4種梅毒血清學檢測方法的臨床應用及評價

王佳 王媛

【摘要】 目的 探究4種梅毒血清學檢測方法的臨床應用效果。 方法 2013年12月-2014年12月我院所有送檢的1000例標本用TP - ELISA法篩查，其中47例陽性標本同時進行 TPPA 、RPR，TP-AD的檢測。 結果 1000例標本首先用TP - ELISA法進行檢測，檢出陽性標本47例，檢出率為4.7%。 以TPPA檢測的結果與RPR法和TP-AD進行比較，TP-AD與TPPA比較差異無統計學意義（P>0.05），TPPA法與RPR法比較差異有統計學意義（P<0.01）。 結論 建議4種方法的檢測順序為，ELISA試驗進行初篩，陽性標本用TP-AD比對，根據需要再進一步做TPPA與RPR進行確診和病程監(jiān)測。

【關鍵詞】梅毒血清學；檢測方法；臨床應用；評價

【中圖分類號】R759.1 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2015）03-0596-02

梅毒是由蒼白螺旋體引起的一種性傳播疾病，具有高度的傳染性和致病性。所以選擇簡單、快速、準確的檢測方法對該病的早期診斷及疾病控制有著重要意義[1]。本研究對臨床常用的梅毒酶聯免疫吸附試驗（TP - ELISA）、 TPPA 、RPR和梅毒螺旋體抗體檢測-乳膠法（TP -AD）4種方法進行比較，現將研究結果總結如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源：標本均來自于2013年12月-2014年12月我院1000例門診與住院患者，包括了行體檢的健康孕、產婦的人群。

1.2 儀器：DNM960Z-G酶標儀，DEM-3自動洗板機。

1.3 試劑：TP - ELISA試劑盒由廈門英科新創(chuàng)科技有限公司生產，TPPA試劑盒由日本富士瑞必歐株式會社生產，RPR試劑盒由上海榮盛生物技術有限公司生產，TP -AD試劑盒由杭州艾博生物醫(yī)藥有限公司生產。

1.4 檢驗方法：所有送檢的1000例標本用TP - ELISA法篩查，其中47例陽性標本同時進行 TPPA 、RPR、TP-AD的檢測。（1）TP - ELISA：為雙抗原夾心一步法用DNM960Z -G酶標儀檢測， 標本A 值≥cut off值為陽性。（2）TPPA：取待測血清 25ul加入標本稀釋液100ul，混勻備用，使用特定的微孔板，先在選定孔中每孔加入25ul稀釋液，加入標本混合液行倍比稀釋（1：2 、1：4、1：8、1：16 、1：32稀釋），另設一孔作為對照孔僅加入50ul稀釋液，再在每孔包括對照中加入TPPA試劑 25ul，充分混勻后于室溫15℃-15℃封閉靜置2h后觀察結果。每批標本操作時應同時取陰陽性質控按同樣方法同時檢測以保證結果可靠。（3）RPR：在卡片規(guī)定的圓圈內加入50ul待測血清，用專用針頭和滴管加抗原懸液1滴，轉動卡片8min。出現黑色凝集為陽性。可按需以樣本稀釋液或無菌生理鹽水作樣本1：2 、1：4、1：8、1：16 、1：32稀釋后再行檢測以作半定量報告。（4）TP -AD：將試劑置于平坦的臺面上，垂直滴加2滴標本置于加樣區(qū)，再加1滴緩沖液，同時計時，等待紅色帶出現，10-30min內判斷。具體操作方法嚴格按照各個試劑盒的要求進行，標準的判斷也依據試劑盒提供的標準進行判斷。

1.5 統計學方法：以TPPA的結果與 RPR和TP-AD的結果進行比較，采用卡方檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。乳膠法P>0.05為差異無統計學意義，RPR法 P<0.01為差異有統計學意義。

2 結果 1000例標本首先用TP - ELISA法進行檢測，檢出陽性標本47例，檢出率為4.7%。 檢出的47例陽性標本同時做TPPA和 RPR 、TP-AD的檢測，結果TPPA陽性46例，符合率97.87% ，RPR檢出陽性23例，符合率48.93%。TP-AD出陽性45例，符合率95.74%。以TPPA檢測的結果與RPR法和TP-AD進行比較，經過統計學處理，TP-AD與TPPA比較差異無統計學意義（χ2=2.168，P>0.05），TPPA法與RPR法比較差異有統計學意義（χ2=87.679，P<0.01）。詳見表1。

表1 陽性標本的幾種方法檢測結果比較

3 討論

在本研究中，1000例標本采用用TP - ELISA法進行檢測，檢出陽性標本47例，檢出率為4.7%，低于徐曉琴等[2]報道的6.07%，推測結果的差異性在于與浙江等沿海地區(qū)相比，四川瀘州地區(qū)處于內陸地區(qū)，其經濟大大落后于浙江，且標本中部分是孕、產婦及健康人群的體檢標本，因此發(fā)生率偏低。

本研究采用的檢測方法中，TPPA具有高靈敏度、高特異性、高準確度的特點，但由于操作較繁雜，試劑較昂貴，結果判斷不易自動化，因而受限于醫(yī)院大規(guī)模的篩查檢測，適用于作為確診試驗。TP-AD用于定性檢測人全血、血清和血漿樣本中的梅毒螺旋體抗體，是特異性抗體的檢測。該法采用高特異性抗原抗體反應原理及乳膠標記免疫層析分析技術， 操作簡單、方便，檢測結果出現快速、準確。RPR在梅毒螺旋體感染的不同時期檢出率差別較大，在梅毒感染的最初4周內，由于機體產生的反應素量不足，一般為陰性，不易被RPR法檢出。因此，在本研究中，TP-AD與TPPA比較差異無統計學意義（P>0.05），TPPA法與RPR法比較差異有統計學意義（P<0.01）。

綜上可知，結合上面的分析，4種方法各有所長[3]。TP - ELISA靈敏度高，特異性好，適用于大批量的篩查工作，TPPA特異性高、準確性好，被公認為確診試驗，RPR干擾因素多及病程對其有影響較大，適用于病程監(jiān)測及療效觀察。TP-AD操作簡單，不需特殊儀器，可作為定性試驗及方法的比對。建議4種方法的檢測順序為：ELISA試驗進行初篩，陽性標本用TP-AD比對，根據需要再進一步做TPPA與RPR進行確診和病程監(jiān)測。

參考文獻

[1]顧偉鳴，楊陽，吳磊等.梅毒血清學試劑性能評估方案的優(yōu)化及應用[J].檢驗醫(yī)學，2014，（11）：1169-1174.

[2]徐曉琴，傅更鋒，張之等.梅毒血清學陰性者性行為特征和梅毒血清學復核結果分析[J].中國麻風皮膚病雜志，2013，29（10）：669-670.

[3]武強，王妹芳，張群峰等.梅毒血清學新篩查模式的可行性評價[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2012，22（17）：3770-3771，379病例報告2015年第3期2015年第3期