無菌粉針模擬分裝驗(yàn)證方案的設(shè)計(jì)

白榮

廣東華潤順峰藥業(yè)有限公司，廣東佛山 528300

從嚴(yán)格意義上講，無菌粉針劑應(yīng)完全不含有任何活的微生物，但由于目前檢驗(yàn)手段的局限性，絕對(duì)無菌的概念不能適用于對(duì)整批產(chǎn)品的無菌性的評(píng)價(jià)。因此，目前評(píng)價(jià)整批產(chǎn)品質(zhì)量時(shí)所使用的‘無菌’概念，不是絕對(duì)無菌的概念，概率意義上的無菌保證，保證出現(xiàn)微生物污染的產(chǎn)品的概率存在于可以接受的極小概率之內(nèi)。這種概率意義上的無菌保證并非依賴于產(chǎn)品的最終檢驗(yàn)，而是取決于生產(chǎn)過程中嚴(yán)格的GMP管理和全面質(zhì)量保證體系；消除、殺滅微生物的滅菌過程和在嚴(yán)格控制的潔凈條件下的無菌生產(chǎn)過程。是否可以證明并保證產(chǎn)品的無菌性，則是藥品生產(chǎn)企業(yè)所關(guān)心的重要問題，也是粉針劑生產(chǎn)工藝驗(yàn)證的主要內(nèi)容。粉針劑生產(chǎn)驗(yàn)證所涉及的內(nèi)容很多，無菌粉針分裝工藝的驗(yàn)證是整個(gè)驗(yàn)證工作中難度較大的驗(yàn)證項(xiàng)目之一[1]。

我公司頭孢菌素粉針車間只有一條生產(chǎn)線，為了使模擬分裝試驗(yàn)結(jié)果與實(shí)際生產(chǎn)狀況更接近，最大限度利用此生產(chǎn)線的產(chǎn)能，我們將模擬分裝試驗(yàn)時(shí)間設(shè)定為16 h，設(shè)計(jì)驗(yàn)證所涉及因素如下。

1 驗(yàn)證基本信息

該次驗(yàn)證以無菌乳糖進(jìn)行模擬分裝過程；16 h之內(nèi)完成15000瓶的生產(chǎn)量；規(guī)格：每瓶0.5 g乳糖加4 mL培養(yǎng)基。

2 驗(yàn)證目的

（1）評(píng)估在既定無菌生產(chǎn)環(huán)境和過程控制條件下生產(chǎn)無菌產(chǎn)品的能力。

（2）證明指定的無菌工藝設(shè)計(jì)和變更是否可行。

（3）證明無菌工藝過程中的相關(guān)操作是否可行。

（4）評(píng)估無菌操作人員的操作水平。

（5）證明符合CMP的要求。

（6）發(fā)現(xiàn)無菌工藝過程中潛在的微生物污染因素。

3 驗(yàn)證前提

驗(yàn)證前需明確空調(diào)系統(tǒng)、設(shè)備確認(rèn)、干熱、濕熱滅菌驗(yàn)證等確認(rèn)完成之后再進(jìn)行工藝驗(yàn)證，以避免其他因素對(duì)工藝驗(yàn)證的干擾。

4 驗(yàn)證范圍

頭孢粉針無菌分裝生產(chǎn)工藝驗(yàn)證范圍主要從如下幾個(gè)方面進(jìn)行。

（1）生產(chǎn)工藝步驟（見表 1）。

（2）涉及的生產(chǎn)設(shè)備。全自動(dòng)洗瓶機(jī)、滅菌隧道、氣流無菌灌裝機(jī)、全自動(dòng)軋蓋機(jī)、全自動(dòng)膠塞清洗機(jī)、貼標(biāo)機(jī)、燈檢機(jī)、脈動(dòng)真空滅菌器、干熱滅菌柜。

