基于EPOR、HMGA2表達變化探討康萊特防治進展期胃癌的臨床研究

李華燕　李斌　黃建斌　陳利民

（廣東省江門市第二人民醫院江門529050）

基于EPOR、HMGA2表達變化探討康萊特防治進展期胃癌的臨床研究

李華燕李斌黃建斌陳利民

（廣東省江門市第二人民醫院江門529050）

目的：觀察胃癌患者治療前后Karnofsky評分以及EPOR、HMGA2表達變化，探討康萊特注射液防治胃癌的機制研究。方法：48例符合診斷標準、納入標準、排除標準的胃癌患者按就診順序1∶1分為對照組與治療組。對照組給予化療藥物治療，治療組給予康萊特注射液聯合化療藥物治療，兩組均治療2個療程。應用Karnofsky評分記錄兩組患者治療前后生活質量積分變化，應用免疫組化技術檢測兩組治療前后EPOR、HMGA2表達變化。結果：全部病例完成臨床觀察，治療組完全緩解0例、部分緩解8例、穩定10例、進展6例，總有效率為75.0%；對照組完全緩解0例、部分緩解7例、穩定8例、進展9例，總有效率為62.5%：兩組總有效率比較差異有統計學意義（P＜0.05）。治療前，兩組患者Karnofsky評分比較差異無統計學意義（P＞0.05）。治療后治療組Karnofsky評分高于對照組，且治療8周后兩組比較差異具有統計學意義（P＜0.05）。治療組EPOR、HMGA2表達水平呈下降趨勢，較治療前差異有統計學意義。對照組EPOR、HMGA2表達水平較治療前無明顯變化。結論：康萊特注射液可能通過調控EPOR、HMGA2表達水平，提高患者生存質量，有效緩解其臨床癥狀。

胃癌；促紅細胞生成素受體；高遷移率族蛋白A2；康萊特

胃癌在我國發病率位于所有惡性腫瘤首位，年平均死亡率為25.53/100 000，而腫瘤的轉移是治療失敗的主要原因［1］。上皮細胞間質化（Epithelial-Mesenchymal Transitions，EMT）是一種與腫瘤侵襲轉移密切相關的一種生理現象，研究發現高遷移率族蛋白A2（High Mobility Group Protein A2，HMGA2）可促進腫瘤細胞EMT發生，增加腫瘤發生浸潤、轉移的能力［2～3］。促紅細胞生成素（Erythropoietin，EPO）是一種糖蛋白造血細胞生長因子，主要由人體中的腎小管周圍毛細血管床的間質細胞產生，EPO與促紅細胞生成素受體（EPOR）結合調控紅系干細胞增殖、分化、成熟，促進網織紅細胞釋放入血的生物學作用。Lin等［4］研究發現EPO/EPOR的表達在胃癌組織中呈上升趨勢，與胃癌的生長、浸潤及轉移密切相關。目前化療是進展期胃癌的主要治療手段之一，由于進展期胃癌的預后與患者狀況、病理類型、分期、腫瘤本身的生物學行為等多因素有關，應制定合理的綜合治療方案，以最大限度地改善患者的預后，延長患者的生存期［5］。近年來，康萊特注射液治療進展期胃癌的臨床療效得到了廣泛認同，能有效提高患者免疫力及降低不良反應［6］。筆者采用康萊特注射液聯合化療藥物治療胃癌，與單純化療藥物治療進行對照，通過觀察主要效應指標Karnofsky評分變化及EPOR、HMGA2表達，探討康萊特注射液防治胃癌轉移的效用機制及臨床療效。

