8種發(fā)酵床常用菌種的藥敏試驗

袁廳 華利忠 宦海琳 顧洪如 吳敘蘇 邵國青

摘要：為了解各種抗生素對發(fā)酵床益生菌的影響，本研究采用紙片擴散法研究8種發(fā)酵床常用的益生菌單獨培養(yǎng)及混合培養(yǎng)對50種常用抗生素對的敏感性。結(jié)果：單獨培養(yǎng)的多數(shù)益生菌對氯霉素類、氨基糖苷類、喹諾酮類、四環(huán)素類及大環(huán)內(nèi)酯類高度及中度敏感，但對青霉素類、頭孢類以及林可霉素低敏感性或不敏感。混合培養(yǎng)菌對氯霉素類、氨基糖苷類、喹諾酮類、強力霉素、克林霉素高敏感；對四環(huán)素、美滿霉素、林可霉素、阿莫西林、頭孢曲松、頭孢噻肟等中度敏感；對氨芐西林和頭孢唑肟低敏感；對復(fù)方新諾明、多粘霉素B、青霉素、頭孢克肟、頭孢吡肟、頭孢噻吩不敏感。

關(guān)鍵詞：發(fā)酵床；抗生素；藥敏試驗：敏感性

發(fā)酵床養(yǎng)豬是利用發(fā)酵床專用菌種，按一定比例混合鋸末、稻殼等農(nóng)林生產(chǎn)下腳料，通過發(fā)酵床的分解發(fā)酵，使豬糞、尿中的有機物質(zhì)得到充分的分解和轉(zhuǎn)化，從而將豬舍墊料發(fā)酵床演變成微生態(tài)飼料加丁廠，創(chuàng)造一種零排放、兀污染的生態(tài)養(yǎng)豬模式。因此發(fā)酵床養(yǎng)殖最重要的是其中的活性微生物，即益生菌。所以人們普遍認為，發(fā)酵床養(yǎng)豬法豬舍內(nèi)不能使用化學(xué)消毒藥品和抗生素類藥物，否則將殺滅和抑制益生菌，或抑制其繁殖，使得微生物的活性降低。如楊景輝等在富源縣應(yīng)用發(fā)酵床養(yǎng)豬過程中，開展了飼喂含抗生素和不含抗生素飼料、抗生素治療病豬、發(fā)酵床表面消毒、豬群疫苗接種等對發(fā)酵床豬舍溫度影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)含抗生素飼料以及用抗生素治療發(fā)病豬會對發(fā)酵床床體產(chǎn)生影響，但疫苗免疫對其沒有影響。敖梅英等也認為某些抗生素對對墊料中主要益生微生物生長均有不同程度的影響，應(yīng)減少甚至停止使用抗生素作為飼料的添加劑。然而自20世紀(jì)50年代以來，抗生素作為疾病治療劑和動物生長促進劑，發(fā)揮了重大作用。雖然發(fā)酵床養(yǎng)豬可以減少疾病的發(fā)生，卻也不能保證絕不發(fā)病，如不使用抗生素及時治療，也會產(chǎn)生一定的損失。為了解各種抗生素對發(fā)酵床益生菌的影響，本研究采用紙片擴散法研究8種發(fā)酵床常用的益生菌對50種常用抗生素對的敏感性，為發(fā)酵床養(yǎng)豬的臨床用藥提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種所用8種菌株（納豆芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、凝結(jié)芽胞桿菌、假卑孢菌桿菌、蠟樣芽胞桿菌、地衣芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌）由江蘇省農(nóng)科院畜牧所提供。

1.1.2 主要藥敏片所用藥敏試紙片購自杭州微生物試劑有限公司，規(guī)格：直徑6mm，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：WS/T125-1999。

1.1.3 主要試劑及儀器LB液體培養(yǎng)基及LB固體培養(yǎng)基由實驗室自配。超凈工作臺，恒溫培養(yǎng)箱。

1.2 方法

1.2.1 細菌培養(yǎng)江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧所提供上述8益生菌，LB培養(yǎng)基復(fù)蘇后，每種菌株挑取若干克隆配成0.5麥?zhǔn)蠁挝粷舛鹊膽覞嵋海?00μL/塊平板（直徑90mm）的量均勻涂布LB瓊脂平板。同時，取上述8種0.5麥?zhǔn)蠁挝粷舛鹊木焊?mL，混合均勻成一個混合菌，再按500μL/塊平板涂布LB瓊脂平板作為混合菌樣本。

