曲札茋苷平衡溶解度和表觀油水分配系數(shù)的測(cè)定*

方 芳，陳云建，安利貞，龔云麒

（昆明制藥集團(tuán)股份有限公司，云南昆明650100）

曲札茋苷為拉薩大黃的主要脂溶性成分，是一種二苯乙烯苷類化合物。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道二苯乙烯類的化合物具有多種藥理活性，如降血脂[1]、神經(jīng)保護(hù)[2]、并能顯著減輕腦梗塞后的缺血再灌注造成的損傷[3-5]。藥物的理化參數(shù)與其在生物體內(nèi)膜滲透性具有很大相關(guān)性，有助于預(yù)測(cè)藥物動(dòng)力學(xué)性狀，本文對(duì)曲札茋苷的平衡溶解度、油水分配系數(shù)進(jìn)行測(cè)定[6-15]，為曲札茋苷的吸收研究、新劑型的開發(fā)及其他藥學(xué)研究提供參考。

1 儀器與試劑

日本島津UV－2450 紫外/可見分光光度計(jì)，梅特勒－托利多FE20 型實(shí)驗(yàn)室pH 計(jì)，德國(guó)Julabo SW22 型恒溫水浴振蕩器（Julabo 技術(shù)有限公司）。曲札茋苷對(duì)照品由昆明制藥集團(tuán)股份有限公司藥物研究院自制；鹽酸、氯化鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、氫氧化鈉、正辛醇等均為分析純，水為自制重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 最大吸收波長(zhǎng)的確定

精密稱取曲札茋苷適量用75%甲醇配制成濃度為（6μg/mL）的對(duì)照品溶液，在波長(zhǎng)190～700nm 的波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，曲札茋苷溶液的最大吸收波長(zhǎng)為319nm，見圖1。

圖1 曲札茋苷紫外掃描圖

2.2 曲札茋苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

精密稱取曲札茋苷儲(chǔ)備液適量，加蒸餾水稀釋至刻度分別制得濃度為3.06，4.08，5.10，8.16，9.18，10.2μg/mL 的一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，照紫外可見分光光度法，用紫外分光光度計(jì)在319 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以測(cè)定結(jié)果計(jì)算得線性回歸方程為：Y=0.0709x+0.0169，r2=0.9992，表明曲札茋苷在濃度3.06～10.2μg/mL 范圍內(nèi)吸光度與濃度呈良好線性關(guān)系。

2.3 準(zhǔn)確度與精密度考察

按“標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”方法，配制濃度分別為4.02，5.12，6.24mg/L 的曲札茋苷水溶液，在319nm處測(cè)定各溶液的吸光度，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線技術(shù)實(shí)測(cè)濃度，每個(gè)濃度平行測(cè)定6 次，各濃度下測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均小于1.0%，低、中、高3 個(gè)濃度下的平均回收率分別為99.04%，99.48%，98.06%.結(jié)果表明，該測(cè)定方法的準(zhǔn)確度和精密度良好。

2.4 水溶液穩(wěn)定性考察

精密稱取曲札茋苷5.0mg 于50mL 容量瓶中，加適量水超聲至溶解，加水并定容至刻度，精密量取2mL 至50mL 容量瓶中，加水稀釋并定容，得到濃度為4.0μg/mL 的對(duì)照品溶液。按照紫外分光光度法，分別于0，10，20，30，40min 測(cè)定其吸光度，測(cè)定結(jié)果的RSD 均小于2.0%，表明曲札茋苷水溶液在40min 內(nèi)有較好的穩(wěn)定性，結(jié)果見表1。

測(cè)定結(jié)果表明KPC-XM18 水溶液在40min 內(nèi)有較好的穩(wěn)定性。

2.5 0.1mol/L HCL 溶液穩(wěn)定性考察

精密稱取曲札茋苷5.0mg 于50mL 容量瓶中，加適量0.1mol/L HCL 溶液超聲至溶解，加0.1mol/L HCL 溶液定容至刻度，精密量取2mL 至50mL 容量瓶中，加0.1mol/L HCL 溶液稀釋并定容，得到濃度為4.0μg/mL 的溶液。按照紫外分光光度法，分別于0，10，20，30，40min 測(cè)定其吸光度，測(cè)定結(jié)果的RSD均小于2.0%，表明曲札茋苷水溶液在40min 內(nèi)有較好的穩(wěn)定性，結(jié)果見表1。

表1 不同溶液的穩(wěn)定性考察結(jié)果

2.6 不同pH 緩沖鹽的配制

按《中華人民共和國(guó)藥典》2010 年版附錄配制pH 為：3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0 的磷酸鹽緩沖液用pH 計(jì)驗(yàn)證，若有偏離，用0.1mol/L 的HCl 或0.1mol/L的NaOH 校正酸度為所需數(shù)值。最后校正結(jié)果的pH 分別為3.11，4.13，5.00，6.00，7.12，8.05。

