熱休克蛋白90 在胃癌組織中表達的初步研究

王福根 高福平 魏 謹 馬 平

胃癌是危害我國人民健康的重大疾病之一，發病率位于常見致死癌癥的第2 位［1］。我國地廣人多，成人幽門螺旋桿菌感染率高達40%～60%，屬于胃癌高發國家，每年胃癌新發病例約40 萬例，死亡約35 萬例。熱休克蛋白(heat-shock protein，HSPs)是一組高度保守的蛋白家族，存在于多種生物體內，當機體應激反應時新合成或合成增加。HSPs 的亞型熱休克蛋白90(heat-shock protein 90，HSP90)與細胞的信號轉導調控及生長發育密切相關［2］。近年來，越來越多的實驗表明HSP90 與多種腫瘤的發生、發展有著密切的關系。我院采用免疫組化87-8973 二步法檢測胃癌組織中HSP90 的表達，分析其與患者臨床病理學參數的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集南京市高淳人民醫院2009 年1月至2014 年12 月進行手術切除胃癌的80 例患者，并收集20 例癌旁正常組織作為對照(距離癌組織＞5 cm)，所有病例均經病理診斷明確。男性患者57 例，女性23 例;年齡27 ～78 歲，中位年齡62 歲;按照TNM分期，I+II 期33 例，Ⅲ+IV 期47 例。患者術前均未行放、化療。

1.2 試劑兔抗人單克隆抗體HSP90(HSP90AB1)購自南京偉沃生物科技有限公司。87-8973 試劑盒及DAB 試劑盒均購自北京中杉金橋公司。所有標本經4%的中性甲醛固定，石蠟包埋，3 ～4 μm 厚連續切片。免疫組化采用87-8973 二步法染色，按試劑盒說明書進行規范操作。

1.3 結果判讀腫瘤細胞質出現棕黃色顆粒為陽性。每張切片的陽性強度分為:無著色為0 分，淡黃色1分，棕黃色及棕褐色分別2 分、3 分，高倍鏡下隨機對每張切片的1 000 個細胞。按陽性細胞占腫瘤細胞的百分比評分:無陽性細胞為0 分，＜25%為1 分，25%～50%為2 分，＞50%為3 分。2 項評分結果相加，0 ～2 分為陰性，3 ～6 分為陽性。由2 位高年資病理科醫師經雙盲法判讀。

1.4 統計學方法采用SPSS 19.0 進行統計分析，計數資料以例或百分比表示，統計分析采用χ2檢驗，以P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HSP90 蛋白在胃癌組織、癌旁正常組織中的表達

80 例胃癌中，51 例呈陽性表達，陽性率為63.75%;20 例胃正常組織中，6 例陽性表達，陽性率為30.00%。胃癌組織中HSP90 蛋白表達高于其對應癌旁組織，差異有統計學意義(χ2=7.44，P=0.01)。

2.2 HSP90 的表達與胃癌臨床病理特征關系不同腫瘤分化程度、侵犯深度、淋巴結有無轉移及TNM 分期的胃癌組織HSP90 陽性率不同，差異有統計學意義(P ＜0.05);不同性別、年齡、腫瘤大小、部位、Borrmann 分型的胃癌組織HSP90 陽性率進行比較，差異無統計學意義(P ＞0.05)。見表1。

3 討論

胃癌的發生、發展是一個多因素多步驟復雜的過程［3，4］。HSPs 是由Tissieres 等于20 世紀70 年代發現的一類新蛋白。HSPs 在生物體內發揮分子伴侶的功能，可維持蛋白質的穩定，提供細胞生存率，在細胞的生長、發育以及基因轉錄中起重要的作用。當機體受到各種理化因素侵擾時，機體激活HSP 基因表達HSPs，保護細胞免于凋亡。HSP90 是小分子HSPs 家族中的重要成員，在蛋白質的調節功能、亞基組裝等過程中發揮著重要作用。HSP90 的過度表達對維護腫瘤細胞穩定起著重要作用。HSP90 是一種ATP 酶依賴的分子伴侶，HSP90 的構象可以發生改變，其ATP/ADP 結合部位有構象轉換的作用，HSP90 以開放及閉合形式發揮著作用，是其作為分子伴侶的重要特征之一［5］。HSP90 的底物蛋白涉及到幾乎所有的細胞過程。