1　臨床資料

1.1病例來源全部病例均為2012年1月～2014年9月江門市第二人民醫院消化科住院患者48例。將患者按就診順序隨機分為治療組和對照組各24例。治療組男11例，女13例；年齡最小43歲，最大69歲，平均（52.43±11.60）歲；平均病程（2.20± 1.61）年；其中Ⅲ期14例，Ⅳ期10例。對照組男12例，女12例；年齡最小42歲，最大67歲，平均（53.62±11.80）歲；平均病程（2.35±1.11）年；其中Ⅲ期13例，Ⅳ期11例。兩組一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2西醫診斷標準根據中華人民共和國衛生部2010年頒布的《胃癌診斷標準》及美國聯合委員會（AJCC）2010年第七版胃癌TNM分期。

1.3納入標準（1）符合胃癌診斷標準并具備病理診斷；（2）TNM分期為Ⅲ期及Ⅳ期患者；（3）年齡40～70歲；（4）入組前3個月內未接受放、化療；（5）經患者及家屬簽署知情同意書。

1.4排除標準（1）無法配合治療的患者；（2）伴隨其他惡性腫瘤者；（3）孕婦及哺乳期婦女；（4）合并心、肝、腎嚴重損害或骨髓功能異常者。

2　研究方法

2.1研究設計采用開放隨機平行對照方法，48例符合診斷標準、納入標準的胃癌患者分為對照組、治療組。對照組給予化療藥物：第1天紫杉醇135 mg/m2靜脈滴注3 h，第1～5天順鉑20 mg/m2、5-氟尿嘧啶500～700 mg/m2靜脈滴注。使用紫杉醇前12、6 h分別給予地塞米松8 mg口服，紫杉醇用藥前半小時予地塞米松5 mg靜脈推注、苯海拉明50 mg肌肉注射、西咪替丁300 mg靜脈滴注預處理。治療組在給予化療藥物同時聯合應用康萊特100 ml靜脈滴注。用藥4周為1個療程，連續治療2個療程后評價療效。

2.2觀察指標

2.2.1主要效應指標采用Karnofsky評分標準［7～9］，評價生活質量評分的變化，治療組和對照組分別在治療前和治療后各評定一次。100分能進行正常活動，無癥狀和體征；90分能進行正常活動，有輕微癥狀和體征；80分勉強可進行正常活動，有一些癥狀和體征；70分生活可自理，但不能維持正常生活或工作；60分有時需人扶助，但大多時間可自理；50分常需人照料；40分生活不能自理，需增加特殊照顧；30分生活嚴重不能自理；20分病重，需住院積極支持治療；10分病危，臨近死亡；0分死亡。治療前后評分增加≥10分者為好轉，增加或減少未超過10分者為穩定，評分減少超過10分者為惡化。

2.2.2次要效應指標應用免疫組化法檢測胃黏膜組織中EPOR、HMGA2表達變化。

2.3檢測方法按照免疫組化SP法染色試劑盒說明書進行操作。用已知陽性組織切片作為陽性對照以PBS液代替一抗為陰性對照。根據樣本陽性細胞百分比和染色強度綜合評分，10個隨機高倍鏡視野下無陽性細胞計0分，＜25%計1分，25%～50%計2分，51%～75%計3分，＞75%計4分。染色強度計分：未著色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分。根據樣本陽性細胞百分比和染色強度計分之和的結果分為：0～3分為陰性或弱陽性，4分為陽性和強陽性。

2.4療效評價標準根據主要效應指標Karnofsky評分指數評價，并參照WHO實體瘤療效評價標準［10］，分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、穩定（SD）、進展（PD）進行判定。2個療程后評價療效，其中總有效率=（CR+PR+SD）例數/總例數×100%。

2.5統計學方法數據處理采用SPSS16.0統計學軟件包處理，計量資料采用均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數資料采用X2檢驗，檢驗水準α=0.05，P＜0.05為差異具有統計學意義。