（3）所涉及的所有介質(zhì)（如壓縮空氣、蒸汽等）。純蒸汽用于生產(chǎn)用具、無菌工作服濕熱滅菌。壓縮空氣用于膠塞清洗、西林瓶清洗、分裝設(shè)備定量器吹粉；因此驗(yàn)證內(nèi)容應(yīng)包括：①壓力露點(diǎn)（干濕度）；②殘余含塵量（塵埃粒徑和濃度）；③殘余含油量（單位體積壓縮空氣含油量）[2]。

（4）工藝風(fēng)險(xiǎn)分析及最差條件確認(rèn)。無菌分裝過程是無菌粉針生產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)最大的暴露工序。按《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》2010修訂版附錄一[3]“無菌制劑：第四十七條無菌生產(chǎn)工藝的驗(yàn)證應(yīng)當(dāng)包括培養(yǎng)基的模擬試驗(yàn)。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的劑型、培養(yǎng)基的選擇性、澄清度、濃度和滅菌的適用性來選擇培養(yǎng)基。應(yīng)盡可能模擬常規(guī)的無菌生產(chǎn)工藝，并包括所有對(duì)結(jié)果有影響的關(guān)鍵生產(chǎn)工序。此外，還應(yīng)考慮正常生產(chǎn)中已出現(xiàn)過的各種偏差及最差情況”的要求，在無菌生產(chǎn)過程中，將無菌分裝過程控制（分裝時(shí)間、分裝間進(jìn)入人數(shù)控制、分裝速度）、干擾活動(dòng)等產(chǎn)品直接暴露區(qū)域和有可能直接影響產(chǎn)品最終檢測結(jié)果的幾個(gè)點(diǎn)設(shè)定為最高風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)。在驗(yàn)證過程中的工藝條件選擇也應(yīng)選擇合理的“最差條件”，用最差條件來對(duì)整個(gè)工藝流程、設(shè)備和整個(gè)體系進(jìn)行挑戰(zhàn)，證明無菌保證的可靠性。

表1 工藝步驟及崗位描述

最差生產(chǎn)條件確認(rèn)首先應(yīng)考慮：

①無菌分裝時(shí)間：模擬正常批量生產(chǎn)所需要最長生產(chǎn)時(shí)間；按最大批量生產(chǎn)時(shí)間來計(jì)，每批生產(chǎn)時(shí)間應(yīng)不超過16 h（實(shí)際生產(chǎn)的分裝時(shí)間包括了模擬無菌分裝過程的故障處理時(shí)間，停頓及等待時(shí)間）。

②分裝速度及批量的確定：模擬分裝的批產(chǎn)量應(yīng)足夠大，總分裝量基于具體工藝的污染風(fēng)險(xiǎn)足以保證評(píng)價(jià)無菌工藝過程的有效；因此設(shè)計(jì)驗(yàn)證批產(chǎn)量為15 000瓶，設(shè)定總分裝時(shí)間為16小時(shí)；同時(shí)設(shè)定設(shè)備分裝速度為50瓶/min（設(shè)備正常分裝速度220瓶/min）；其目的是增加分裝過程中培養(yǎng)基的暴露時(shí)間，通過延長分裝時(shí)間和降低分裝速度，模擬生產(chǎn)全過程并根據(jù)結(jié)果進(jìn)行全面評(píng)估。

③無菌分裝間進(jìn)入人數(shù)的確定：應(yīng)根據(jù)分裝間面積、空調(diào)換氣次數(shù)確認(rèn)操作間所能允許進(jìn)入的最大限員數(shù)量。

④人為干預(yù)：干預(yù)包括正常的日常干擾和非正常干擾。主要需考慮以下幾個(gè)方面的因素：在生產(chǎn)前的準(zhǔn)備階段應(yīng)考慮人員進(jìn)入B級(jí)區(qū)、用具滅菌后和膠塞清洗后的轉(zhuǎn)運(yùn)行為；分裝開始時(shí)應(yīng)考慮：生產(chǎn)前環(huán)境監(jiān)測人員的操作行為、分裝配件組裝、補(bǔ)充膠塞、裝量調(diào)試、環(huán)境監(jiān)測、維修動(dòng)作、處理各種設(shè)備故障、打開隔離門處理倒瓶、爆瓶等行為的干擾。