HSP90 也可與其輔助的分子伴侶調控腫瘤細胞的凋亡，該調控是通過腫瘤壞死因子受體、AKT 與NFKB 介導的，然而，HSP90 另一重要作用是促進腫瘤的轉化。HSP90 可與底物蛋白如突變蛋白、蛋白激酶、激素受體等相互發生作用，促使它們維持在一種易被激活的狀態［6］。HSP90 在大多數腫瘤中表達增高。胰腺癌中HSP90a 呈選擇性高表達［7］，且HSP90 高表達和胰腺癌的臨床TNM分期、淋巴結轉移存在相關性。杜文眾等［8］認為HSP90的表達水平與垂體腺瘤侵襲性有關，其表達水平有可能作為判斷垂體腺瘤侵襲性和預后的指標。王桂蘭等［9］研究發現涎腺腫瘤惡性組HSP90 陽性率顯著高于良性組，HSP90 可促進涎腺惡性腫瘤的發生、發展。本文HSP90 在胃癌組織中的表達顯著高于正常胃組織，差異有統計學意義。

正常胃組織中HSP90 存在的表達是其作為分子伴侶參與細胞生長和增殖的調節，而在胃癌組織中HSP90 的過表達，可能與HSP90 調節和穩定胃癌細胞的惡性增殖有關。對于HSP90 與不同腫瘤病理特征及預后的關系報道尚無一致結論。Pick 等［10］研究認為HSP90 與乳腺癌的腫瘤大小、病理分級及淋巴結轉移相關。Kurahashi 等［11］在前列腺癌中的研究發現HSP90 與腫瘤大小、病理分級及淋巴結轉移無關。本文結果發現胃癌中HSP90 蛋白的陽性率與腫瘤分化程度、侵犯深度、淋巴結有無轉移及TNM 分期相關，其機制有待進一步研究。

表1 80 例胃癌患者胃癌組織中HSP90 的表達與臨床病理特征關系

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［2］ 康紅云，陳雪梅，鄒飛.Tubulin 和HSP90 在氧化應激預適應中的作用［J］.中國病理生理雜志，2009，25(1):104－106.

［3］ 萬里鵬，覃艷瓊.腹腔鏡下遠端胃癌根治與D2 淋巴結清掃安全性及可行性分析［J］.安徽醫學，2015，34(3):331－333.

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［6］ 王琪琳，劉相國.分子伴侶HSP90 在腫瘤發生中的作用機制［J］.山東醫藥，2011，51(35):113－114.

［7］ 干文娟，馮一中，李峰.HIF-1α、HSP90 在胰腺癌組織芯片中的表達及其臨床意義［J］.中國癌癥雜志，2011，21(8):604－609.

［8］ 杜文眾，藺友志，王洪亮.HSP90 與垂體腺瘤侵襲性關系的研究［J］.哈爾濱醫科大學學報，2011，45(4):333－335.

［9］ 王桂蘭，顧曉林，陳莉，等.涎腺腫瘤組織中HSP90α 和Cmye 表達及意義［J］.山東醫藥，2010，50(47):23－25.

［10］Pick E，Kluger Y，Giltnane JM，et al.High HSP90 expression is associated with decreased survival in breast cancer［J］.Cancer Res，2007，67(7):2932－2937.

［11］Kurahashi T，Miyake H，Hara I，et al.Expression of major heat shock proteins in prostate cancer:corelation with clinicopathological outcomes in patients undergoing radical prostatectomy［J］.J Urol，2007，177(2):757－761.