蕎麥茶中黃酮含量測定的三種比色法比較

李光等

摘要：對國內外3種常用的比色法測定蕎麥茶中總黃酮含量進行了比較，結果表明，NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法是蕎麥茶總黃酮含量測定的最適方法，該方法穩定性好，操作簡便。

關鍵詞：蕎麥茶；黃酮；比色法測定方法

中圖分類號：Q946.3 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）15-3744-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.15.042

Abstract：In order to study measuring method of flavonoids in buckwheat tea， three of the most popular colorimetric methods are compared in this study. The results showed that the NaNO2-AlCl3-NaOH colorimetric method is the optimum method to measure flavonoids content of buckwheat tea. And this method was convenient， accurate， and reproducible.

Key words： buckwheat tea； flavonoids content； measuring method

黃酮類化合物是一類重要的天然有機化合物，是植物在長期自然選擇過程中產生的一類次生代謝產物。它能清除生物體內的自由基，具有抗氧化作用[1]。近年來，隨著人類對健康的關注度越來越高，以蕎麥為主要原料的保健品的開發速度也越來越快，蕎麥茶、蕎麥饅頭、蕎麥餅干等[2]逐步出現在市場，其中由于蕎麥茶具有味道鮮美、儲存方便等優點，深受人們的喜愛。

黃酮類化合物在植物界中分布廣泛，它們常以游離態或與糖結合成苷的形式存在。目前已發現有6 000多種不同的黃酮類化合物[3]，因此對植物中的黃酮含量進行精確測量難度很大。但是黃酮類化合物具有鄰二酚羥基或3，5位羥基結構，可與鋁鹽、鉛鹽、鎂鹽等金屬鹽類試劑反應，生成有色絡合物，可用可見分光光度法測定其含量。目前黃酮測定的分光光度法主要有NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色法、AlCl3-KAc顯色法和NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法3種，本研究用這3種常用的比色法測定蕎麥茶總黃酮含量，以期確定最適于蕎麥茶中總黃酮含量測定的方法，為蕎麥的合理開發利用提供理論基礎和科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

蕎麥茶購自西昌市正中食品有限公司；蘆丁標準品購自貴州迪大生物有限公司（純度≥98.5%）；其他試劑為分析純。

DHG-90A（101AB）型干燥箱（上海索譜儀器有限公司）；UV-5300紫外可見分光光度計（上海元析公司）；AR1140型電子天平（奧豪斯儀器上海有限公司）；WB-400型小型高速粉碎機（北京維博創機械設備有限公司）；TDL-5C型低速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；AKJY-20超純凈水機（艾柯儀器公司）；KQ-250DE型數控超聲波清洗機（昆山超聲儀器有限公司）；PHS-3C型酸度計（上海虹儀儀器有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 3種測定方法的波長掃描 ①AlCl3-KAc顯色法。AlCl3-KAc顯色法參考文獻[4]，并稍作改動。準確吸取提取液1 mL，依次加入0.1 mol/L AlCl3 2 mL、1 mol/L KAc 3 mL，最終用甲醇溶液定容至10 mL，搖勻，室溫下放置30 min。在4 000 r/min下離心10 min，在200～1 000 nm內進行掃描，根據最大吸收峰確定測定波長。②NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色法。NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色法參照文獻[5]，并稍作改動。準確吸取提取液1 mL，依次加入2 mL去離子水、0.5 mL 5%NaNO2溶液混合，振蕩后放置6 min，加入0.5 mL 10% Al（NO3）3溶液，振蕩后放置6 min，然后加入2.5 mL 5% NaOH溶液，振蕩后放置15 min，最后用去離子水定容至9 mL，在200～1 000 nm內進行掃描，根據最大吸收峰確定測定波長。③NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法。NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法參照文獻[6]，并稍作改動。準確吸取提取液1 mL，依次加入3 mL去離子水、0.3 mL 5% NaNO2溶液混合，振蕩后放置5 min，加入0.3 mL 10% AlCl3溶液，振蕩后放置6 min，然后加入2.5 mL 1 mol/L NaOH溶液，振蕩后用去離子水定容至10 mL，在200～1 000 nm內進行掃描，根據最大吸收峰確定測定波長。

1.2.2 3種測定方法的穩定性比較 樣品和對照品依次使用AlCl3-KAc顯色法、NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色法、NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法加入試劑，進行600 s的連續吸光度測定，試劑添加完畢后，進行600 s的連續吸光度測定，測定間隔設定為0.5 s。對照品不添加顯色劑，其他試劑與樣品測定時添加的相同，將樣品在600 s的吸光度減去對照相應的值，繪制3種測定方法在600 s內吸光度變化曲線，并運用SPSS 17.0對3種方法獲得的吸光度進行統計分析，對比3種方法的優劣。

2 結果與分析

2.1 3種測定方法的波長掃描結果

通過對3種測定方法進行的波長掃描（圖1-圖3），AlCl3-KAc顯色法、NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色法、NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法最大吸收峰對應的波長分別為419、509、507 nm。endprint

2.2 3種測定方法的穩定性比較

由圖4-圖6知，3種方法使用的對照品在600 s內均較穩定，獲得的吸光度變化較小，表明不添加顯色劑，其他試劑照常加入的對照方法是可靠的。將3種方法樣品吸光度減去相應對照的吸光度獲得最終的測量值，由圖7可知，NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法在600 s內吸光度的標準誤差、標準差、方差等指標上均優于其他兩種方法（表1），可見、蕎麥茶總黃酮含量測定最適方法為NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法。

3 小結與討論

用3種常用的黃酮測量分光光度法測定蕎麥茶中總黃酮，并進行了3種方法的比較，結果表明，NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法是蕎麥茶總黃酮含量測量的最適方法，與此前報道[7]的AlCl3-KAC顯色法是金蕎麥葉總黃酮含量測定的最適方法差異較大，這可能的原因是兩個研究用到的材料分別為苦蕎麥和金蕎麥，這兩個材料所含的黃酮類化合物種類不同，同時蕎麥茶在加工過程中有部分黃酮類化合物分解或者轉化，而剩下的蕎麥茶黃酮類化合物比較適應NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法的測量環境所致，至于蕎麥在加工成蕎麥茶后，蕎麥茶的黃酮類化合物類型的確定，需要進一步的分離提純鑒定。

參考文獻：

[1] 延 璽，劉會青，鄒永青，等.黃酮類化合物生理活性及合成研究進展[J].有機化學，2008，28（9）：1534-1544.

[2] 劉光德，李名揚，祝欽瀧，等.資源植物野生金蕎麥的研究進展[J].中國農學通報，2006，22（10）：380-389.

[3] 董娟娥，張康健，梁宗鎖.植物次生代謝與調控[M].陜西楊凌：西北農林科技大學出版社，2009.

[4] NY/T 1295-2007，蕎麥及其制品中總黃酮含量的測定[S].

[5] 楊 磊，賈 佳，祖元剛.山楂屬果實提取物的體外抗氧化活性[J].中國食品學報，2009，9（4）：28-32.

[6] JIA Z S，TANG M C，WU J M. The determination of flavonoid contents in mulberry and their scavenging effects on superoxide radicals[J].Food Chemistry，1999，64：555-559.

[7] LI G，YU S，ZHOU Y H， et al. Spectrophotometric determination of flavonoids content in leaves of fagopyrum cymosum complex[J]. Asian Journal of Chemistry，2013，25（13）：7575-7578.endprint