細菌性草魚白頭白嘴病病原的分離與鑒定

羅永成

摘 要：從患病草魚的病灶及肝、脾、腎分離、純化，得到菌株BTBZ-1410，該菌株革蘭氏染色為陰性。經生化試驗檢測菌株BTBZ-1410為一種黏細菌（Myxococcus）。將培養的菌株BTBZ-14制成10×109菌落形成單位/毫升的菌懸液，并以0.2毫升/尾進行背部肌肉感染，感染草魚8小時后開始發病，其癥狀與草魚白頭白嘴病的臨床癥狀相符，生化試驗與菌株BTBZ-14一致。試驗結果表明草魚白頭白嘴病的病原為黏細菌（Myxococcus）。

關鍵詞：草魚；白頭白嘴??；病原分離鑒定

草魚是我國四大家魚之一，一直是我國淡水養殖的重要品種。然而，在養殖過程中，疾病卻成為草魚養殖中主要障礙之一。白頭白嘴病是危害夏花草魚的嚴重病害，發病范圍廣，傳播速度快，死亡率高，給我國淡水養殖業帶來巨大經濟損失。白頭白嘴病的特征，在水中能明顯看到“白頭白嘴”的癥狀，撈出水面癥狀不明顯。病魚口唇部至眼部皮膚潰爛，呈白色絮狀，病變造成口部運動障礙，阻礙正常呼吸，體表癥狀嚴重的病魚從頭頂部至眼周充血，表現為“紅頭白嘴”。目前，對白頭白嘴病病原分離鑒定的研究很少，本研究從病魚病灶處采取病料，并進行病原菌的分離與鑒定，旨在確定細菌性白頭白嘴病的病原，為該病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

病魚采自丹東東港某養殖場。普通瓊脂平板及鮮血培養基自制。培養基配制及生化試驗所用藥品均為分析純，購自北京康潤生物有限公司。

1.2 病原分離

將具有典型癥狀的病魚，用滅菌生理鹽水沖洗體表后，對體表及病灶用75%酒精消毒，用接種環取其病灶及肝、脾、腎劃線接種于普通瓊脂培養基上，挑選優勢菌落進行純化培養。

1.3 病原菌形態的觀察及細菌學檢查

將純化的細菌置于培養皿內25℃培養24小時，觀察其生長狀況、菌落形態及其溶血特性等，并采用革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察。

1.4 生化試驗

將培養的菌落分別接種到含有各種鑒定試劑的生化試驗微量鑒定管中，并進行相關生化試驗。試驗項目有明膠液化、葡萄糖、淀粉、酪氨酸脫羧酶、分解纖維素、還原硝酸鹽、吸收拘櫞酸鹽、吲哚試驗、硫化氫試驗、分解幾丁質、分解七葉靈、過氧化氫酶試驗、分解酪素、溶解死細菌。接種到上述各生化試驗微量鑒定管后，置于25℃培養2～3天觀察結果。

1.5 回感試驗

將分離到的草魚白頭白嘴病疑似菌株制成2×109菌落形成單位/毫升菌懸液；將制成的菌懸液及生理鹽水按0.2毫升/尾，注射到試驗組及對照組草魚背鰭下方的背部肌肉中。將試驗組草魚與對照組草魚隔離飼養，正常投喂飼料，連續觀察5天，對發病草魚情況進行記錄并對其進行解剖檢查、病原菌分離。

2 結果與分析

2.1 病原分離與純化

通過病原菌的分離與純化，得到菌株BZ-1410，在普通瓊脂培養基上培養發現菌落較小，呈圓形且表面光滑，呈半透明的露珠狀；在鮮血瓊脂培養基上培養發現菌落生長茂盛，呈乳白色、半透明、圓形，表面突起較明顯，周圍形成1毫米左右的溶血環。

2.2 生化試驗鑒定

菌株BZ-1410，革蘭氏染色陰性。生化試驗結果見表1，結果表明菌株BTBZ-1410為一種黏細菌（Myxococcus）。

2.3 回感試驗結果

將菌株BTBZ-1410接種試驗草魚，試驗組草魚在8小時后開始發病，病魚自吻端至眼球的一段皮膚潰爛，口張閉失靈而造成呼吸困難，表現白頭白嘴癥狀。病魚表現精神沉郁，反應遲鈍，離群獨游。隨著病程發展，病變逐漸加重，病魚不僅是眼、鰓、口腔、體表等部的表皮組織出現白色絮狀物，個別病魚的顱頂和眼部周邊表現充血、腫脹的現象而呈現“紅頭白嘴”癥狀，與臨床癥狀相符。分離病魚病原菌并進行生化試驗檢測，其結果與表1相符。

結果表明，黏細菌（Myxococcus）為草魚白頭白嘴病的病原菌。

3 討論

草魚白頭白嘴病是我國比較常見的疾病，該病對于夏花草魚影響非常嚴重，這主要是因為夏花草魚個體處在發育期間，免疫系統發育不完全，由于白頭白嘴病是通過表皮侵染的途徑對草魚進行感染，而這個時期的魚苗體表容易受傷，因此幼魚較易感病。目前，由于水產養殖業的發展，草魚飼養規模和養殖密度急劇擴大，一些養殖廠采取混養的飼養方法，養殖廠種魚的育苗相對集中且育種的規模較大，使現在的草魚白頭白嘴病常隨種魚和魚苗傳播，不易根除，且經常與其他病癥并發，導致病理特征不典型，對疾病的及時發現和鑒定造成了影響。

目前，對草魚白頭白嘴病的防治方法主要使用生石灰、漂白粉等消毒藥物對魚塘進行投放前消毒及飼養過程中的定期潑灑。中草藥雖然相對環保，減少藥殘，但其應用效果不及消毒藥顯著，實際養殖過程中就增加了草魚患病的風險。對疾病防治最理想的措施是通過疫苗預防，本文對草魚白頭白嘴病的病原進行了分離鑒定，在此基礎上如果能進一步研究，將白頭白嘴病的疫苗研究成功并應用于生產，該病將不再會是草魚養殖過程中的威脅。