胃癌組織中miR-451與MIF的表達及與臨床病理的關系

馬 寧 周 云 (河南省人民醫院 鄭州大學人民醫院腫瘤內科，河南 鄭州 450003)

隨著腫瘤醫學的進步，microRNA(miRNA)與惡性腫瘤的關系成為臨床研究的一大熱點。研究證實，miR-451與惡性腫瘤的發生、發展存在相關性〔1〕。巨噬細胞游走抑制因子(MIF)在惡性腫瘤的發病及發展過程中發揮著重要的作用，能夠促進腫瘤細胞增殖、分化、浸潤、轉移及抑制腫瘤細胞凋亡〔2〕。本文旨在探討胃癌組織中miR-451與MIF的表達及與臨床病理的相關性，為臨床治療胃癌提供有效的依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2013年3月至2014年3月于我院接受治療的30例胃癌患者，其中男17例，女13例;年齡44～76〔平均(61.3±5.5)〕歲。所有患者在手術前未進行化放療等相關抗腫瘤治療。均通過腫瘤組織病理標本蘇木素-伊紅(HE)染色檢查確診為腺癌，腫瘤旁組織病理標本位置距離腫瘤邊緣＞5 cm，經HE染色價差確診非癌組織。

1.2 方法 相關試劑:RNA提取采用TRIzol試劑盒，miR-451檢測采用Super-ScriptⅢ First-Strand Synthesis System試劑盒，均由美國Invitrogen公司提供;PCR檢測采用2×PCR Master Mix試劑盒，MIF檢測采用Revert Aid First Strand cDNA Synthesis Kit試劑盒，均由上海生物工程有限公司提供。操作過程嚴格按照試劑盒說明書操作。

檢測過程〔3，4〕:取75 mg組織液經氮氣凝固并將其研磨成為固體粉末，提取RNA，并對260 nm吸光值進行檢測并記錄。若計算RNA在280 nm與260 nm處的吸光度比值范圍保持在1.8～2.1之間，則表示RNA是高純度，并進一步檢測RNA的完整性，檢測完成后將RNA放置于-70℃的環境內進行保存。RNA分別與miRNA及MIF進行合成，成為cDNA第一鏈，放置于-20℃的環境內保存。將cDNA分別進行PCR檢測，miR-451將U6作為內參，MIF將β-actin作為內參。miR-451與MIF mRNA的相對表達量采用2-ΔΔCt方法表示。

1.3 統計學方法 應用SPSS17.0軟件進行分析，各組指標以±s表示，行t檢驗，計數資料采用 χ2檢驗，相關性采用Pearson、one-way ANOVA 分析法。

2 結果

2.1 腫瘤組織與腫瘤旁組織中miR-451以及MIF的相對表達量比較 腫瘤組織中的miR-451相對表達為(0.287±0.143)，顯著低于腫瘤旁組織(0.520±0.257)(t=-4.021，P=0.021);腫瘤組織中的 MIF 相對表達為(1.542±0.023)，顯著高于腫瘤旁組織(0.631±0.027)(t=-23.183，P=0.010)。

2.2 miR-451與MIF在腫瘤組織與腫瘤旁組織中的相關性分析 腫瘤組織中的miR-451相對表達為(0.287±0.143)，MIF相對表達為(1.542±0.023)，miR-451與 MIF的表達呈負相關性(t=-0.721，P ＜0.05)。

2.3 腫瘤組織中miR-451及MIF與臨床病理的相關性分析 腫瘤組織中miR-451及MIF與胃癌的組織類型(高、中、低分化)、TNM 分期(Ⅰ +Ⅱ、Ⅲ +Ⅳ)、浸潤深度(T1+T2、T3+T4)及淋巴結轉移(有、無)相關(P＜0.05)。見表1。

表1 腫瘤組織中miR-451、MIF與臨床病理的關系分析(n，±s)

表1 腫瘤組織中miR-451、MIF與臨床病理的關系分析(n，±s)

