HPLC法對(duì)點(diǎn)地梅等七種民族藥的槲皮素山奈酚的測(cè)定

何可群　呂昱　楊瓊　趙宇中　衛(wèi)亞麗

摘要：利用HPLC法測(cè)定了7種民族藥——點(diǎn)地梅、陰地蕨、地桃花、華中鐵角蕨、白馬骨、刺三甲、飛龍掌血中的槲皮素和山奈酚含量。以C18色譜柱（100 mm×4.6 mm，5 μm）為固定相，以甲醇-0.4%磷酸水（45∶55，V/V）為流動(dòng)相，柱溫30 ℃，流速0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)360 nm。結(jié)果表明，槲皮素和山奈酚的線性范圍為2.5～25.0 mg/mL，相關(guān)系數(shù)分別為0.999 8和0.999 9；精密度試驗(yàn)RSD（n=5）和穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD（n=5）均小于3%，加樣回收率（n=5）達(dá)到98%以上。該法簡(jiǎn)單可靠，重現(xiàn)性好，適用于點(diǎn)地梅等民族藥中的槲皮素及山奈酚分析。

關(guān)鍵詞：HPLC；民族藥；槲皮素；山奈酚

中圖分類號(hào)：R917 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2015）10-2486-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.10.049

隨著生命科學(xué)的發(fā)展和生活水平的提高，人類對(duì)藥物質(zhì)量提出了更高要求[1]。在開(kāi)發(fā)高效、低毒綠色新藥的過(guò)程中，一些少數(shù)民族特色藥用植物越來(lái)越受到研究者的青睞，對(duì)民族藥用植物開(kāi)展系統(tǒng)研究是解釋其藥用功效和挖掘新藥資源的重要途徑[2]。點(diǎn)地梅、陰地蕨、地桃花、華中鐵角蕨、白馬骨、刺三甲、飛龍掌血等是中國(guó)西南地區(qū)白族、苗族等少數(shù)民族的常見(jiàn)名族藥，其使用歷史悠久、療效確切[3-8]，但目前均未對(duì)其開(kāi)展系統(tǒng)研究。槲皮素及山奈酚是重要的黃酮苷元，近年研究表明，槲皮素具有抗菌、祛痰、止咳、降血壓、降血脂等功效；山奈酚具有抗菌、抗炎、止咳、抗癌等活性，常見(jiàn)于藥用植物[9，10]。本試驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定了點(diǎn)地梅等7種民族藥用植物中的槲皮素及山奈酚含量，以期為相關(guān)民族藥的開(kāi)發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

點(diǎn)地梅、陰地蕨、地桃花、華中鐵角蕨、白馬骨、刺三甲、飛龍掌血等樣品信息見(jiàn)表1，標(biāo)本保存于貴州民族大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院藥學(xué)教研室。

槲皮素（117-39-5）及山奈酚（520-18-3）均購(gòu)于貴州迪大科技有限責(zé)任公司。磷酸、無(wú)水甲醇均為色譜純，濃鹽酸為分析純，去離子水。

1.2 儀器與試劑

高效液相色譜儀（Agilent 1260 LC，美國(guó)安捷倫儀器有限公司），配備可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器，756PC紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司），METTLERAE240分析天平（上海天平儀器廠），數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州博遠(yuǎn)實(shí)驗(yàn)分析儀器有限公司）

1.3 方法

1.3.1 對(duì)照品儲(chǔ)備液的配制 稱取槲皮素、山奈酚各20 mg于50 mL容量瓶中，以甲醇定容，搖勻，得400 mg/mL的單一對(duì)照品儲(chǔ)備液備用。

1.3.2 供試品溶液制備 參照文獻(xiàn)[11，12]，將自然晾干的點(diǎn)地梅等樣品于60 ℃放置3 h，粉碎過(guò)40目篩，稱取適量樣品粉末，用體積分?jǐn)?shù)80%的甲醇溶液20 mL浸泡，75 ℃水浴回流提取2次，每次1 h，合并提取液，冷卻過(guò)濾，濾液用80%甲醇溶液補(bǔ)足至40 mL，加10 mL 35%（V/V）濃鹽酸，85 ℃水浴回流水解1 h，迅速冷卻，用甲醇定容至50 mL，搖勻，臨用前過(guò)0.45 μm濾膜。

1.3.3 色譜分析 Agilent Eclipse plus C18色譜柱（100 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-0.4%磷酸水溶液（45∶55，V/V），流速0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)360 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜分析

對(duì)照品及樣品色譜圖見(jiàn)圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，目標(biāo)物得到較好的分離。

2.2 線性關(guān)系考察

取標(biāo)準(zhǔn)溶液母液配制成槲皮素、山奈酚濃度均為2.5，5.0，10.0，15.0，20.0，25.0 mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，以0.45 μm濾膜過(guò)濾后，分別進(jìn)樣10 μL，在上述色譜條件下測(cè)定峰面積，以對(duì)照品溶液濃度X（mg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積YmAu·S為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得槲皮素、山奈酚標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍分別為：槲皮素Y=43.86X-19.94，r=0.999 8；山奈酚Y=29.85X-13.24，r=0.999 9。結(jié)果表明，槲皮素及山奈酚在2.5～25.0 mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.3 精密度試驗(yàn)

將質(zhì)量濃度均為20.0 mg/mL的槲皮素、山奈酚混合對(duì)照品溶液，同上法分析，連續(xù)進(jìn)樣5次，槲皮素及山奈酚峰面積的RSD分別為0.98%、0.79%，表明方法精密度良好。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批點(diǎn)地梅樣品5份，同上法測(cè)定，計(jì)算槲皮素及山奈酚的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)，其RSD分別為1.86%和1.92%，表明方法重復(fù)性良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

將同一供試品溶液在0、2、4、8、10 h時(shí)，同上法測(cè)定，計(jì)算槲皮素及山奈酚的RSD分別為點(diǎn)地梅1.46%、1.92%；陰地蕨1.53%、1.39%；地桃花1.45%、1.79%；華中鐵角蕨1.53%、2.18%；白馬骨1.56%、2.07%；刺三甲1.97%、1.89%；飛龍掌血1.76%、2.09%。表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 回收率試驗(yàn)

稱取5份已知含量的陰地蕨樣品各0.250 g，分別加入山奈酚標(biāo)準(zhǔn)溶液適量；稱取5份已知含量的陰地蕨樣品各0.125 g，分別加入槲皮素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量。同上法分析，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.7 樣品測(cè)定

稱取7種民族藥供試樣品各3份，同上法分析，結(jié)果見(jiàn)表3。

3 小結(jié)

點(diǎn)地梅、陰地蕨、地桃花、華中鐵角蕨、白馬骨、刺三甲、飛龍掌血等是我國(guó)西南地區(qū)多個(gè)少數(shù)民族民間常用草藥，但迄今為止，相關(guān)資源開(kāi)發(fā)利用較為緩慢。本研究用HPLC法對(duì)它們的槲皮素及山奈酚含量進(jìn)行研究，結(jié)果表明，點(diǎn)地梅、陰地蕨、地桃花中都含有豐富的槲皮素及山奈酚；華中鐵角蕨含豐富的山奈酚而不含槲皮素；白馬骨含有少量山奈酚而含槲皮素的量低于本方法檢測(cè)下限；刺三甲及飛龍掌血都只含槲皮素而不含山奈酚。該結(jié)果可為挖掘上述民族藥資源、研究民族藥抗病機(jī)理提供參考。

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