3　研究結果

3.1兩組臨床療效比較見表1。

表1　兩組臨床療效比較［例（%）］

3.2兩組不同時期Karnofsky評分比較兩組經過治療后，治療組Karnofsky評分高于對照組，且治療8周后兩組比較差異具有統計學意義。見表2。

3.3兩組患者不良反應比較兩組經過治療后，治療組胃腸道反應率為37.5%，白細胞減少發生率為29.2%，貧血發生率為20.8%，血小板減少發生率為25.0%，轉氨酶升高發生率為16.7%，過敏反應發生率為0.0%；而對照組胃腸道反應率為62.5%，白細胞減少發生率為62.5%，貧血發生率為45.8%，血小板減少發生率為45.8%，轉氨酶升高發生率為29.2%，過敏反應發生率為0.0%：兩組比較，差異有統計學意義（P＜0.05），治療組不良事件反生率低于對照組。見表3。

表2　兩組不同時期臨床Karnofsky評分比較（分，±s）

表2　兩組不同時期臨床Karnofsky評分比較（分，±s）

注：治療組：治療后VS治療前，t=10.258，P=0.024；對照組：治療后VS治療前，t=11.376，P=0.036。治療后：治療組VS對照組，治療4周后比較，t= 1.234，P=0.238；治療8周后比較，t=12.212，◇P=0.043。

組別n治療前治療4周后治療8周后治療組對照組24 24 41.32±6.2 42.64±5.1 59.65±5.5 55.45±4.3 65.13±5.2◇60.28±3.1

表3　兩組患者不良反應比較（例）表1兩組臨床療效比較

3.4兩組治療前后EPOR、HMGA2表達水平比較治療組經過治療后胃黏膜組織中EPOR、HMGA2陽性表達水平均明顯下降（P＜0.05）；對照組胃黏膜組織中EPOR、HMGA2表達水平較治療前無明顯變化。見表4。

表4　兩組治療前后EPOR、HMGA2表達水平比較（%±s）

表4　兩組治療前后EPOR、HMGA2表達水平比較（%±s）

注：治療組：治療后VS治療前，t=2.699，P=0.017；對照組：治療后VS治療前，t=0.637，P=0.537。

組別n時間EPORHMGA2治療組對照組24 24治療前治療后治療前治療后3.60±0.32 2.01±0.11 2.33±0.12 2.20±0.15 3.07±0.26 2.10±0.25 2.45±0.30 2.32±0.31

4　討論

胃癌的發病率及病死率非常高，其侵襲和轉移是影響胃癌患者預后及死亡的重要原因。傳統化療是胃癌的主要治療手段之一，但有效率低，不良反應大。晚期胃癌患者多伴有食欲不振、消瘦、食欲減退等惡病質情況，因此生存質量較低。本研究采用的康萊特注射液主要成分是從薏苡仁中提取的薏苡油。薏苡仁是禾本科植物的成熟種仁，性甘、淡、微寒，歸脾、胃、肺經，具有滲濕利水、健脾止瀉、舒筋、清熱排膿之功效。有研究［11］表明康萊特注射液能夠誘導腫瘤細胞凋亡，阻滯腫瘤細胞有絲分裂，殺傷癌細胞及提高免疫功能，同時還可減輕放療、化療的毒副作用，緩解疼痛，穩定病情，提高患者的生活質量，并在預防腫瘤的復發、轉移中具有重要的意義。王燦等［12］通過循證醫學分析也同樣證實了康萊特聯合化療治療胃癌的有效性。本研究發現康萊特注射液聯合化療治療晚期胃癌，總有效率較單用化療高，并且能改善患者生存質量，改善骨髓抑制，減少化療所產生的不良反應和對抗惡病質的產生。