項目類型 n miR-451 F/P值 MIF F/P值性別男 170.315±0.1720.673/0.4121.602±0.1710.941/0.350女 130.296±0.0931.594±0.121年齡(歲)≥60180.315±0.1720.457/0.4811.572±0.1740.289/0.541＜60120.275±0.0911.642±1.002 Bormann分型Ⅰ型 00 0.075/0.7530 0.0236/0.657Ⅱ型 140.290±0.1481.543±0.174Ⅲ型 160.284±0.1351.624±0.087Ⅳ型 00組織類型高分化 00 9.876/0.0120 29.801/0.001中分化 200.321±0.1311.520±0.124低分化 100.160±0.0471.670±0.060 TNM分期Ⅰ + Ⅱ 170.360±0.14513.731/0.0151.382±0.11228.537/0.002Ⅲ + Ⅳ 80.170±0.0491.721±0.071浸潤深度T1+T2170.354±0.13714.024/0.0111.652±0.16729.084/0.001 T3+T48 0.157±0.0471.650±0.073淋巴結轉移有 110.157±0.04214.453/0.0061.490±0.11228.463/0.001無 190.135±0.1381.648±0.057遠處轉移有 60.156±0.0584.570/0.0611.602±0.0703.983/0.081無240.303±0.1381.593±0.038

3 討論

miRNA來源于內源性表達轉錄本，研究顯示，miRNA在人體內參與了機體細胞的增殖、分化及凋亡，同時在細胞的基因調控、免疫應答以及腫瘤的發病、發展以及預后中起著關鍵的作用〔5〕。miR-451屬于多功能 miRNA類型。研究證實，miR-451與多種疾病密切相關，比如血液性疾病、心腦血管系統疾病、神經系統疾病及腫瘤相關疾病等〔6〕。臨床關于miR-451與胃腸相關的消化系統疾病之間的相關性研究相對較少。研究〔7〕顯示miR-451在胃癌及大腸癌組織中的相對表達均明顯下降，而且miR-451與細胞增殖、凋亡、細胞對放化療的敏感程度以及疾病發展預后存在著相關性。

RT-PCR技術是可對核酸分子進行有效精確的定量，可檢測胃癌中miR-451及MIF的表達。本研究證實了采用RT-PCR技術可檢測miR-451在胃癌組織中的表達，且呈現出明顯低表達，由此推測其可能負向調控了腫瘤的發生及發展。同時研究提示MIF在胃癌組織中呈現高表達。臨床研究推測miR-451可能通過有效抑制致腫瘤基因MIF進一步調節細胞的增殖、凋亡等，因此，MIF 可作為 miR-451 的有效作用靶點〔8，9〕。

綜上所述，胃癌組織中miR-451與MIF的表達與胃癌的組織類型、TNM分期、浸潤深度及有無淋巴結轉移相關，miR-451可以抑制MIF表達，從而調控胃癌在人體內的發生及發展。

1 黃勝藍，鄭長黎.與胃癌發生相關MicroRNA的研究新進展〔J〕.現代生物醫學進展，2012;12(24):4777-9.

2 王 樂.在膠質瘤細胞系中利用蛋白組學技術探究miR-45新的直接作用靶點的實驗研究〔D〕.天津醫科大學碩士論文，2013;6(3):39-40.

3 Tian Y，Nan Y，Han L，et al.MicroRNA miR-451 downregulates the PI3K/AKT pathway through CAB39 in human glioma〔J〕.Int J Oncol，2012;40(4):1105-12.

4 Bergamaschi A，Katzenellenbogen BS.Tamoxifen downregulation of miR-451 increases 14-3-3zeta and promotes breast cancer cell survival and endocrine resistance〔J〕.Oncogene，2012;31(1):39-47.

5 Li X，Sanda T ，Look AT，et al.Repression of tumor suppressor miR-451 is essential for NOTCH1-induced oncogenesis in T-ALL〔J〕.J Exp Med，2011;208(4):663-75.

6 Frampton AE，Gall TM，Castellano L，et al.Towards a clinical use of miRNAs in pancreatic cancer biopsies〔J〕.Expert Rev Mol Diagn，2013;13(1):31-4.

7 Wang R，Wang ZX，Yang JS，et al.MicroRNA-451 functions as a tumor suppressor in human non-small cell lung cancer by targeting ras-related protein 14(RAB14)〔J〕.Oncogene，2011;30(23):2644-58.

8 Zhang Z，Luo X，Ding S，et al.MicroRNA-451 regulates p38 MAPK signaling by targeting of Ywhaz and suppresses the mesangial hypertrophy in early diabetic nephropathy〔J〕.FEBS Lett，2012;586(1):20-6.

9 Bitarte N，Bandres E，Boni V，et al.MicroRNA-451 is involved in the self-renewal，tumorigenicity，and chemoresistance of colorectal cancer stem cells〔J〕.Stem Cells，2011;29(11):1661-71.