最理想的配比濃度進行正式實驗。蛋白的檢測應用免疫組化SP法。嚴格按實驗步驟進行操作。嚴格質(zhì)量控制。

1.3 ILK、NQO-1和PCNA陽性的判讀方法 ILK、NQO-1的陽性表達均位于細胞質(zhì)中，PCNA的陽性表達位于細胞核中，以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應細胞。計數(shù)5個高倍視野，計數(shù)總和，以陽性率≥25%為陽性，以陽性率＜25%為陰性。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SAS6.12軟件進行t檢驗、χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 ILK、NQO-1和PCNA在兩組中表達的比較 觀察組ILK、NQO-1和PCNA表達的陽性率中明顯高于對照組(P＜0.000 1)。見表1。

表1 ILK、NQO-1和PCNA在兩組陽性表達的比較〔n(%)〕

2.2 ILK、NQO-1和PCNA的表達與肝細胞癌臨床病理特征的關(guān)系 觀察組中ILK、NQO-1和PCNA的表達與腫瘤的分化程度、TNM分期、腫瘤最大徑及Ki67的表達相關(guān)。見表2。

表2 ILK、NQO-1和PCNA的表達與肝細胞癌臨床病理特征的關(guān)系〔n(%)〕

2.3 肝細胞癌中ILK、NQO-1和PCNA表達的關(guān)系 ILK和PCNA(r=0.54，P=0.009 7)、NQO-1 和 PCNA(r=0.55，P=0.010 9)的表達均具有正相關(guān)性。

2.4 肝細胞癌中ILK、NQO-1和PCNA不同表達與患者生存時間的關(guān)系 觀察組中ILK、NQO-1和PCNA高表達患者的生存時間明顯短于低表達患者。見表3。

表3 肝細胞癌中ILK、NQO-1和PCNA不同表達與患者生存時間的關(guān)系(±s，個月)

表3 肝細胞癌中ILK、NQO-1和PCNA不同表達與患者生存時間的關(guān)系(±s，個月)

分組 n 生存時間 t值 P值ILK - 29 19.36±4.57 8.98 0.009 2+ 50 10.56±4.50 NQO-1 - 36 18.43±4.56 8.87 0.010 9+ 43 9.98±4.68 PCNA - 9 27.31±4.54 13.51 0.001 2+ 70 11.84±5.25

3 討論

肝細胞癌的進展快，增殖指數(shù)高，轉(zhuǎn)移率高。近來人們關(guān)注ILK的表達與腫瘤的關(guān)系，并認為ILK對腫瘤的進展有一定促進作用。ILK基因定位于染色體11p5.5～11p15.4，是一種相對分子質(zhì)量為59 kD的Ser/Thr蛋白激酶，通過介導細胞與細胞外基質(zhì)的跨膜信號轉(zhuǎn)導，調(diào)控機體多條信號轉(zhuǎn)導，參與細胞的生長、增殖、分化及凋亡過程〔5，6〕。有研究認為ILK可以抑制蛋白激酶B的生物學活性，調(diào)控細胞周期及細胞的凋亡過程，影響腫瘤的生長〔7〕。NQO-1蛋白是一種胞質(zhì)黃素酶，其基因定位于16q22染色體，在正常肝細胞中低表達，當其表達升高時，在一定程度上與腫瘤發(fā)生相關(guān)〔8〕。有研究認為不同NQO-1基因亞型編碼的酶類呈現(xiàn)不同的活性〔9〕。如由TT純合子誘導的NQO-1活性失調(diào)，可以引起肝細胞對外源性致腫瘤物質(zhì)的解毒功能下降〔10〕。也有研究則認為NQO-1可以作為一個氧化應激反應調(diào)節(jié)因子，對惡性腫瘤的進展起一定的調(diào)節(jié)作用〔11〕。PCNA是一種非組核蛋白，作為一種細胞增殖的上調(diào)因子，通過與周期性蛋白激酶結(jié)合引起細胞的增殖過程〔12〕。有學者認為PCNA為DNA聚合酶的輔助因子，直接參與DNA的合成，尤其是DNA增殖及表達失調(diào)最明顯的腫瘤細胞〔13〕。有學者認為PCNA表達較Ki67要理想，可以囊括Ki67陽性表達的所有細胞，因此其標記增殖更加全面〔14〕。

