奶牛乳房炎病原菌分離鑒定和耐藥性的調查

程霞

摘要：奶牛乳房炎是由于物理、化學、生物等因素引起的乳房炎癥，是奶牛常見病和多發病之一，給奶牛飼養業帶來了巨大的經濟損失。該病可使奶牛泌乳機能受損，生殖機能失調，導致產奶量下降，乳品質量發生改變，延長產后發情和妊娠時間，造成嚴重的經濟損失。本文通過對奶牛乳房炎病原菌分離鑒定和其耐藥程度的調查，可以更好地指導臨床治療工作。進行臨床采集病原菌標本和耐藥性實驗，根本目的是為了防治奶牛乳房炎，促進我國奶制品產業的健康發展。

關鍵詞：奶牛乳房炎；病原菌；耐藥性調查

奶牛乳房炎主要是由微生物引起的一類疾病，物理或化學性損傷也可導致該病發生，它已成為世界奶牛養殖業的主要殺手，導致奶產量減少，乳品質量下降而造成巨大的經濟損失，還會產生嚴重的食品安全問題。掌握奶牛乳房炎致病菌的種類和耐藥性對預防治療工作是至關重要的。

1 材料與方法

1.1 關鍵材料和試劑

培養基：普通營養瓊脂、綿羊鮮血、麥康凱瓊脂、伊紅美藍瓊脂、甘露醇高鹽瓊脂、疊氮鈉血；營養肉湯和各種生物微量鑒定管（購自蘭州榮昌生物制品有限公司）。

試驗試劑：阿莫西林、青霉素、慶大霉素、林可霉素、諾氟沙星、環丙沙星、紅霉素、四環素、恩諾沙星。

1.2 采集乳樣

乳樣的數量是100份，在整個采集過程中注意清潔，采集之前用清水和酒精對乳頭進行消毒，之后對乳頭進行擦拭，擦拭材料應選擇消毒紙。采樣過程中要從第四奶開始采集，大約5～10mL，置于滅菌瓶中在零下20℃的溫度下保存。

實驗試劑：革蘭氏染色試劑，CMT試劑，藥敏紙片。

實驗儀器：恒溫培養箱、高壓滅菌鍋、接種針、L棒、酒精燈、吸管和錐形瓶等。

1.3 分離鑒定病原菌

在兀菌操作下，將普通瓊脂培養基和血液瓊脂培養基進行接種，放置在37℃的條件下約24～48h，選取不同的菌落涂片進行染色檢查，從中分離出鏈球菌的菌株和葡萄球菌的菌株。在菌株培養工作完成后，將檢驗出的菌類進行株菌培養，加入營養湯縮短培養時間，時間在24h之內，再選用合理的試劑進行鑒定，鑒定過程要按照完整的流程，過程保持連續以免發生錯誤，在整個過程中要進行嚴格的兀菌操作，一旦被細菌感染，實驗即兀效。

1.4 耐藥性的實驗

耐藥性可選用較常見的藥物進行測試，這些藥物效果明顯成本較低，比如青霉素類的、糖苷類的和四環素類的等等，具體的測試方法包括3個程序：通過可行的方法來調節菌液的濃度，再將細菌進行涂片來接種，實驗結束后，測量出具體的數據并認真記錄。

2 結果分析

2.1 細菌分離

在100份樣品中查出有91份含有6種病原菌，其中金黃色葡萄球菌占52.78%，表皮葡萄球菌占12.67%，停乳鏈球菌占20.83%，無乳鏈球菌占2.12%，乳房鏈球菌占6.94%，大腸桿菌占2.78%。根據分離和鑒定，總細菌中主要的細菌有金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌以及其他細菌等。

2.2 耐藥性實驗

對復方新諾明有較強耐藥性的菌類：金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、乳房鏈球菌和大腸桿菌；對四環素有較強耐藥性的菌類：金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌；對萬古霉素和青霉素有較強耐藥性的菌類：大腸桿菌和停乳鏈球菌。接種有分離菌落營養肉湯的小白鼠12h后，出現腹瀉，發燒各狀況，精神萎靡，18h后死亡3只，其他沒有太大變化，收集死亡小白鼠肝臟、脾病料，涂片。革蘭氏顯鏡與上述細菌分離生化結果是一樣的。

3 討論

經過本次調查，發現奶牛乳房炎的致病菌種類主要有葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌，其中葡萄球菌46株，站24.8%，鏈球菌100株，占總數的55%，大腸桿菌34株，約占18.4%，其他細菌主要為沙門氏菌和棒狀菌混合感染比較嚴重，這三種菌類的致病因素都與環境衛生質量差有關，因此發生奶牛乳房炎的主要原因是養殖場在飼養和擠奶過程中沒有做好衛生工作。長期以來，人們一直關注如何防止奶牛乳房炎卻沒有考慮到衛生消毒問題。由于長期使用抗生素，養殖場中的細菌有一定的耐藥性，消毒液不能殺死它們。因此，養殖戶們要做好養殖場的衛生工作，保持舍內外清潔，擠奶過程中嚴把消毒關，做到提前預防，早發現，早治療，嚴格控制病情的蔓延。

藥敏實驗表明：分離出的細菌很大部分對環丙沙星、氧氟沙星，左氧沙星有很大的刺激感應，不過對青霉素、紅霉素等卻有很大的耐藥性，由此可見，奶牛市場防治乳房炎的藥物使用有很大的盲目性存在，過度使用青霉素、紅霉素這些抗生素，免疫系統就會出現很大的抗藥性，導致細菌肆意滋生，因此要加強抗生素科學用藥的宣傳。

目前，在奶牛乳房炎的防治過程中，抗生素仍發揮著難以比擬的作用，但它也造成了很大的問題，大量的耐藥性細菌使奶牛的生活環境受到威脅。這就要求在病癥出現時，要采用藥物交叉使用的方法，防止菌體內出現耐藥基因。