（5）驗(yàn)證組織及職責(zé)。應(yīng)明確驗(yàn)證小組各成員的職責(zé)；一般由生產(chǎn)部門負(fù)責(zé)組織驗(yàn)證、起草驗(yàn)證方案、完成驗(yàn)證方案的培訓(xùn)并負(fù)責(zé)完成驗(yàn)證報(bào)告；質(zhì)量管理部門（QC）主要負(fù)責(zé)方案中檢驗(yàn)部分的起草及相關(guān)工作。質(zhì)量管理部門（QA）主要負(fù)責(zé)組織QA對(duì)現(xiàn)場環(huán)境監(jiān)測及控制。GMP辦公室主要是驗(yàn)證工作的協(xié)調(diào)和對(duì)驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行審核及資料的歸檔。驗(yàn)證方案由生產(chǎn)負(fù)責(zé)人進(jìn)行最后審核。質(zhì)量授權(quán)人負(fù)責(zé)報(bào)告的批準(zhǔn)。

（6）驗(yàn)證方法。采用滅菌乳糖作為模擬分裝的無菌粉末，模擬無菌原料藥粉分裝過程進(jìn)行生產(chǎn)。分裝裝量為0.5 g/瓶，然后用蠕動(dòng)泵每瓶加入約4 mL的無菌培養(yǎng)基。

（7）驗(yàn)證中偏差處理和變更控制。驗(yàn)證過程中如出現(xiàn)偏差和變更，應(yīng)對(duì)偏差和變更進(jìn)行詳細(xì)記錄，分析偏差產(chǎn)生的根本原因、進(jìn)行分析并提出解決方法。產(chǎn)生的偏差和變更得到有效處理后，將原始的偏差處理單和變更處理單附在驗(yàn)證報(bào)告中。

（8）結(jié)果記錄與評(píng)估的方法。驗(yàn)證記錄包括工藝參數(shù)和相關(guān)的監(jiān)測與檢驗(yàn)記錄，記錄的填寫應(yīng)符合相關(guān)的文件要求。驗(yàn)證所有涉及的記錄全部歸入驗(yàn)證文件一起統(tǒng)一保存。驗(yàn)證小組組長將結(jié)果進(jìn)行匯總、分析，評(píng)估驗(yàn)證結(jié)果，寫明對(duì)此次驗(yàn)證的明確的結(jié)論，完成驗(yàn)證報(bào)告。

5 工藝操作要求

（1）按照培養(yǎng)基配制要求配制胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基，完成配制后將培養(yǎng)基121℃，連續(xù)30 min進(jìn)行濕熱滅菌。

（2）操作人員按照實(shí)際生產(chǎn)操作要求，清洗和滅菌西林瓶、膠塞；模擬最差生產(chǎn)條件，以50瓶/min的生產(chǎn)速度的分裝速度進(jìn)行分裝，分裝裝量為乳糖0.5 g/瓶，后用蠕動(dòng)泵加入約4 mL的無菌培養(yǎng)基。灌裝后蓋塞軋蓋、目檢。分裝過程中應(yīng)完成培養(yǎng)基模擬分裝試驗(yàn)陰性對(duì)照品的取樣。

（3）灌裝用無菌乳糖無菌確認(rèn)：灌裝結(jié)束前，用已滅菌的容器，從每桶無菌乳糖粉桶內(nèi)取無菌乳糖各取100 g，做清晰標(biāo)識(shí)標(biāo)示后送化驗(yàn)室進(jìn)行無菌檢查。