本實驗結(jié)果提示ILK、NQO-1和PCNA表達增強對病變進展有明顯的促進作用，三種蛋白直接和間接作用均能誘導腫瘤惡變。ILK、NQO-1和PCNA對調(diào)節(jié)腫瘤的分化有重要價值，分化是細胞由幼稚到成熟的過程，也是細胞惡變的重要過程，調(diào)節(jié)細胞分化是機體內(nèi)在的機制，由于蛋白表達失調(diào)的明顯影響，使腫瘤細胞停滯在低分化或未分化狀態(tài)，使腫瘤細胞的成熟過程受到更多的影響，也使腫瘤的惡性程度增高〔15，16〕。由于腫瘤的體積與腫瘤的生長密切相關(guān)，尤其是生長速度快的惡性腫瘤，而本實驗結(jié)果顯示ILK、NQO-1和PCNA均與腫瘤最大徑和腫瘤的TNM分期相關(guān)，因此三者在一定程度上參與腫瘤的生長過程。由于以上因素均與腫瘤的預后相關(guān)，因此ILK、NQO-1和PCNA的表達可能對判斷腫瘤的預后有一定價值，同時ILK、NQO-1和PCNA不同表達患者的生存時間比較的結(jié)果直接證實了上述結(jié)論，即ILK、NQO-1和PCNA高表達患者的預后差。本實驗結(jié)果直接證實了ILK、NQO-1對增殖的促進作用，尤其是PCNA與Ki67表達更趨一致性，提示ILK、NQO-1在對腫瘤影響過程中，參與了細胞的增殖過程，尤其是失控性增殖反應過程。本文提示ILK和NQO-1高表達時可以明顯刺激細胞增殖，此時PCNA表達升高，腫瘤體積增大。也有觀點認為ILK、NQO-1激活后，凋亡信號傳導受到影響，正常細胞的不斷增殖，而凋亡受到阻滯，細胞逐漸惡變〔17，18〕。

綜上，肝細胞癌中ILK、NQO-1和PCNA高表達，對病變的進展有重要影響，術(shù)后聯(lián)合檢測ILK、NQO-1和PCNA的表達可能對判斷生物學行為和預后有一定價值。ILK、NQO-1對PCNA表達的增殖有直接作用，這可能是兩種蛋白的作用機制之一。

1 Peroukides S，Bravou V，Varakis J，et al.ILK overexpression in human hepatocellular carcinoma and liver cirrhosis correlates with activation of Akt〔J〕.Oncol Rep，2008;20(6):1337-44.

2 Choi YP，Kim BG，Gao MQ，et al.Targeting ILK and β4 integrin abrogates the invasive potential of ovarian cancer〔J〕.Biochem Biophys Res Commun，2012;427(3):642-8.

3 Yang Y，Zhang Y，Wu Q，et al.Clinical implications of high NQO1 expression in breast cancers〔J〕.J Exp Clin Cancer Res，2014;33(5):14.

4 馬 躍，林黎娟，樸俊杰，等.結(jié)直腸癌中NQO1蛋白表達的臨床病理及預后意義〔J〕.臨床與實驗病理學雜志，2014;30(4):366-8.

5 劉 騫，趙 玫，趙 平，等.ILK、HSP90相互作用在胃癌中表達的研究〔J〕.中國腫瘤臨床，2005;32(7):365-7.

6 孫曉杰，林 梁，趙 玫，等.ILK與HSP90相互作用對乳腺癌細胞遷移影響及其機制的探討〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2012;19(3):161-3.

7 Lin SW，Ke FC，Hsiao PW，et al.Critical involvement of ILK in TGFbeta1-stimulated invasion/migration of human ovarian cancer cells is associated with urokinase plasminogen activator system〔J〕.Exp Cell Res，2007;313(3):602-3.

8 Lou Y，Li R，Xiong L，et al.NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1(NQO1)C609T polymorphism and lung cancer risk:a meta-analysis〔J〕.Tumour Biol，2013;34(6):3967-79.

9 Siegel D，Kepa JK，Ross D.NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1(NQO1)localizes to the mitotic spindle in human cells〔J〕.PLoS One，2012;7(9):e44861.

10 Jamshidi M，Bartkova J，Greco D，et al.NQO1 expression correlates inversely with NFκB activation in human breast cancer〔J〕.Breast Cancer Res Treat，2012;132(3):955-68.

11 Wakai T，Shirai Y，Sakata J，et al.Prognostic significance of NQO1 expression in intrahepatic cholangiocarcinoma〔J〕.Int J Clin Exp Pathol，2011;4(4):363-70.

12 Kuang RG，Wu HX，Hao GX，et al.Expression and significance of IGF-2，PCNA，MMP-7 and α-actin in gastric carcinoma with Lauren classification〔J〕.Turk J Gastroenterol，2013;24(2):99-108.

13 Zhu S，Sun P，Zhang Y，et al.Expression of c-myc and PCNA in Epstein-Barr virus-associated gastric carcinoma〔J〕.Exp Ther Med，2013;5(4):1030-4.

14 Sun J，Xiong J，Zhen Y，et al.P53 and PCNA is positively correlated with HPV infection in laryngeal epitheliopapillomatous lesions in patiets with different ethnic backgrounds in Xinjiang〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev，2012;13(11):5439-44.

15 Yao X，Li D，Xiong DM，et al.A novel role of ribonuclease inhibitor in regulation of epithelial-to-mesenchymal transition and ILK signaling pathway in bladder cancer cells〔J〕.Cell Tissue Res，2013;353(3):409-23.

16 倪 靜，秦麗娟，吳擁軍，等.肺癌組織中NRF2、KEAP1和NQO1蛋白的表達〔J〕.鄭州大學學報(醫(yī)學版)，2012;47(4):456-8.

17 Sameer AS，Shah ZA，Syeed N，et al.NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1(NQO1)Pro187Ser polymorphism and colorectal cancer predisposition in the ethnic Kashmiri population〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev，2010;11(1):209-13.

18 Zellweger T，Ninck C，Bloch M，et al.Expression patterns of potential therapeutic targets in prostate cancer〔J〕.Int J Cancer，2005;113(4):619-28.