類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎Th2細(xì)胞過度激活的影響因素

丁伯泉　王再平　李大森★　古　俊

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎Th2細(xì)胞過度激活的影響因素

丁伯泉王再平李大森★古俊

目的 探討類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）患者Th2細(xì)胞過度激活的產(chǎn)生原因。方法 采用流式細(xì)胞術(shù)分析RA患者外周血淋巴細(xì)胞表面分化抗原（CD），同時(shí)用酶免疫法檢測(cè)血漿白細(xì)胞介素（IL-4和IL-6）的變化。結(jié)果 與對(duì)照組比較，RA患者CD25+和CD19+細(xì)胞水平升高，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）；CD8+/CD28-細(xì)胞水平減少，差異有顯著性（P＜0.01）；CD3+和CD4+差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；IL-4和IL-6細(xì)胞水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)論 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者因其細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)紊亂而導(dǎo)致體內(nèi)Th2細(xì)胞過度激活。

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 T淋巴細(xì)胞 免疫調(diào)節(jié)

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）的發(fā)病與細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)密切相關(guān)，是以慢性多發(fā)性關(guān)節(jié)炎為主要臨床表現(xiàn)的全身免疫性疾病。研究表明RA與機(jī)體免疫功能紊亂密切相關(guān)［1］，表現(xiàn)為關(guān)節(jié)滑膜組織慢性炎癥，導(dǎo)致滑膜組織內(nèi)纖維母樣細(xì)胞增生，有大量激活的T細(xì)胞、B細(xì)胞、 巨噬細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞浸潤(rùn)，并分泌大量的促炎癥介質(zhì)［2，3］。為了探討輔助性T細(xì)胞（Th）2在RA發(fā)病中的作用，作者采用流式細(xì)胞術(shù)和酶免疫檢測(cè)技術(shù)，對(duì)RA患者的外周血淋巴細(xì)胞表面抗原分化（CD）和血漿白細(xì)胞介素（IL-4和IL-6）水平進(jìn)行檢測(cè)和分析。本文分析RA患者外周血CD3+、CD4+、CD8+/ CD28-、CD25+和CD19+細(xì)胞CD的表達(dá)，旨在探討其在RA發(fā)病過程中的免疫病理作用。

1　臨床資料

1.1一般資料 本院自2011年2月至2013年3月確診的32例RA患者為觀察組，其中男10例，女22例；年齡22～68歲。抽取其未經(jīng)治療前的靜脈血5ml，加肝素抗凝。再從本院健康體檢人員中隨機(jī)選取32例無RA病史的健康者作為對(duì)照組，同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。本項(xiàng)目得到醫(yī)院科研部門的批準(zhǔn)，并征得所有患者的同意。

1.2試劑與儀器 異硫氰酸熒光素（FTTC）標(biāo)記的抗CD3、CD4、CD8、CD28、CD25和CD19單克隆抗體（單抗）。IL-4和IL-6檢測(cè)試劑盒（美國(guó)Genzyme公司）。EPICS型流式細(xì)胞儀。

1.3IL-4和IL-6水平測(cè)定 采用雙抗體夾心 ELISA方法，操作方法見參考文獻(xiàn)［4］及試劑盒說明。

1.4細(xì)胞表面分化抗原（CD）測(cè)定 在反應(yīng)管中加入相應(yīng)抗體，再加入肝素抗凝全血100μl，旋渦震蕩器混勻，室溫孵育20min，經(jīng)immune-proper儀處理紅細(xì)胞后，采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)［5］。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（x±s） 表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組IL-4和IL-6因子水平測(cè)定結(jié)果 見表1。