2.7 平衡溶解度的測(cè)定

稱取曲札茋苷約0.4g 數(shù)份，分別置于50mL 具塞三角瓶中，分別加入水、0.1mol/L HCL、生理鹽水、pH3.11 磷酸鹽緩沖溶液、pH4.13 磷酸鹽緩沖溶液、pH5 磷酸鹽緩沖溶液、pH6 磷酸鹽緩沖溶液、pH7.12磷酸鹽緩沖溶液、pH8.05 磷酸鹽緩沖溶液各40mL，置于37±0.5℃的恒溫水浴中，130r/min 勻速震蕩。分別在2，6，10，24h 吸取上清液，用0.45μm 微孔濾膜過濾棄去初濾液，取續(xù)濾液做適當(dāng)稀釋后，按照紫外分光光度法進(jìn)行測(cè)定.每種介質(zhì)平行操作3 份，結(jié)果見下表2。

表2 不同介質(zhì)中曲札茋苷溶解度結(jié)果

取24h 所測(cè)得的濃度為平衡溶解度做出不同pH 的平衡溶解度曲線，如圖2。

圖2 曲札茋苷在不同pH 的平衡溶解度

由圖可以看出：隨著pH 的不斷增加，曲札茋苷的平衡溶解度亦呈增加的趨勢(shì)。

2.8 表觀油水分配系數(shù)的測(cè)定

精密稱取曲札茋苷原料藥適量溶解于水飽和的正辛醇中，配成質(zhì)量濃度約為15μg/mL 的溶液，精密量取該溶液20mL 置于具塞三角瓶中，再分別加入被正辛醇飽和的水、pH2.00 磷酸鹽緩沖溶液、pH3.01 磷酸鹽緩沖溶液、pH4.02 磷酸鹽緩沖溶液、pH5.01 磷酸鹽緩沖溶液、pH6.02 磷酸鹽緩沖溶液、pH7.00 磷酸鹽緩沖溶液、pH8.00 磷酸鹽緩沖溶液20mL，放入37℃恒溫水浴振蕩器中振搖24h，分別取上、下層液體按照紫外分光光度法在319nm 波長(zhǎng)處測(cè)定其各自的吸光度，根據(jù)公式Papp=Co/Cw 計(jì)算其油水分配系數(shù)。公式中Papp 為各介質(zhì)中的表觀油水分配系數(shù)、Co 為分配平衡時(shí)測(cè)得曲札茋苷在正辛醇中的濃度，Cw 為分配平衡時(shí)測(cè)得曲札茋苷在水相中的濃度。曲札茋苷在不同的pH 值緩沖液中的正辛醇/緩沖液表觀分配系數(shù)見表3。

表3 不同的pH 值緩沖液中的正辛醇/緩沖液表觀分配系數(shù)

圖3 曲札茋苷在不同pH 緩沖液中表觀油水分配系數(shù)

圖3 結(jié)果表明：在酸性、中性、偏堿性條件下，正辛醇/緩沖液分配系數(shù)受緩沖液的pH 值影響不大。

3 討論

①油水分配系數(shù)的測(cè)定方法有很多，如搖瓶法、HPLC 法和產(chǎn)生柱法，其中以搖瓶法最為簡(jiǎn)便。本研究采用紫外分光光光度測(cè)定曲札茋苷的濃度，并且用此種方法測(cè)得的線性、重復(fù)性和回收率均符合要求，表明該測(cè)定方法可行。

②人體的生理環(huán)境大致在pH3.0～8.0，參考中國(guó)藥典及相關(guān)專著中緩沖液的pH 范圍，設(shè)計(jì)并考察曲札茋苷在pH3.11，4.13，5.00，6.00，7.12，8.05 時(shí)的平衡溶解度和表觀油水分配系數(shù)。為了模擬生物體內(nèi)藥物在水相和生物相之間的分配情況，許多實(shí)驗(yàn)都曾用多種有機(jī)溶劑來模擬生物相，如氯仿、橄欖油和正辛醇等，目前認(rèn)為正辛醇更近似生物相，其主要原因是由于正辛醇的極性和溶解性比其他惰性溶劑好，其溶解度參數(shù)與生物膜的溶解度參數(shù)21.07 MPa1/2一致，可以選用正辛醇作為模擬生物膜相的有機(jī)溶劑，因此本研究采用正辛醇-水為模擬系統(tǒng)。

③曲札茋苷的水溶性較差，在水中的平衡溶解度僅為5.77mg/mL，油水分配系數(shù)P 為3.12（lgP=0.49），因此疏水性強(qiáng)，但這不是限制曲札茋苷口服吸收的重要原因（一般lgP 大于5 的藥物不易吸收）。藥物溶解度較小導(dǎo)致的溶出速度較慢，是導(dǎo)致藥物口服生物利用度低的主要原因之一。所以對(duì)曲札茋苷表觀油水分配系數(shù)及平衡溶解度的測(cè)定，不僅可為曲札茋苷新劑型的處方工藝提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，還為曲札茋苷的構(gòu)效關(guān)系、吸收代謝研究提供參考。

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