柳氮磺胺吡啶及美沙拉嗪對潰瘍性結腸炎結腸黏膜Reg ⅠV蛋白表達的影響及意義

朱春霞　秦麗君★

柳氮磺胺吡啶及美沙拉嗪對潰瘍性結腸炎結腸黏膜Reg ⅠV蛋白表達的影響及意義

朱春霞秦麗君★

目的 探討柳氮磺吡啶（SASP）及美沙拉嗪對潰瘍性結腸炎結腸黏膜Reg ⅠV蛋白表達的影響及意義。方法 收集潰瘍性結腸炎患者60例，分成SASP組（A組）和美沙拉嗪組（B組），隨訪及治療8周后復查腸鏡及黏膜活檢，通過RT-PCR、免疫組化檢測Reg Ⅳ表達水平。結果 RT-PCR、免疫組化結果提示Reg Ⅳ在兩組治療前表達差異無統計學意義（P＞0.05）；治療后兩組表達均明顯下降，差異有統計學意義（P＜0.05）；美沙拉嗪組下降水平＞SASP組（P＜0.05）；Reg ⅠV表達水平與潰瘍性結腸炎活動度呈正相關（r=0.872，P＜0.001）。結論 美沙拉嗪較柳氮磺胺吡啶對Reg Ⅳ有更強的抑制作用。

潰瘍性結腸炎 Reg Ⅳ 柳氮磺胺吡啶 美沙拉嗪

潰瘍性結腸炎（Ulcerative colitis，UC）是一種病因尚不清楚的直腸和結腸慢性非特異炎癥性疾病，癌變是其嚴重的并發癥之一。國外有報道起病20年和30年后癌變率分別為7.2%和16.5%，雖然潰瘍性結腸炎相關癌（UC-CRC）只占所有結腸癌的1%～2%，但是卻占UC患者死亡原因的10%～15%［1］。再生基因IV（Reg Ⅳ）是鈣依賴的植物血凝素超家族成員之一，于2001首次從炎癥性腸病患者中被分離［2］，是消化系統腫瘤發生的早期標志物。作者通過檢測UC患者分別應用SASP及美沙拉嗪治療前后結腸黏膜中Reg IV蛋白表達水平，分析其表達水平變化的情況，探討兩者對結腸黏膜中Reg IV蛋白的表達方面是否存在差異。報道如下。

1　臨床資料

1.1一般資料 選取2011年1月至2014年1月在本院消化內科門診和住院患者60例，征求受檢者同意后，經結腸鏡及組織病理學檢查確診，并同意隨訪及8周后復查腸鏡及病理學檢查；均選擇輕、中型UC患者，初發型、慢性復發型及慢性持續型均可，需處活動期，即疾病活動指數（DAI）≥3（采用改良型Mayo評分評價潰瘍性結腸炎活動指數）。隨機分為A組和B組，二組年齡、性別、病程等一般情況差異無統計學意義，具有可比性。排除標準：（1）有嚴重心、肝、腎等重要臟器和血液、內分泌系統疾病者。（2）有活動性胃、十二指腸潰瘍者。（3）消化道腫瘤者。（4）有腸道切除手術者。（5）孕婦、哺乳期婦女。（6）有水楊酸制劑及磺胺類藥物過敏或過敏體質者。（7）精神病患者。所有患者必須停用一切影響UC的藥物≥1周（包括激素、SASP、中藥等）。

