奶牛血漿與乳汁總抗氧化能力測定及相關(guān)性研究

方麗婷 李 俊 吳興龍

(廣西-東盟經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)(南寧華僑投資區(qū))動物衛(wèi)生監(jiān)督所,廣西南寧 530105)

奶牛血漿與乳汁總抗氧化能力測定及相關(guān)性研究

方麗婷 李 俊 吳興龍

(廣西-東盟經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)(南寧華僑投資區(qū))動物衛(wèi)生監(jiān)督所,廣西南寧 530105)

本研究從廣西某規(guī)模化奶牛場選取產(chǎn)后泌乳早期的荷斯坦奶牛42頭,清晨飼喂前采集血樣,隨后采集同頭奶牛的乳樣,檢測血漿和乳清中的TAC水平,同時對被檢奶牛進行酮病檢查,按照血酮大于6mg/dl分為酮病組,其余的為對照組。研究2組奶牛血漿和乳清中的TAC水平及其差異。發(fā)現(xiàn)荷斯坦奶牛泌乳早期血漿和乳清TAC水平在0.7～12.3 U/ml范圍內(nèi),平均值分別為5.17和5.63 U/ml。酮病奶牛血漿抗氧化能力顯著降低,但是乳清中抗氧化能力變化不明顯。

奶牛;血漿;乳汁;總抗氧化能力;相關(guān)性

1 材料與方法

1.1 試驗牛的選擇與分組

本試驗從廣西某規(guī)模化奶牛場選取產(chǎn)后的泌乳期荷斯坦奶牛42頭，清晨飼喂前采集血樣，隨后采集同頭奶牛的乳樣，檢測血漿和乳清中的TAC水平，同時對被檢奶牛進行酮病實驗室檢查，按照血酮定量檢測結(jié)果，將其大于6mg/dl分為酮病組，其余的為對照組。研究2組奶牛血漿和乳清中的TAC水平及其差異，研究全體被檢奶牛和2組奶牛血漿和乳清TAC水平之間的相關(guān)性。

1.2 采樣方法

（1）選取42頭健康的泌乳期荷斯坦奶牛，首先對其采集血樣和乳樣。

（2）對上述42頭奶牛，在實驗室檢查血漿酮體含量，將大于6mg/dl分為酮病組，其余的設(shè)為對照組。

1.3 血漿與乳汁的采集與處理

試驗?zāi)膛＞谇宄款i靜脈采血，肝素鈉抗凝，現(xiàn)場 3500rmp離心 10min分離血漿。同時收集被采血奶牛的乳汁，與血漿一并置于4度的冰盒中保存，快速送回實驗室。采回來的乳汁立即用低溫超速離心獲得乳清，4 ℃、12000rmp 離心 30min，取中層乳清繼續(xù)離心2～3次，充分脫脂，直到獲得透明清亮的液體。血漿及乳清一起置于-20 ℃冰箱內(nèi)冷凍保存并于48h內(nèi)完成測定分析。

1.4 主要試驗儀器及試劑

MS-500半自動生化分析儀，購于美生科技有限公司；

WFJ-2100型可見分光光度計，購于龍尼柯上海儀器有限公司；AL204型電子天平，購于上海梅特勒托利多儀器有限公司；HH-6型數(shù)顯恒溫水浴鍋，購于常州市國華電器有限公司；78-3型電熱鼓風(fēng)干燥箱，購于天津南郊區(qū)東泥沽實驗儀器設(shè)備廠；

DHG-9203A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，購于上海精宏實驗設(shè)備有限公司；

TDL-4型低速臺式離心機，購于上海安亭科學(xué)儀器廠；

SC082412型實驗室專用超純水機，購于廣西中德歐科儀器設(shè)備有限公司；

試管、燒杯、量筒、離心管、等（所用之玻璃及塑料器皿均先用清洗劑充分洗刷，清水沖洗干凈后，再用雙蒸水反復(fù)沖洗，置烘干箱內(nèi)烘干待用）。

這些儀器均由廣西大學(xué)臨床獸醫(yī)學(xué)實驗室提供。

1.5 樣本檢測項目和方法

用菲啉比色法測定血漿與乳汁中的總抗氧化能力（TAC）。試劑盒由南京建成生物工程研究所提供，血漿與乳汁總抗氧化能力測定，實驗步驟嚴格按照血漿總抗氧化能力試劑盒說明書進行。主要步驟詳見表1：

表1 血漿與乳汁總抗氧化能力測定方法

血漿中 TAC 單位定義及計算

定義：在37℃ 時，每分鐘每毫升血漿使反應(yīng)體系的吸光度（OD）值每增加0.01時，為一個總抗氧化能力單位。

公式：總抗氧化能力=＜ODu－ODc＞／0.01÷30×N×n

ODu ── 測定吸光光度值

ODc ── 對照吸光光度值

N ── 反應(yīng)體系稀釋倍數(shù)（反映液總體積/取樣量）

n ── 樣本測試前稀釋倍數(shù)。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理

用 SPSS 17. 0 和 Excel 軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，用t檢驗分析組間的差異顯著性，當(dāng)p＜0.05時表示差異顯著，p＜0.01時表示差異極顯著當(dāng)p＞0.05時表示差異不顯著，用pearson分析顯著相關(guān)性。分析數(shù)值用 Mean±SD 表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 TAC水平