（4）干擾設(shè)置：在生產(chǎn)過程中需進(jìn)行以下項(xiàng)目干擾動(dòng)作的設(shè)計(jì)，干擾次數(shù)應(yīng)大于正常生產(chǎn)次數(shù)，且每名操作人員至少執(zhí)行1次以上的干擾動(dòng)作。干擾項(xiàng)目設(shè)置：批量、分裝時(shí)間、分裝速度、無菌服有效期、模具、工器具有效期、滅菌膠塞有效期、分裝間最大生產(chǎn)人員數(shù)量控制（同時(shí)）、非崗位操作人員進(jìn)入、膠塞及用具滅菌后的無菌轉(zhuǎn)運(yùn)、人員進(jìn)入B級(jí)區(qū)、生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)測（浮游菌、沉降菌）、分裝配件組裝、裝量測試、維修人員故障排除、分裝過程的停頓、打開設(shè)備隔離門處理膠塞、瓶的堵塞和卡瓶、爆瓶、補(bǔ)充膠塞和瓶。

6 模擬分裝監(jiān)測及控制

6.1 人員的監(jiān)測及控制

（1）限制進(jìn)入模擬分裝現(xiàn)場的人員，每班只允許不超過分裝間驗(yàn)證的人數(shù)在模擬分裝現(xiàn)場，每班次安排1人次進(jìn)行非崗位操作人員進(jìn)入干擾。

（2）為了減少由操作者在分裝過程中引起的無菌區(qū)污染，在模擬分裝試驗(yàn)時(shí)對(duì)操作者的無菌服、手套、眼罩等部位的微生物數(shù)量進(jìn)行監(jiān)測。所有進(jìn)入無菌區(qū)域的人員，在最后一次離開無菌區(qū)時(shí)，需對(duì)操作人員進(jìn)行頭部、眼罩、左手、右手、前胸五個(gè)部位的微生物取樣。

6.2 壓縮空氣的監(jiān)測

為避免直接接觸藥粉壓縮空氣潔凈度的干擾，分裝驗(yàn)證前須對(duì)潔凈壓縮空氣進(jìn)行：①壓力露點(diǎn)（干濕度）；②殘余含塵量（塵埃粒徑和濃度）；③殘余含油量（單位體積壓縮空氣含油量）[2]3項(xiàng)內(nèi)容的檢測，檢測結(jié)果必須符合要求。

6.3 潔凈區(qū)域的環(huán)境監(jiān)測

（1）塵埃粒子的監(jiān)控：從分裝配件組裝階段開始至分裝結(jié)束，對(duì)關(guān)鍵控制點(diǎn)（分裝、蓋塞）進(jìn)行全過程的塵埃粒子的在線監(jiān)控；監(jiān)測點(diǎn)應(yīng)包括：空瓶轉(zhuǎn)盤區(qū)、分裝區(qū)、蓋膠塞區(qū)、膠塞容器裝置區(qū)。

（2）沉降菌的監(jiān)控：從分裝配件組裝階段開始至分裝結(jié)束，對(duì)關(guān)鍵控制點(diǎn)（分裝、蓋塞、層流轉(zhuǎn)運(yùn)車）進(jìn)行全過程的沉降菌的連續(xù)監(jiān)測。每個(gè)監(jiān)測點(diǎn)1 h更換1次培養(yǎng)皿，至分裝完成。

（3）浮游菌的監(jiān)控：分裝完成后對(duì)分裝機(jī)內(nèi)進(jìn)行浮游菌的監(jiān)測。

（4）設(shè)備表面微生物的監(jiān)控：模擬分裝結(jié)束后，對(duì)分裝機(jī)設(shè)備表面的關(guān)鍵部位進(jìn)行表面微生物取樣。

（5）壓差的監(jiān)控：從分裝配件組裝階段開始至分裝結(jié)束，每1 h記錄一次滅菌隧道、分裝機(jī)上壓差表讀數(shù)以及分裝間相對(duì)其他區(qū)域的壓差表讀數(shù)。

（6）溫濕度的監(jiān)控：模擬分裝前及結(jié)束后，分別記錄主要工作區(qū)域內(nèi)溫濕度。

7 微生物培養(yǎng)