1.2方法 （1）藥物治療：A組：予SASP腸溶片（山西三九同達公司）1.0，口服，4次/d，療程8周。B組：予美沙拉嗪腸溶片（愛的發制藥公司）1.0口服，4次/d，療程8周。（2）熒光定量PCT（RT-PCR）：將腸黏膜組織標本用液氮研磨成粉末后，加1ml TRIZOL（BBI）抽提Total RNA，采用NanoDrop? ND-2000測定RNA濃度和純度，根據RNA濃度結果將各組調成一致的濃度，再應用RT試劑（Takara）將RNA逆轉錄成cDNA。定量PCR引物如下：GAPDH正義鏈：5'-TCAACGACCACTTTGTCAAGCTCA-3'，反義鏈：5'-GCTGGTGGTCCAGGGGTCTTACT-3'；Reg IV正義鏈：5'-CTGCTCCTATTGCTGAGCTG-3'，反義鏈：5'-GGACTTGTGGTAAAACCATCCAG-3'。定量PCR反應條件：95℃預熱2min，95℃解鏈10s，擴增：40循環95℃/10s，60℃/34 s，72 ℃/15 s；擴增反應結束后，按95℃/10s；60℃/60s；95℃/15s的反應條件建立PCR產物熔解曲線；數據采用2-△△CT法進行分析。（3）免疫組化：兩組均進行免疫組化SABC染色。一抗工作濃度為1 ∶ 50～1 ∶ 100?？乖瓱嵝迯?，UEF顯色，蘇木精復染。所有切片均進行HE常規染色。以上步驟均按說明書操作，嚴格控制時間及溫度，每次染色設陽性對照，PBS 替代一抗作為陰性對照。由兩名病理科醫師采用盲法獨立判定免疫組化染色的結果。隨機選取5個高倍視野，計數1000個細胞，根據陽性細胞所占比例分為Ⅳ級：陰性（-）：陽性細胞數0%～5%、弱陽性（+）：陽性細胞數6%～25%、陽性（++）：陽性細胞數26%～75%、強陽性（+++）：陽性細胞數＞76%。陽性表達率以（++）和（+++）之和占總例數的百分比表示。

1.3統計學方法 采用SPSS16.0軟件。計量資料以（±s）表示，組間比較采用One-Way ANOVA分析，計數資料采用χ2檢驗，Reg IV與潰瘍性結腸炎活動度相關性采用Pearson 相關分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1SASP及美沙拉嗪治療前后Reg Ⅳ的表達情況 治療前，患者腸黏膜Reg ⅣmRNA表達無明顯差異（P＜0.05）；治療后患者腸黏膜Reg Ⅳ表達均低于治療前，差異有統計學意義（P＜0.05），兩組均較治療前明顯下降，差異有統計學意義（P＜0.05）；治療后美沙拉嗪組Reg IV水平下降＞SASP組（P＜0.05）。SASP治療后Reg Ⅳ的表達情況：0（11 例，36.7%），1+（11例，36.7%），2+（8例，26.7%），3+（0例）；而美沙拉嗪治療后Reg IV的表達情況：0（17 例，56.7%），1+（9例，30%），2+（4例，13.3%），3+（0例）。見圖1、2。

圖1　SASP及美沙拉嗪治療前后Reg Ⅳ mRNA的表達情況

圖2　Reg Ⅳ在UC患者中的表達情況

2.2Reg IV與UC活動度之間的關系 Reg Ⅳ在兩組治療前后的變化與CAI指數在兩組治療前后的變化呈正相關（P＜0.01）。治療前，Reg Ⅳ不同染色強度中 CAI 分別為1+（3.75±0.96）、2+（7.16±1.33）和3+（10.63±1.12）；治療后，Reg Ⅳ不同染色強度中CAI 分別為 0+（3.29±1.33）、1+（7.06±1.56）和 2+（8.93±0.92）；強表達Reg Ⅳ的患者CAI 指數較弱表達 Reg Ⅳ患者的明顯升高（P＜0.05）。