對42頭荷斯坦奶牛血漿與乳清TAC水平檢測結(jié)果見表2，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗，42頭奶牛的血漿與乳清TAC水平之間差異不顯著，但乳清TAC水平略高于血漿TAC水平。

表2 42頭泌乳早期荷斯坦奶牛血漿與乳清TAC水平檢測結(jié)果（mg/dl）

通過酮體檢查，42頭被檢奶牛分成2組，21頭奶牛血酮水平大于6mg/dl，分為酮病組，其余21頭分為對照組。兩組奶牛的血漿與乳清TAC水平檢測結(jié)果見表3。

表3 酮病與健康奶牛血漿與乳汁TAC的平均含量

2.2 相關(guān)性分析

分析42頭被檢奶牛的血漿與乳清TAC水平之間的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)相關(guān)系數(shù)r=0.116，統(tǒng)計分析分析相關(guān)性不顯著（P＞0.05）。

分析酮病組與對照組，它們2組的相關(guān)系數(shù)分別為：0.233和0.123.均無顯著相關(guān)性。但酮病組的相關(guān)性略高。

3 討論

3.1 奶牛血漿與乳汁TAC的平均含量

如表2、表3中所示：42頭泌乳早期荷斯坦奶牛血漿與乳清TAC水平分別是5.17±2.82 U/ml、5.64±2.06 U/ml；荷斯坦奶牛泌乳早期血漿和乳清TAC水平在0.7～12.3 U/ml范圍內(nèi)，平均值分別為5.17和5.63 U/ml。酮病組奶牛血漿和乳清中的TAC水平是3.57±1.065U/ml和5.46±1.39 U/ml；對照組奶牛血漿與乳清的平均含量是7.19±2.90 U/ml、5.72±2.70U/ml；酮病組血漿TAC的含量極顯著低于健康組的含量（p＜0.001）。酮病奶牛血漿抗氧化能力顯著降低，但是乳清中抗氧化能力變化不明顯。于學(xué)軍等研究表明，荷斯坦奶牛中血漿TAC水平是6.60±1.98 U/ml。[1]Aitken等（2009）研究發(fā)現(xiàn)圍產(chǎn)期奶牛在氧化應(yīng)激狀態(tài)時乳腺組織中抗氧化功能參與重要的防御機制[2]，Hodgkinson等（2007）報道稱分泌初乳時期如果奶牛處于氧化應(yīng)激狀態(tài)時牛乳腺組織中VCAM．1的表達顯著升高，氧化應(yīng)激引起的急變期細胞因子的表達增加嚴重的炎癥反應(yīng)時的組織損傷[3]。

本試驗研究表明：酮病牛血漿TAC的平均含量顯著低于健康的奶牛血漿TAC的平均水平。說明奶牛患酮病，使機體發(fā)生能量負平衡，對機體的抗氧化功能產(chǎn)生損傷，同時血酮的產(chǎn)生升高也影響機體的抗氧化功能。總抗氧化能力是反映機體的防御水平和自由基的清除能力，奶牛患酮病使得機體抗氧化功能的降低，可能是影響奶牛血漿TAC的重要原因之一。

3.2 相關(guān)性分析

本研究分析，42頭荷斯坦奶牛的血漿與乳清TAC水平之間的相關(guān)系數(shù)r=0.116，統(tǒng)計分析分析相關(guān)性不顯著（p＞0.05）。其原因可能血漿與乳汁中TAC的形成存在時間差異，血漿中的TAC可能受采食飲水等的影響較快，而乳汁則較慢。

分析酮病組與對照組的相關(guān)系數(shù)分別為：0.233和0.123。均無顯著相關(guān)性，但酮病組的相關(guān)性略高。這可能是由于酮病影響了奶牛的全身代謝變化，是機體總抗氧化能力下降，血液TAC的下降影響到乳汁TAC水平，從而使其相關(guān)性升高。而對照組奶牛機體代謝相對穩(wěn)定，無明顯使全身TAC水平下降的因素存在，因此相關(guān)系數(shù)較低。

4 結(jié)論

42頭泌乳早期荷斯坦奶牛血漿與乳清TAC水平分別是5.17±2.82 U/ml、5.64±2.06 U/ml；其血漿和乳清TAC水平在0.7～12.3 U/ml范圍內(nèi)，平均值分別為5.17和5.63 U/ml。酮病組奶牛血漿和乳清中的TAC水平3.57±1.065U/ml和5.46±1.39 U/ ml；對照組奶牛血漿與乳清的平均含量是7.19±2.90 U/ml、5.72±2.70U/ml；酮病組血漿TAC的含量極顯著低于健康組的含量（p＜0.001）。酮病奶牛血漿抗氧化能力顯著降低，但是乳清中抗氧化能力變化不明顯。

[1] 于軍方，梁學(xué)武，張良榮，等.熱應(yīng)激對荷斯坦牛與荷-娟F1牛抗氧化能力的影響[J]. 福建畜牧獸醫(yī)，2007，（S1）：4-6.