百癬夏塔熱軟膏中槲皮素與沒食子酸的含量測定及穩(wěn)定性研究

王瑞芳等

【摘要】目的：建立百癬夏塔熱軟膏高效液相色譜測定方法，并考察該制劑的穩(wěn)定性。方法：采用高效液相色譜法測定軟膏中槲皮素和沒食子酸的含量，考察濕度、光照及溫度對百癬夏塔熱軟膏穩(wěn)定性的影響。結(jié)果：槲皮素在004 ～04μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；沒食子酸在002～02μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；百癬夏塔熱軟膏對濕度和強光照射不敏感；于40℃、75%濕度下加速實驗，第6個月外觀發(fā)生變化，含量明顯下降。結(jié)論：建立的方法具有簡便、快速和準確度高等優(yōu)點；該制劑對強光及高濕不敏感，室溫密閉保存含量穩(wěn)定。

【關(guān)鍵詞】百癬夏塔熱軟膏；槲皮素；沒食子酸；高效液相色譜法；穩(wěn)定性

【中圖分類號】R2841【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2015）16-0026-02

百癬夏塔熱軟膏為外用制劑，處方來源于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準—維吾爾分冊》中收載的傳統(tǒng)維藥百癬夏塔熱片。具有清除異常粘液質(zhì)、膽液質(zhì)及敗血，消腫止癢的功效。臨床用于治療手癬、體癬、足癬、花斑癬、銀屑病、過敏性皮炎、帶狀皰疹、痤瘡等。方中君藥地錦草的主要有效成分為槲皮素，訶子肉、毛訶子肉、西青果的主要有效成分均為沒食子酸，所以我們選用槲皮素和沒食子酸作為含量測定指標，本實驗采用高效液相色譜法（HPLC）測定軟膏中槲皮素和沒食子酸的含量，并考察光照、溫度及濕度等因素對百癬夏塔熱軟膏穩(wěn)定性的影響。

1儀器與材料

11儀器LC2010A HT高效液相色譜儀（日本島津）；BT25S十萬分之一分析天平（德國賽多利斯科學儀器有限公司）。

1.2材料槲皮素對照品（批號：100081-200406）、沒食子酸對照品（批號：11083-200302）均由中國藥品生物制品檢定所提供。百癬夏塔熱軟膏（批號：130320、130321、130322，新疆奇康哈博維藥有限公司研究院）。甲醇為色譜純，水為純化水，其余試劑均為分析純。

2槲皮素的含量測定

2.1色譜條件色譜柱：Kromasil 100-5 C18 column（150mm×46mm）；流動相：甲醇-04%磷酸溶液（50：50）；柱溫：25℃；流速：1ml/min；檢測波長：370nm。

2.2供試品溶液的制備取百癬夏塔熱軟膏約1g，精密稱定，至具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50ml，稱定重量，置于80℃水浴中保持10min，并不停震蕩，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.3標準曲線的繪制精密稱取槲皮素對照品5mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取上述溶液1、2、4、6、8、10ml移至25ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別取進樣10μl測定。以進樣量（x）對峰面積（y）作圖，得到標準曲線圖，其回歸方程為y=162769x+395085，r=09998（n=6）。表明槲皮素在004 ～04μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4精密度實驗分別配制高、低2種濃度的槲皮素對照品各5份，分別測定，測定槲皮素峰面積，結(jié)果RSD值分別為071%和053%。說明儀器的精密度良好。

2.5穩(wěn)定性實驗取同一供試品溶液，室溫密閉放置，分別于0、2、4、6、8h進樣10μl，測定槲皮素的峰面積，RSD為087%（n=5），說明樣品在8h內(nèi)較為穩(wěn)定。

2.6重復性實驗取同一批樣品5份，按“2.2”的方法制成供試品溶液，測定槲皮素的平均峰面積，RSD為072%（n=5）。

2.7加樣回收率實驗精密稱取槲皮素對照品6mg，加入到10g乳膏劑基質(zhì)中，充分研磨均勻，再精密稱取該樣品1g，溶于50ml 80%甲醇中，置于80℃水浴中保持10min，并不停震蕩，濾過，取續(xù)濾液10μl注入液相色譜儀，計算回收率，結(jié)果見表1。

28樣品測定取3批百癬夏塔熱軟膏按“2.2”的方法制成供試品溶液，測得3批樣品中槲皮素的含量，結(jié)果見表2。

3沒食子酸的含量測定

31色譜條件色譜柱：Kromasil 100-5 C18 column（250mm×46mm）；流動相：甲醇-01%磷酸溶液（10：90）；柱溫：25℃；流速：1ml/min；檢測波長：270nm。

32供試品溶液的制備 取百癬夏塔熱軟膏約1g，精密稱定，至具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

33標準曲線的繪制精密稱取沒食子酸對照品5mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取上述溶液1、2、4、6、8、10ml移至50ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進樣10μl測定。以進樣量（x）對峰面積（y）作圖，得到標準曲線圖，其回歸方程為y=15128x+478660，r=09996（n=6）。表明沒食子酸在002～02μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

34精密度實驗分別配制高、低2種濃度的槲皮素對照品各5份，分別測定，測定沒食子酸的峰面積，結(jié)果RSD值分別為052%和047%，說明儀器的精密度良好。

35穩(wěn)定性實驗取同一供試品溶液，室溫密閉放置，分別于0、2、4、6、8h進樣10μl，測定沒食子酸的峰面積，RSD為059%（n=5），說明樣品在8h內(nèi)較為穩(wěn)定。

36重復性實驗取同一批樣品5份，按“32”的方法制成供試品溶液，測得沒食子酸的峰面積，RSD為093%（n=5）。

37加樣回收率實驗精密稱取沒食子酸標準品5mg，加入到10g適量乳膏劑基質(zhì)中，充分研磨均勻；再精密稱取該樣品1g，精密加入50ml 50%甲醇，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10μl注入液相色譜儀，計算回收率，結(jié)果見表2。