高效液相色譜法檢測(cè)大腦神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺

張慶云 高永光 蔡美娜 于麗偉 梁國(guó)欣 趙冠楠

摘要：多巴胺是人腦中一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)，帕金森病等神經(jīng)系統(tǒng)病變與其含量異常有密切的關(guān)系。目前常用的多巴胺檢測(cè)方法有光譜法、高效液相色譜法、化學(xué)修飾電極法、傳感器法、毛細(xì)管電泳法，本文就高效液相色譜法做一綜述。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；多巴胺；檢測(cè)

中圖分類號(hào)：R742.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-3315（2015）07-188-001

多巴胺（dopamine， DA）是一類兒茶酚胺類物質(zhì)（CAs），它存在于神經(jīng)組織及體液中，是下丘腦和腦垂體腺中的一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)，腦垂體內(nèi)分泌功能的協(xié)調(diào)與多巴胺在腦內(nèi)特定區(qū)域的分布及含量有密切關(guān)系，導(dǎo)致神經(jīng)功能紊亂，是帕金森病（Parkinsons disease）發(fā)病的一個(gè)重要影響因素。另外，多巴胺還能夠引起心臟興奮，使血流量增加，以用于感染性休克和心源性休克。所以，進(jìn)行多巴胺檢測(cè)的研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義[1]。本文就多巴胺的高效液相色譜法檢測(cè)作一綜述。

高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）[2，3]也是通用的DA的檢測(cè)方法。近年來，由于高效液相色譜技術(shù)的不斷發(fā)展，用HPLC法分離測(cè)定體液和組織中CAs的方法日趨完善，檢測(cè)靈敏度可達(dá)pmol水平。高效液相色譜法具有高分離率，所以在CAs的分析中受到極大重視，HPLC法同電化學(xué)檢測(cè)和熒光檢測(cè)相結(jié)合是目前最有效且最常用的方法。CAs本身有自然熒光，經(jīng)HPLC法分離后，可以利用它的熒光進(jìn)行檢測(cè)，但是由于其自然熒光相對(duì)比較弱，不能用作生物樣品靈敏的選擇性測(cè)定方法。兒茶酚胺類物質(zhì)具有兩個(gè)官能團(tuán)（氨基和鄰二羥基），因此可以通過衍生化形成具有強(qiáng)熒光的物質(zhì)，借此提高檢測(cè)靈敏度。吳予明等[4]利用HPLC和熒光檢測(cè)器對(duì)嗜鉻細(xì)胞瘤患者和正常人24h尿中DA含量進(jìn)行測(cè)定，對(duì)樣品進(jìn)行調(diào)酸、萃取、調(diào)堿、吸附、洗滌、解析處理后，100微升進(jìn)樣，結(jié)果可見：多巴胺濃度在1.3*10-7mol/L～3.8*10-6mol/L內(nèi)與色譜峰峰高的線性關(guān)系良好（r=0.998）精密度RSD（n=6）4.2%～10.3%。

衍生化可分成柱前衍生化和柱后衍生化兩種，在分離前需要制備熒光衍生物的柱前衍生化是，有鄰苯二甲醛（OPA）、熒光胺（FA）、丹磺酞氯（DNSCI） l，2一二苯基乙二胺（DPE）及萘一2，3一二羧醛等屬于柱前衍生化試劑。這些試劑可用于尿樣和一些經(jīng)提純的組織樣品中的兒茶酚胺類物質(zhì)的測(cè)定，但對(duì)血漿中CAs的測(cè)定靈敏度較低。

CAs與1，2一二苯基乙二胺有特異性反應(yīng)，用離子交換樹脂柱萃取，經(jīng)過簡(jiǎn)單的提純過程，就可以進(jìn)行血漿、血紅細(xì)胞和尿樣中CAs的測(cè)定。Nohta等用柱前衍生化方法測(cè)定了血漿和尿樣中的CAs。Ragab等用上述試劑作為HPLC法化學(xué)發(fā)光檢測(cè)CAs的靈敏前置柱衍生劑，測(cè)定了CAs和異丙腎上腺素，檢出限為400～120amol。目前，日本Hitachi公司已研制出基于1，2一二苯基乙二胺衍生化反應(yīng)的HPLC法CAs自動(dòng)分析儀，并已投放市場(chǎng)[5]。

參考文獻(xiàn)：

[1] 張慶云，李佳林，鄭培，李艷霞，車雨軒，董曉東.大腦神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺的檢測(cè)方法 [J]醫(yī)學(xué)研究與教育，2014，31（1）：87-90

[2] Fotpoulou Maria A， Ioannou Penelope C. Post-column terbi sensitized fluorescence detection for the determination of nopinephrine， epinephrine and domamine using high-performance liq chmmatography[J].Anal Chim Acta，2002，462（2）：179～186.

[3] 馬奎蓉，權(quán)迎春，秦元滿，等.手性熒光衍生化反相高效色譜法分析多巴胺[J]分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2005，24（2）：73～75

[4] 吳予明，等.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2000 ，10 （5） ：526 - 528.

[5] 董捷，房剛，葉新強(qiáng).兒茶酚胺類物質(zhì)的分析進(jìn)展[J]化學(xué)分析計(jì)量，2001，10（6）：34～37