表1　兩組IL-4和IL-6因子水平測(cè)定結(jié)果（x±s）

2.2兩組外周血淋巴細(xì)胞CD抗原測(cè)定結(jié)果 見表2。

表2　兩組外周血淋巴細(xì)胞CD抗原測(cè)定結(jié)果（x±s）

3　討論

鑒于近年對(duì)RA發(fā)病機(jī)理的研究發(fā)現(xiàn)，類風(fēng)濕因子（RF）的產(chǎn)生與細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)緊密相關(guān)，從而對(duì)通常所認(rèn)為的RA多發(fā)性關(guān)節(jié)炎是由RF引起的觀點(diǎn)值得進(jìn)一步探討，因而更能說明研究RA細(xì)胞免疫狀況對(duì)理解其發(fā)病機(jī)制有著重要意義。研究表明，體內(nèi)自身反應(yīng)性T細(xì)胞直接與疾病發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，CD8+/ CD28-T細(xì)胞、CD4+、CD25+T細(xì)胞在控制自身免疫反應(yīng)及維持免疫耐受方面起著關(guān)鍵作用。CD4+、CD25+T細(xì)胞可以控制機(jī)體損傷后的免疫反應(yīng)，如果機(jī)體內(nèi)CD4+、CD25+T細(xì)胞缺失將導(dǎo)致自身免疫性疾病的發(fā)生［6，7］。CD8+/CD28-細(xì)胞水平明顯低于對(duì)照組，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；CD25+和CD19+細(xì)胞水平高于對(duì)照組，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。觀察組CD8+/CD28-水平顯著低于對(duì)照組（P＜0.01）。CD3是成熟T細(xì)胞的標(biāo)志，CD3+細(xì)胞水平反映了總T淋巴細(xì)胞的水平；CD4是T輔助-誘導(dǎo)細(xì)胞（Th-Ti）的標(biāo)志，其具有輔助T細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)樾?yīng)T細(xì)胞、B細(xì)胞生成抗體及巨噬細(xì)胞活化等作用。CD25為IL-2受體，是活化T細(xì)胞的標(biāo)志。CD19是B細(xì)胞的標(biāo)志，CD19+細(xì)胞水平反映總B細(xì)胞的水平。之所以會(huì)產(chǎn)生具有病理損傷作用的RF，是由于Ts數(shù)量明顯減少，從而導(dǎo)致Th細(xì)胞功能的相對(duì)亢進(jìn)和活化T細(xì)胞的增加，使T細(xì)胞對(duì)B細(xì)胞的調(diào)節(jié)失控，B細(xì)胞的分化和增殖活躍的結(jié)果。有研究表明［8］，Th細(xì)胞按產(chǎn)生細(xì)胞因子的不同而分為Th1和Th2，Th1細(xì)胞以表達(dá)IL-2和干擾素（IFN）r為主，介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答；Th2細(xì)胞主要表達(dá)IL-4、IL-6和IL-10，介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答。由此可以證明，造成產(chǎn)生RF B細(xì)胞增殖的原因是由于RA患者外周血Th2細(xì)胞的激活。另外，由于IL-4和IL-6有多種細(xì)胞來源，因此，對(duì)于是否由于RA患者巨噬細(xì)胞的激活產(chǎn)生IL-4和IL-6，使其血漿水平增高的可能，還有待進(jìn)一步研究。

RA是一種常見、高發(fā)病率的疾病，其在短期內(nèi)對(duì)生命雖無較大威脅，但給人們的生活和工作帶來損害，RA為體液免疫和細(xì)胞免疫同時(shí)紊亂的自身免疫性疾病，這不僅有助于闡明自身免疫病的發(fā)病機(jī)制，而且有可能為治療自身免疫病提供新方法，通過調(diào)節(jié)過強(qiáng)的細(xì)胞免疫或體液免疫，達(dá)到治療自身免疫病的目的。綜上所述，鑒于體內(nèi)輔助性T細(xì)胞亞群Th1和Th2的平衡狀態(tài)直接影響著腫瘤和自身免疫性疾病的發(fā)生、發(fā)展，可以通過阻斷Th2細(xì)胞的過度激活，繼而改變機(jī)體Th1和Th2的平衡狀態(tài)，以達(dá)到治療RA患者的目的。

1 Ziff M.Rheumatoid arthritis-its present and future . J Rheumatol，1990，17（2）：127～133.

2 毋小玉，劉占舉，董中升.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患兒關(guān)節(jié)滑液和外周血上皮嗜中性粒細(xì)胞激活肽水平變化.實(shí)用兒科臨床雜志，2006，21（21）：1478～1479.

3 Muller-Ladner U，Pap T，Gay RE，et al.Mechanisms of disease： the molecular and cellular basis of joint destruction in rheumatoid arthritis. Nat Clin Pract Rhuematol，2005，1（2）：102～110.

4 魏海明，劉杰，田志剛.檢測(cè)Th1/Th2亞群的臨床意義.中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，1998，21（1）：56～59.

5 黃健，沈永聲，王秀英.流式細(xì)胞儀測(cè)定人外周血淋巴細(xì)胞亞型.中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，1998，21（2）：98.

6 Rizzello V， Liuzzo G， Brugaletta S，et al. Modulation of CD4+CD28null T lymphocytes by tumor necrosis factor-alpha blockade in patients with unstable angina. Circulation，2006，113（19） ： 22～27.

7 Murphy TJ，Choileain NN，ZangY，et al.CD4+CD25+regulatory T cells control innate immune reactivity after injury.J Immunol，2005，174（5）：2957～2963.

8 趙武述.輔助性T細(xì)胞亞群的研究及其臨床意義.中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)志，1998，21（1）：7～9.

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