3　討論

Reg IV是再生基因家族中的一員，作為一種新發現的基因，其生物學功能尚無明確定論。Reg Ⅳ主要位于胃腸道，包括結腸、小腸、胃和胰腺［3，4］。RegⅣ蛋白是選擇性表達于胰腺和胃腸道上皮的小分子分泌性蛋白，參與消化系統上皮細胞的增殖、再生和炎性、化生反應，并與消化系統腫瘤的發生、發展密切相關。賴明廣等［5］認為Reg IV可作為預測UC活動度的一個獨立指標。在結腸、膽囊及胃等腫瘤組織中均可發現Reg IV蛋白表達水平增高［3，4，6～9］，目前UC已被公認為是大腸癌的危險因素之一，近10年來我國UC的發患者數增加了3倍，預示UC-CRC的風險增加，UC患者患結腸癌的風險每年增加約0.5%～1.0%［10］。因此，指導臨床如何選擇合理有效的治療及預防UC-CRC的發生，從而改善預后、提高UC患者生存質量顯得十分重要。結腸黏膜Reg IV蛋白的檢測已經成為人們探索UC早期發生癌變等病理過程的新手段。根據本資料結果，作者認為美沙拉嗪較SASP能更有效的抑制Reg IV的表達，因此美沙拉嗪較SASP具有更好的化學預防作用，但本次試驗標本量小，有待于進一步探討。

1 Andersen N N，Jess T.Has the risk of colorectal cancer in inflammatory bowel disease decreased？.World J Gastroenterol，2013，19（43）：7561～7568.

2 Hartupee J C，Zhang H，Bonaldo M F，et al.Isolation and characterization of a cDNA encoding a novel member of the human regenerating protein family：Reg IV.Biochim Biophys Acta，2001，1518（3）：287～293.

3 Kuniyasu H，Oue N，Sasahira T，et al.Reg IV enhances peritoneal metastasis in gastric carcinomas.Cell Prolif，2009，42（1）：110～121.

4 Violette S，Festor E，Pandrea-Vasile I，et al.Reg IV， a new member of the regenerating gene family，is overexpressed in colorectal carcinomas.Int J Cancer，2003，103（2）：185～193.

5 賴明廣，張亞歷.RegⅣ在潰瘍性結腸炎中的表達及其對疾病活動度的預測價值.現代消化及介入診療，2010，15（2）：71～73.

6 Tamura H， Ohtsuka M， Washiro M， et al. Reg IV expression and clinicopathologic features of gallbladder carcinoma.Hum Pathol，2009，40（12）： 1686～1692.

7 Gu Z， Rubin M A， Yang Y， et al.Reg IV：a promising marker of hormone refractory metastatic prostate cancer.Clin Cancer Res，2005，11（6）： 2237～2243.

8 Zhao J， Wang J， Wang H， et al.Reg proteins and their roles in inflammation and cancer of the human digestive system.Adv Clin Chem，2013， 61：153～173.

9 Zheng HC，Xu X Y，Yu M，et al.The role of Reg IV gene and its encoding product in gastric carcinogenesis.Hum Pathol，2010，41（1）：59～69.

10 Jess T，Rungoe C，Peyrin-Biroulet L.Risk of colorectal cancer in patients with ulcerative colitis： a meta-analysis of population-based cohort studies.Clin Gastroenterol Hepatol，2012，10（6）：639～645.

Objective To explore the effects of sulfasalzine and mesalazine on the expression of Reg ⅠV in mucosa with ulcerative colitis and its signifi cance. Methods Sixty patients with ulcerative colitis were included in the study，they were randomized in Sulfasalzine and Mesalazine therapy groups，8 weeks after two kinds of therapy，they were undergone colonoscopy examination and mucosa biopsy， Reg ⅠV expression was investigated by RT-PCR and Ⅰmmunohistochemical staining. Results RT-PCR and immunohistochemistrical staining for Reg Ⅳ after the therapy in the mucosa was signifi cantly lower than that before the therapy in ulcerative colitis （P＜0.05）. Mesalazine therapy group signifi cantly decreased Reg ⅠV level than Sulfasalzine therapy group. There was a positive correlation between Reg ⅠV and CAⅠ （the colitis activity index） expression in UC（r = 0.872，P＜0.001）. Conclusion Mesalazine signifi cantly inhibits Reg ⅠV levels than Sulfasalzine.

Ulcerative colitis Reg ⅠV Sulfasalzine Mesalazine

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