云南麗江山慈菇品種考證及有效成分秋水仙堿含量的研究

管倫興，儲益平

麗江山慈菇為傳統(tǒng)常用中藥，具有清熱解毒，消腫散結(jié)之功效，臨床被用于治療痛風(fēng)、乳腺癌、胃癌、甲狀腺瘤等。百合科植物老鴉瓣由于和正品山慈菇外形極為相似，常被作為偽品混用，但在成分、功效上均存在各自差異，特別是麗江山慈菇所含秋水仙堿成分最高，外用尚可，內(nèi)服極易中毒。筆者前期通過文獻(xiàn)和書籍查閱發(fā)現(xiàn)，歷代本草中雖有對山慈菇的記載，經(jīng)后世不斷考證報道的多為蘭科植物獨(dú)花蘭、杜鵑蘭、獨(dú)蒜蘭、云南獨(dú)蒜蘭以及百合科植物老鴉瓣等化學(xué)成分及藥理研究，較多臨床研究報道也未說明使用山慈菇哪一品種。麗江山慈菇雖藥用價值大，在臨床上已得到應(yīng)用，但是對于其品種來源及有效成分等研究報道尚缺乏，導(dǎo)致后世對該品種了解甚少。因此本文通過文獻(xiàn)查閱結(jié)合實(shí)驗(yàn)研究，對麗江山慈菇藥材做進(jìn)一步探討，旨在為后續(xù)新藥開發(fā)和臨床應(yīng)用提供參考價值。

1 麗江山慈菇品種考證

麗江山慈菇別名益辟堅(jiān)、光慈姑、草貝母、鬧狗藥等，現(xiàn)收載于2007年《云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》，為百合科植物山慈菇Iphigenia indica Kunth 的干燥球莖，味微苦、辛，寒，有毒。具有清熱解毒，消腫散結(jié)之效。用于痛風(fēng)，手足關(guān)節(jié)紅腫疼痛，瘡瘍腫毒，瘰疬結(jié)核，蟲蛇咬傷。據(jù)考證明代蘭茂《滇南本草》所載山慈菇即為本品，文中所言“消陰分之痰，止咳嗽，治喉痹，止咽喉癰，治毒瘡，攻癰疽。敷諸瘡腫毒，有膿者潰，無膿者消”。雖然《中國高等植物圖鑒》（中國科學(xué)院植物研究所，1976）、《中國植物志》（汪發(fā)纘等，1980a，b）、《本草綱目通釋》（陳貴延等，1992）中只承認(rèn)山慈菇為百合科的麗江山慈菇，但是2010年版《中國藥典》收載的山慈菇為蘭科植物杜鵑蘭Cremastraappendicutata(D.Don) M akino、獨(dú)蒜蘭Pleionebulbocodioides(Franch.) Rolfe或云南獨(dú)蒜蘭P.yunnanensisRolfe的干燥假鱗莖，前者習(xí)稱“毛慈菇”，后兩者習(xí)稱“冰球子”。

諸多現(xiàn)代文獻(xiàn)所記載的山慈菇涉及2科5屬多種植物，市售藥材混稱山慈菇者，以百合科植物老鴉瓣和麗江山慈菇最為常見，藥典尚未收載。麗江山慈菇在云南作山慈菇藥用已有較長歷史。有文獻(xiàn)報導(dǎo)麗江山慈菇在中國僅分布單屬單種，主產(chǎn)于云南中部至西北部、四川西南部，貴州西部和西藏等省區(qū)也有分布，生于1000~3000m松林下或山坡草地，酸性砂壤，紅壤[1]。該品種在云南省內(nèi)主要分布于昆明、曲靖、玉溪、楚雄、大理、麗江、保山、鶴慶、賓川。

2 麗江山慈菇有效成分秋水仙堿的含量測定

筆者于2009年~2011年分別采購來自云南不同產(chǎn)地麗江山慈菇藥材8批，參考相關(guān)文獻(xiàn)[2]，采用高效液相色譜法進(jìn)行了秋水仙堿的含量測定。

2.1 儀器與色譜條件

儀器為安捷倫1200高效液相色譜儀；色譜條件為Phenomenex luna C18(4.6mm×150mm，5μm)；流動相為甲醇-水(45∶55)；流速1.0mL/min；柱溫30℃；檢測波長245nm。

2.2 藥材提取方法考察

取2009年8月采購的麗江山慈菇藥材100g，粉碎為中粉，過50目篩，備用。

2.2.1 提取方式考察 取兩份麗江山慈菇粉末各0.5g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，分別采用超聲和回流提取1小時，放冷，用甲醇補(bǔ)足重量，過濾，取續(xù)濾液，以0.45μm微孔濾膜濾過，即得。將上述供試品溶液分別按照前述色譜條件進(jìn)樣10μL測定，以秋水仙堿色譜峰面積與藥材取樣量的比值作為指標(biāo)，比較不同提取方式的提取效率，結(jié)果回流提取秋水仙堿的提取效率明顯高于超聲提取，見表1。

表1 不同提取方式的考察

2.2.2 提取溶劑的選擇 取麗江山慈菇粉末0.5g，精密稱定，置錐形瓶中，平行試驗(yàn)三份，分別精密加入30%甲醇、70%甲醇、甲醇25mL，稱定重量，水浴回流提取1小時，放冷，分別用相應(yīng)的溶劑補(bǔ)足重量，過濾，取續(xù)濾液，以0.45μm微孔濾膜濾過，即得。測定方法同上，結(jié)果70%甲醇對秋水仙堿的提取效率最高，見表2。