高遷移率族蛋白（HMGs）是一類染色質相關非組蛋白，HMG包括HMGA、HMGB和HMGN 3個家族，高遷移率族蛋白A2（HMGA2）是其中重要的成員之一，其主要參與DNA損傷修復、基因轉錄調控等，在胚胎時期常高表達與細胞生長、分化等過程相關，一般成體組織中基本低表達或不表達［13］。HMGA2在腫瘤血管生成的過程中起重要作用。HMGA2可以通過AT-hooks與DNA結合，繼而改變染色質的結構，使之發生彎曲、拉伸、卷曲、成環或解鏈，從而調節靶基因的轉錄，因此又被稱為構筑性轉錄因子。作為一種結構轉錄因子，可以對大量基因的轉錄和活化進行調節，特別是那些與細胞增殖和凋亡相關的基因［14］。Ohshima等［15］認為HMGA2與Let-7家族負向調控，與胃癌的侵襲性相關。查郎等［16］認為胃癌臨床轉移和進展能力的主要機制可能是通過HMGA2上調其下游的目標基因Snail、Twist和Slug等表達，作為E-cadherin基因轉錄的抑制物，導致表達E-cadherin下調，細胞間極性喪失而誘發EMT，使之具有更強的侵襲轉移能力，進而加快腫瘤進展。

人類EPO基因定位于7號染色體長臂22區（7q22），由166個氨基酸殘基組成。EPO促進紅細胞生成的生物學效應是通過位于骨髓紅系祖細胞表面的特異性EPO受體介導完成。EPO與EPOR結合后，EPOR形成二聚體，再通過信號傳導途徑調節紅系的增生和分化。有研究表明EPO/EPOR信號通路可影響腫瘤血管內皮微環境而導致腫瘤血管生成［17］。Yasuda［18］等通過標記被轉移胃癌細胞的裸鼠體內的EPO/EPOR通路，可發現胃癌腫瘤血管形成，與EPO/EPOR的表達量具有一定的相關性。EPOR可能和微血管密度有協同作用，可促進腫瘤血管生成，從而使腫瘤的生長、增殖、侵襲并轉移。

本研究發現治療組可降低EPOR、HMGA2表達水平，而對照組卻無明顯變化。由此推測康萊特注射液治療胃癌的療效及胃癌患者生活質量的機制可能通過調節EPOR表達水平來減少腫瘤血管生成，抑制腫瘤生長，同時還可通過調控HMGA2的表達來抑制胃癌上皮間質轉化從而降低胃癌細胞的侵襲性。但EPOR與HMGA2的表達調控是否具有相關性仍需進一步研究。

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Clinical Study of Kanglaite Injection in Treating Advanced Gastric Cancer Based on the Changed-expression of EPOR and HMGA2

LI Hua-yan，LI Bin，HUANG Jian-bin，CHEN Li-min
（The Second Peoples'Hospital of Jiangmen City，Jiangmen529050）

Objective:To explore the mechanism of Kanglaite injection by the observation of the changed-expression of the EPOR and HMGA2 and the Karnofsky score in the advanced gastric cancer patients before and after treatment.Methods:48 Patients meet the diagnostic criteria，inclusion criteria and exclusion criteria of advanced gastric cancer were divided into the control group and the treatment group according to the order of treatment.The control group was given chemotherapy drug，and the treatment group was given Kanglaite injection combined with chemotherapy drug.The life quality score was recored according to Karnofsky score before and after treatment.The expression of HMGA2 and EPOR were detected by immunohistochemical technique.Results:All the patients were completed the clinical observation，the total efficiency of the treatment group was 75.0%，the total efficiency of the control group was 62.5%，there was a statistical significant between the two groups（P＜0.05）.Before treatment，there was no significant difference between the two group in Karnofsky scores（P＞0.05）.But，the Karnofsky score of the treatment group was higher than that of the control group after treatment，and there was statistical significance between the two groups after second courses of treatment（P＜0.05）.Before the treatment，the expression of HMGA2 and EPOR were in the increment.Then the expression of HMGA2 and EPOR were on the decline after the treatment（P＜0.05）.The expression of HMGA2 and EPOR in the control group had no significant change（P＞0.05）.Conclusion: Kanglaite injection can effectively remissive the clinical symptoms of gastric cancer and improve the life quality by regulating the expression of EPOR and HMGA2.

Gastric cancer；Eerythropoietin receptor；High mobility group protein A2；Kanglaite injection

R735.2

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2015.12.002

2015-11-10）