一例雞傳染性喉氣管炎病毒的分離鑒定

錢麗梅

(張家港市大新鎮(zhèn)動(dòng)物防疫站,江蘇張家港 215600)

一例雞傳染性喉氣管炎病毒的分離鑒定

錢麗梅

(張家港市大新鎮(zhèn)動(dòng)物防疫站,江蘇張家港 215600)

本實(shí)驗(yàn)從張家港某養(yǎng)雞場(chǎng)采集臨床疑似傳染性候氣管炎的病雞喉頭氣管、肺臟等病料,接種雞胚絨毛尿囊膜進(jìn)行痘斑檢查和瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)。結(jié)合臨床、剖檢和實(shí)驗(yàn)所得的結(jié)果可確認(rèn)該病原為傳染性喉氣管炎病毒,并提出相應(yīng)防治措施。

雞傳染性喉氣管炎病毒;分離;鑒定

1 送檢病雞

2014年1月江蘇金壇某農(nóng)戶送至動(dòng)物醫(yī)院發(fā)病死亡雞，通過問診，可知雞場(chǎng)飼養(yǎng)近900只雞，死亡40只，有出現(xiàn)張口呼吸，發(fā)病率不高，每日均可見10～20只雞出現(xiàn)張口呼吸，咳嗽。

2 臨床癥狀和剖檢癥狀

發(fā)病雞主要表現(xiàn)為精神沉郁、食欲不振、伸頸張口呼吸、咳嗽，產(chǎn)蛋下降。剖檢雞只可見喉頭氣管黏膜腫脹、充血，氣管滲出多量黏液。根據(jù)流行病學(xué)特點(diǎn)、臨床癥狀和病理變化可初步診斷為雞傳染性喉氣管炎。采集病變組織通過實(shí)驗(yàn)室診斷方法進(jìn)一步確診病因[1]。

3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

3.1 病料的采集與處理

疑似病料來源于江蘇張家港某雞場(chǎng)，采集病禽的喉頭、氣管和肺臟等病變組織，并將樣品放入樣品袋中，并做好標(biāo)記，保存于-20℃冰箱中。實(shí)驗(yàn)前取出病料，在超凈臺(tái)中將采集的病料組織用剪刀剪碎、研磨，在剪碎的病料中按1：5加入含抗生素的PBS磨勻，移入數(shù)個(gè)指形管中，標(biāo)記。將指形管放入液氮罐中冷凍，數(shù)十分鐘后取出融化，反復(fù)凍融三次。將凍融過的指形管8000 r/min離心10 min，取上清液作為接種雞胚的病毒材料。

3.2 雞胚接種及痘斑檢查

取上述病毒材料經(jīng)絨毛尿囊膜接種10日齡SPF雞胚，每胚接種0.2ml，石蠟封口，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育。每天觀察雞胚兩次，連續(xù)檢查7d，棄去24h內(nèi)死亡的雞胚，5d內(nèi)死亡的雞胚，放4℃冷卻后，觀察雞胚絨毛尿囊膜上有無形成痘斑；7d后仍未死亡的雞胚，置于4℃冰箱冷卻，觀察雞胚絨毛尿囊膜上有無形成痘斑。

雞胚接種病料后120h觀察雞胚，雞胚出現(xiàn)死亡。剖檢死亡雞胚，絨毛尿囊膜上出現(xiàn)大小不等、數(shù)量不一的白色不透明樣斑塊，胚體表面充血，發(fā)育受阻。觀察結(jié)果如圖1所示：

3.3 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)

使用梅花形打孔器打孔，挑出孔內(nèi)瓊脂，在火焰上封底。用移液器進(jìn)行加樣，中心孔加滴陽(yáng)性血清，在周邊相鄰兩孔內(nèi)滴加待檢抗原及試驗(yàn)用抗原對(duì)照，加樣均以加滿不溢出為度。加樣后，靜置，將平皿置37℃溫箱中反應(yīng)，經(jīng)24～48 h觀察結(jié)果。

待檢抗原、對(duì)照用標(biāo)準(zhǔn)抗原與中心孔ILTV陽(yáng)性血清之間，均出現(xiàn)明顯的白色沉淀線。如圖2所示：

圖2 ILTV瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)1.ILTV陽(yáng)性血清 2.標(biāo)準(zhǔn)抗原 3.待檢抗原

4 小結(jié)與討論

本實(shí)驗(yàn)從江蘇張家港某養(yǎng)雞場(chǎng)采集臨床疑似ILT的病雞喉頭氣管、肺臟等病料，通過接種雞胚絨毛尿囊膜進(jìn)行痘斑檢查，結(jié)果表明該病毒在絨毛尿囊膜上可形成明顯痘斑；通過瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)表明待檢病毒與標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清之間可見明顯的沉淀線。臨床感染雞表現(xiàn)出呼吸困難、咳出含血滲出物等特征病變。經(jīng)痘斑檢查、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)及臨床癥狀初步確定病原為傳染性喉氣管炎病毒。

由于目前對(duì) ILT 尚無特效藥物治療，所以臨床上常用對(duì)癥綜合治療，以緩解癥狀，減少并發(fā)癥的發(fā)生。如投服清熱解毒、止咳鎮(zhèn)痛、消炎為主的中成藥以減少死亡。在飲水中添加紅霉素、強(qiáng)力霉素或氨茶堿等藥物防止繼發(fā)感染，促進(jìn)康復(fù)。用復(fù)合多維、加倍量飲水以及適當(dāng)增加飼料中的蛋白質(zhì)含量等增加機(jī)體抵抗力[2]。

[1] 卡爾尼克BW，高福等（譯）.禽病學(xué)（第9版）[M].北京：北京農(nóng)業(yè)出版社，1991：419- 426.

[2] 朱道中，辛朝安.傳染性喉氣管炎[J].養(yǎng)禽與禽病防治，1999，（3）：36-38.

圖1 經(jīng)CAM途徑接種雞胚后在CAM上形成的痘斑樣病變（箭頭指示）