表2 不同提取溶劑的選擇

2.2.3 回流時間的選擇 取麗江山慈菇粉末0.5g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，稱定重量，分別在水浴中回流提取1、2、3小時三個時間點(diǎn)取樣10μL按照前述秋水仙堿測定色譜條件進(jìn)樣測定，取樣時樣品應(yīng)放冷，用70%甲醇補(bǔ)足重量。以秋水仙堿色譜峰面積作為指標(biāo)，比較回流時間對秋水仙堿提取效率的影響，結(jié)果從秋水仙堿的色譜峰面積分析，回流2小時已將藥材中的秋水仙堿基本提取完全，見表3。

表3 回流時間的選擇

2.2.4 回流次數(shù)的選擇 取麗江山慈菇粉末0.5g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，稱定重量，水浴回流提取2小時，放冷，過濾，取續(xù)濾液，以0.45μm微孔濾膜濾過，作為1次回流供試液；藥材殘?jiān)凑丈鲜龇椒ㄌ幚恚謩e制得2次、3次回流供試液。分別將三次回流供試液按照前述秋水仙堿測定色譜條件進(jìn)樣10μL測定，以秋水仙堿峰面積比較回流次數(shù)對秋水仙堿提取效率的影響，結(jié)果從秋水仙堿的色譜峰面積分析，回流2次已將藥材中的秋水仙堿基本提取完全，見表4。

表4 回流次數(shù)的選擇

2.2.5 8批麗江山慈菇藥材含量測定 通過以上考察，最終確定供試品處理方法為取麗江山慈菇粉末0.5g，精密稱定，置錐形瓶中，以70%甲醇25mL水浴回流提取2次，每次2小時，放冷，過濾，濾液減壓回收至干，以甲醇定容至25mL容量瓶中，以0.45μm微孔濾膜濾過，即得。根據(jù)上述供試品處理方法及色譜條件，分別測得8批麗江山慈菇藥材中秋水仙堿含量，見表5。

表5 8批不同產(chǎn)地麗江山慈菇藥材中秋水仙堿的含量測定結(jié)果

8批麗江山慈菇含量實(shí)測結(jié)果中，秋水仙堿含量最低為0.223%，最高為0.409%，顯示不同產(chǎn)地、不同季節(jié)采收含量存在差異。

3 討論

麗江山慈菇為百合科多年生草本植物，性味苦、溫，有大毒，入肺、肝經(jīng)，具有止咳平喘，軟堅(jiān)散結(jié)，拔毒消腫，鎮(zhèn)痛，抗腫瘤等作用，臨床使用價值大，在市場上常與老鴉瓣一同被認(rèn)定為山慈菇的偽品。Santavy等1964年曾報道麗江山慈菇含秋水仙堿約0.14~0.2%，N-甲酰去乙酰秋水仙堿及β-光秋水仙堿[3]。1974年麗江山慈菇以山慈菇為藥材名收入《云南省藥品標(biāo)準(zhǔn)》，藥用其鱗莖，其種子、球莖、葉、莖含秋水仙堿等多種生物堿[4,5]。在多種用作山慈菇的中藥中，麗江山慈姑中秋水仙堿的含量最高，可作為提取秋水仙堿的原料藥材。根據(jù)文獻(xiàn)報道麗江山慈菇秋水仙堿含量以最外面的膜質(zhì)層（外包皮）和鱗莖外層最高，中層和內(nèi)層含量很少；鱗莖中秋水仙堿含量于果實(shí)剛飽滿時最高，果實(shí)成熟后慢慢降低，至翌年鱗莖剛萌發(fā)時最低，一年生實(shí)生苗鱗莖含量最高；種子育苗的采收最佳時期為三年后果熟期，即第三年9月下旬[6]。袁理春等報道對云南省西北部及四川省越西縣的22個野生麗江山慈菇居群測定表明，分布在金沙江兩岸貧瘠砂礫土壤上的麗江紅巖居群秋水仙堿含量最高達(dá)0.61%，而生長在較肥沃的草叢中的永勝縣板橋鄉(xiāng)居群僅為0.13%，說明麗江山慈菇秋水仙堿含量與生境土壤、土質(zhì)有較大關(guān)系。試驗(yàn)所測的22個居群，代表了當(dāng)前中國麗江山慈姑的主要分布區(qū)，其秋水仙堿含量平均為0.40%[7]。周俊等報導(dǎo)云南麗江等地所產(chǎn)麗江山慈菇的秋水仙堿含量在0.1%[8]。涂茂利等報導(dǎo)四川越西縣產(chǎn)麗江山慈菇的含量在0.33%[9]。結(jié)合文獻(xiàn)記載與實(shí)測數(shù)據(jù)分析，麗江山慈菇由于生長年限不同、采收期不同、產(chǎn)地不同等影響因素，導(dǎo)致藥材所含指標(biāo)成分秋水仙堿的含量變化幅度較大，最低值為0.1%，最高0.61%。本次實(shí)驗(yàn)中8批自購藥材所測數(shù)據(jù)進(jìn)一步證實(shí)了文獻(xiàn)報道。

目前麗江山慈菇主要分布在云南地區(qū)，開發(fā)利用仍以野生為主。本文旨在對藥材進(jìn)行本草考證，為臨床使用提供依據(jù)，其次驗(yàn)證了文獻(xiàn)報道中麗江山慈菇有效成分秋水仙堿的含量，分析了引起含量變化的影響因素，以期通過科學(xué)合理的大規(guī)模規(guī)范化種植達(dá)到既保護(hù)野生資源，又有利于品種的后續(xù)開發(fā)和臨床運(yùn)用的目的。

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