1.2.2 藥敏試驗采用紙片擴散法，細菌涂布好后，立即將紙片置于單獨接種上述8種芽孢桿菌以及接種混合菌的LB瓊脂平板上，每個培養(yǎng)皿中放五個藥敏片，置于37℃溫箱中培養(yǎng)。24h后，分度值為1mm的刻度尺量取抑菌圈的直徑，根據(jù)藥敏試驗判斷標(biāo)準(zhǔn)書，確定該菌對不同藥物的敏感程度。如有些抑菌圈過大，無法量取抑菌圈大小，則重復(fù)上述實驗，但將培養(yǎng)皿中的藥敏片降為1個。

2 結(jié)果

2.1 8 種益生菌及其混合菌的藥敏試驗結(jié)果

采用50種抗生素對8種益生菌株進行藥敏試驗，測量抑菌圈直徑，計算平均值。結(jié)果表明見表1。由表1可知，多數(shù)益生菌對多數(shù)抗生素（氯霉素類、氨基糖苷類、喹諾酮類、四環(huán)素類及大環(huán)內(nèi)酯類）高度及中度敏感，但對青霉素類，頭孢類以及林可霉素低敏感性或不敏感。

2.2 抗生素對8種益生菌敏感數(shù)統(tǒng)計

按敏感性統(tǒng)計各抗生素，發(fā)現(xiàn)混合培養(yǎng)菌對氯霉素類、氨基糖苷類、喹諾酮類、強力霉素，克林霉素高敏感；對四環(huán)素、美滿霉素、林可霉素、阿莫西林、頭孢曲松、頭孢噻肟等中度敏感；對氨芐西林和頭孢唑肟低敏感；對復(fù)方新諾明、多黏霉素B、青霉素、頭孢克肟、頭孢吡肟、頭孢噻吩不敏感（表2）。

3 討論

據(jù)發(fā)酵床的微生物作用原理，有益微生物及其產(chǎn)生的有益因子，在豬拱掘采食后，改善豬腸道菌群，大大降低腸道疾病的發(fā)病率。且由于發(fā)酵床養(yǎng)殖豬舍由于發(fā)酵床體中有益菌群發(fā)酵糞便，抑制了腐敗菌等有害微生物的繁殖和有害氣體的產(chǎn)生，從而減少空氣中氣載微生物的含量，對豬舍內(nèi)空氣環(huán)境的改善有一定積極的影響，但是仍然有潛在的危險，仍需要加強對某些細菌、病毒以及寄生蟲的防控。所以抗生素的使用成為發(fā)酵床養(yǎng)豬法的爭論的主要焦點之一。何鑫等利用益生菌高敏感的泰樂菌素和氟苯尼考，進行抗生素預(yù)防和治療用量對發(fā)酵床床體的影響，發(fā)現(xiàn)在發(fā)酵床養(yǎng)殖過程中不是絕對不能使用抗生素類藥物，而是要看其使用量是否合適。適當(dāng)?shù)乃幬锸褂檬强尚械模绻i群本身健康狀況較差，則不一定適合在發(fā)酵床上進行長期用藥治療。說明發(fā)酵床益生菌敏感抗生素的使用需要把握藥量，但該研究中的藥物種類較少，也沒有篩選出益生菌不敏感或低敏感的藥物。本研究通過紙片擴散法研究8種發(fā)酵床中常用的益生菌對50種常用抗生素的敏感性，發(fā)現(xiàn)這些益生菌對青霉素類、頭孢菌素類、林可霉素及多黏霉素B的敏感性較低，甚至不敏感，適合于發(fā)酵床應(yīng)用，在用藥方案制定中可不考慮對床體益生菌的影響，但其余敏感藥物并不是一定不能用于發(fā)酵床，而是要注意用藥方案的把握，尤其是用藥量及用藥過程的控制，避免藥物影響益生菌的生長繁殖。此外曾艷等發(fā)現(xiàn)一些中藥如蒲公英、茵陳、魚腥草等對枯草芽孢桿菌、高溫放線菌及產(chǎn)朊假絲酵母均無抑制作用，可選擇這些中草藥防治大腸桿菌及金黃色葡萄球菌。

由于疫苗免疫對發(fā)酵床床體沒有影響，所以疫苗免疫是發(fā)酵床養(yǎng)豬模式下疫病防控的關(guān)鍵。華利忠等通過連續(xù)2年的流行病學(xué)調(diào)查對比了阜寧縣發(fā)酵床和水沖圈模式下豬瘟，豬藍耳病及豬口蹄疫血清抗體的差異，發(fā)現(xiàn)發(fā)酵床模式下豬藍耳抗體陽性率比傳統(tǒng)水沖圈高，這可能與發(fā)酵床能提高豬的免疫力有關(guān)。所以要根據(jù)本場或本地區(qū)疫病流行情況，制訂合理的免疫程序，選擇質(zhì)量合格的疫苗，并且嚴格按照疫苗接種的使用說明、操作步驟，科學(xué)地接種疫苗。