評(píng)價(jià)無菌模擬分裝試驗(yàn)結(jié)果的主要指標(biāo)之一就是微生物污染水平，發(fā)達(dá)國家GMP一般明確要求控制生產(chǎn)各步的微生物污染水平，尤其對(duì)無菌制劑，產(chǎn)品最終滅菌或除菌過濾前的微生物水平必須嚴(yán)格控制。而微生物的特點(diǎn)是在一定的環(huán)境條件下會(huì)迅速繁殖，數(shù)量急劇增加，而且空氣中存在的微生物能通過各種途徑污染已清潔的設(shè)備。因此，為防止污染或降低污染發(fā)生的概率，在無菌室設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)該注意提供方便有效的無菌室消毒條件，而且每個(gè)無菌粉針劑生產(chǎn)企業(yè)均應(yīng)指定其無菌模擬分裝驗(yàn)證制度，以保證無菌粉針劑分裝工藝過程符合無菌粉針劑分裝要求[4]。微生物是無菌粉針分裝過程中影響粉針劑質(zhì)量的因素之一，微生物培養(yǎng)項(xiàng)目應(yīng)包括陰性對(duì)照試驗(yàn)、陽性對(duì)照試驗(yàn)、試驗(yàn)樣品培養(yǎng)和微生物浸入試驗(yàn)；在微生物侵入試驗(yàn)（容器密封性試驗(yàn)）中又包括：試驗(yàn)樣品的制備、確認(rèn)培養(yǎng)基促菌生產(chǎn)能力的營養(yǎng)試驗(yàn)、挑戰(zhàn)菌懸浮液的制備。最后進(jìn)行微生物侵入試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：所有的營養(yǎng)試驗(yàn)都合格，陽性對(duì)照試驗(yàn)合格，說明微生物侵入試驗(yàn)成功，容器密封性能良好。若試驗(yàn)組中有長菌，需記錄長菌的試樣數(shù)；檢查確認(rèn)是否為容器封口的缺損造成微生物侵入。采用拍照或及其他適當(dāng)方式詳細(xì)記錄將此原因剔除。如果任何挑戰(zhàn)試驗(yàn)中長菌的容器不是由于容器封口明顯的物理性缺損所致，容器密封系統(tǒng)挑戰(zhàn)試驗(yàn)失敗。

8 無菌生產(chǎn)驗(yàn)證結(jié)果分析及評(píng)價(jià)

根據(jù)《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（2010年修訂）無菌附錄第四十七條的規(guī)定，培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)的目標(biāo)是零污染，應(yīng)遵循以下要求。

（1）灌裝數(shù)量超過10000支時(shí)：①有1支污染，需調(diào)查；②有2支污染，需調(diào)查后，進(jìn)行再驗(yàn)證。

（2）發(fā)生任何微生物污染時(shí)，均應(yīng)當(dāng)進(jìn)行調(diào)查[5]。

9 再驗(yàn)證周期

（1）每半年進(jìn)行1次，每次至少1批。無菌區(qū)工作人員至少每年參與1次培養(yǎng)基模擬分裝驗(yàn)證。

（2）空氣凈化系統(tǒng)、設(shè)備、生產(chǎn)工藝出現(xiàn)重大變更后，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行再驗(yàn)證。

（3）當(dāng)參與生產(chǎn)的主要操作人員出現(xiàn)變更后，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行再驗(yàn)證。

（4）無菌實(shí)驗(yàn)失敗，調(diào)查結(jié)論需要進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)。

（5）環(huán)境監(jiān)測結(jié)果明顯異常，調(diào)查結(jié)論需要進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)。

[1]石景曼，呂環(huán)哲，王民如.無菌粉針工藝驗(yàn)證—培養(yǎng)基模擬灌裝[J].中國藥師，2011，14（6）：902-903.

[2]李歆.制藥企業(yè)設(shè)施設(shè)備GMP驗(yàn)證方法與實(shí)務(wù)[M].中國醫(yī)藥科技出版社，2012.

[3]《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）》無菌藥品等5個(gè)附錄的公告無菌制劑附錄一[Z].

[4]陳娥，吳育利.粉針無菌分裝過程中影響粉針劑質(zhì)量的因素[J].海南醫(yī)學(xué),2012，23（18）：86-89.

[5]《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）》無菌藥品等5個(gè)附錄的公告無菌制劑附錄一[Z].