老年骨肉瘤患者術(shù)后組織中Kindlin－2、furin和人第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因的表達及意義

劉書華 王 路 趙嘉懿 (浙江省舟山醫(yī)院骨科，浙江 舟山 316000)

骨肉瘤流行病學的統(tǒng)計中常呈雙峰狀，常見于青年人，在老年人少見，但是在老年人的發(fā)病過程中常伴有自身特征，以蛋白的失調(diào)和異常增殖過程為主。Kindlin－2蛋白(Kindlin－2)是黏著斑蛋白家族的重要成員，可以調(diào)節(jié)多種生物學過程，如增殖、黏附和遷移過程〔1，2〕。弗林蛋白酶(Furin)是一種常見的前體蛋白加工酶，與其依附的底物多，其功能較為復雜，近期人們關注Furin的異常表達時對腫瘤的作用〔3，4〕。抑癌基因人第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因(PTEN)是一種明確的腫瘤抑制基因，可以對細胞周期及凋亡有明顯的影響，進而抑制腫瘤的生長及進展〔5，6〕。本文關注老年骨肉瘤患者術(shù)后組織中Kindlin－2、Furin和PTEN的表達，探討三者的關系及臨床價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2009年1月至2013年6月我院確診為骨肉瘤、同時行手術(shù)切除的老年患者作為觀察組，共78例，均符合WHO中關于骨肉瘤的診斷標準，同時經(jīng)病理醫(yī)師確診。年齡60～87歲，平均(69.8±5.4)歲。男43例，女35例。60例骨樣骨瘤組織作為對照組，年齡60～78歲，平均(65.6±5.7)歲。男30例，女30例。兩組常規(guī)資料無明顯差別，具有可比性。

1.2 Kindlin－2、Furin 和 PTEN 蛋白的檢測方法 Kindlin－2、Furin和PTEN試劑均為濃縮液，均購自武漢博士德生物工程公司。在正式檢測前，三種蛋白均依不同比例進行預實驗，并應用染色最理想的濃度進行正式實驗。Kindlin－2、Furin和PTEN蛋白檢測采用免疫組化SP法，應用DAB顯色，完全按說明書的要求進行操作，嚴格質(zhì)量控制，減少人為誤差。

1.3 Kindlin－2、Furin 和 PTEN 結(jié)果的判讀 Kindlin－2、Furin 和PTEN均以細胞質(zhì)中顯現(xiàn)中－強的棕黃色顆粒認定為陽性細胞(弱陽性細胞不計為陽性細胞)，選擇10個染色密集的陽性細胞區(qū)域，計數(shù)10個高倍(400倍)視野，計算陽性細胞的百分率，取平均值。均以陽性率≥5%計為陽性，以陽性率＜5%計為陰性。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SAS6.12統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗、線性相關分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組中Kindlin－2、Furin和PTEN蛋白表達陽性率的比較觀察組中Kindlin－2、Furin陽性表達明顯高于對照組，PTEN陽性表達明顯低于對照組(均P＜0.000 1)，見表1。

2.2 觀察組不同臨床特征中Kindlin－2、Furin和PTEN表達陽性率的比較 觀察組中3種蛋白表達的陽性率均于腫瘤的最大徑線、有無軟組織浸潤及不同Ennecking分期的比較中差別有統(tǒng)計學意義。見表2。

表1 兩組Kindlin-2、Furin和PTEN蛋白表達陽性率的比較〔n(%)〕

表2 觀察組不同臨床特征中Kindlin-2、Furin和PTEN表達陽性率的比較〔n(%)〕

2.3 觀察組中Kindlin-2、Furin和PTEN表達的相關性分析觀察組中Kindlin-2與PTEN(r= －0.45，P=0.041 5)、Furin和PTEN(r=－0.49，P=0.035 4)的表達均呈負相關性。其他指標間未見明顯的相關性(P＞0.05)。

3 討論

老年人常會有退行性改變，骨組織常伴有骨質(zhì)疏松，在此過程中有蛋白的失調(diào)。而老年人的骨肉瘤是原發(fā)于髓內(nèi)的高級別惡性腫瘤，其腫瘤性細胞產(chǎn)生骨樣基質(zhì)〔7，8〕。老年人的骨肉瘤鏡下表現(xiàn)一般是高度間變、多形性的腫瘤，形成可以是上皮樣、漿細胞樣、紡錘形、橢圓形、小圓細胞、透明細胞、單核或多核巨細胞樣。腫瘤局部浸潤性生長和迅速的全身血行擴散是重要的生物學行為。一般來說年齡、性別、腫瘤大小、分期均可以用于預后的判斷。相關研究認為老年人骨肉瘤的生物學行為程度更高〔9〕。目前基因和蛋白表達失調(diào)用于腫瘤發(fā)生和研究生物學行為的判斷上。Kindlin是個多功能的家族，其不僅介導腫瘤細胞質(zhì)惡變，同時對細胞內(nèi)信號的轉(zhuǎn)導和細胞增殖有重要的作用〔10，11〕。Kindlin-2是家族中的重要成員，常于細胞質(zhì)中表達，尤其是黏著斑的位置，高表達后引起轉(zhuǎn)錄的進行，同時將細胞與細胞間的信號進行傳遞，引起黏附和遷移功能的改變〔12，13〕。Furin可以調(diào)節(jié)腫瘤的生物學功能，對多肽的合成和分泌、細胞膜相關受體的成熟過程、相關級聯(lián)蛋白的激活有重要作用〔14，15〕。PTEN在正常黏膜和骨組織中高表達，被認為是腫瘤抑制基因，其特點是減少細胞增殖過程，誘導細胞的凋亡，減少腫瘤失控性增生的發(fā)生〔16〕。當其表達下調(diào)或丟失后，腫瘤細胞的增殖活性提高，侵襲能力增加，轉(zhuǎn)移潛能升高〔17〕。

本實驗結(jié)果提示Kindlin-2和Furin高表達、PTEN低表達是老年人骨肉瘤發(fā)生的重要促進因素。Kindlin-2、Furin和PTEN參與腫瘤的生長及浸潤過程，也提示Kindlin-2和Furin高表達、PTEN低表達可以有效地促進腫瘤進展過程。有學者認為轉(zhuǎn)化生長因子β可以影響Kindlin蛋白的表達，加速細胞的分化，引起細胞的增殖過程增強，提高腫瘤細胞的惡性潛能〔18〕。也有研究認為Kindlin和血管的關系密切，即Kindlin-2可以促進腫瘤間質(zhì)的血管新生和血管形成，并可以血管內(nèi)皮生長因子作為橋梁，促進腫瘤的生長〔12〕。本文提示Kindlin-2和Furin的作用過程均與PTEN的表達相關，也提示Kindlin-2和Furin表達上調(diào)后可以引起下游蛋白PTEN的表達下降，對腫瘤性生長和進展的抑制作用減弱，腫瘤加速生長和侵襲。也有觀點認為PTEN對腫瘤抑制作用減弱后，促腫瘤生長的基因相對激活，從而引起細胞增殖分化失控、凋亡障礙以及血管生成通路異常，加速腫瘤的進展〔6〕。

綜上，老年骨肉瘤患者術(shù)后組織Kindlin-2和Furin高表達，PTEN低表達，不僅促進腫瘤發(fā)生，還促進腫瘤進展。Kindlin-2和Furin對骨肉瘤的作用可能與其下調(diào)PTEN表達有關。

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