BMP—7抑制H22荷瘤小鼠腫瘤組織PCNA表達并上調E—cadherin的表達

潘玉　丁芹　王莉娜　宋正霞　顏學兵

[摘要] 目的 探討骨形態發生蛋白-7（bone morphogenetic protein-7， BMP-7）對H22荷瘤小鼠的抑制作用。 方法 該實驗時間為2014年9月—2015年1月，選擇清潔級昆明小鼠建立H22荷瘤小鼠模型，隨機分成3組：生理鹽水組、環磷酰胺組、BMP-7組。HE染色觀察腫瘤組織病理學變化；免疫組織化學法檢測腫瘤組織內增殖細胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen， PCNA）的表達；逆轉錄-PCR檢測組織內E-cadherin的表達。 結果 HE染色顯示BMP-7組有大片壞死，有明顯的核碎裂、核溶解；環磷酰胺組細胞排列疏松，核質比例減小，瘤內有大片壞死。免疫組化顯示BMP-7及環磷酰胺組PCNA的表達均低于生理鹽水組 （F=34.78， P<0.05）。逆轉錄-PCR顯示環磷酰胺組E-cadherin的表達最高，其次是BMP-7組，生理鹽水組最低 （F=7.63，P<0.05）。 結論 BMP-7能下調H22荷瘤小鼠PCNA表達，并有上調E-cadherin表達的趨勢。

[關鍵詞] H22細胞；肝癌模型；BMP-7；PCNA

[中圖分類號] R285.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2015）09（b）-0007-03

[Abstract] Objective To investigate the inhibitory effect of bone morphogenetic protein-7（BMP-7） on H22 tumor-bearing mice. Methods The experiment time is from September 2014 to January 2015. H22 tumor bearing mice model was established， and randomly divided into 3 groups： normal saline group， cyclophosphamide group and the BMP-7 group. The pathological histomorphology of transplanted tumor was observed under a light microscope after hematoxylin-eosin （HE） staining. The expressions of proliferating cell nuclear antigen （PCNA） were detected by immunohistochemistry. The expressions of alpha smooth muscle actin （alpha-SMA）， E-cadherin were detected by reverse transcription-PCR. Results It was found that BMP-7 group had large areas of necrosis and obvious karyorrhexis and karyolysis. The tumor cells of cyclophosphamide group arranged loosely， nucleo cytoplasmic ratio decreased， and the tumor tissue had large areas of necrosis. It was found that the expressions of PCNA in BMP-7 group and cyclophosphamide group were lower than those in normal saline group， the differences were statistically significant （F=34.78， P<0.05） by the immunohistochemistry. The expression of E-cadherin in the cyclophosphamide group was the highest， followed by the BMP-7 group， the normal saline group was the lowest（F=7.63， P<0.05）. Conclusion BMP-7 can decrease the expression of PCNA in H22 tumor-bearing mice， with the trend of upregulating the expression of E-cadherin.

[Key words] H22 cell； Hepatocellular carcinoma model； BMP-7； PCNA

骨形態發生蛋白-7（bone morphogenetic protein-7，BMP-7）可通過拮抗轉化生長因子-β（transforming growth factor-β， TGF-β）/Smad信號通路發揮抗炎、抗纖維化作用，并有多項研究證實其抗腫瘤作用[1-3]。已有研究顯示[4-5]BMP-7可通過拮抗TGF-β信號通路抗肝纖維化，而肝纖維化是由慢性肝炎發展至肝硬化、肝細胞癌的中間過程，因此BMP-7可能通過拮抗TGF-β信號通路，發揮抗肝細胞癌的作用。該實驗時間為2014年9月—2015年1月。選擇清潔級昆明小鼠建立H22荷瘤小鼠模型，探討BMP-7對H22荷瘤小鼠的抑制作用， 現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 動物及瘤株 清潔級昆明小鼠，雄性，20～26 g，購自徐州醫學院動物中心。小鼠肝癌細胞株H22由山東省醫學科學院藥物研究所腫瘤實驗室惠贈。

1.1.2 主要試劑 重組人BMP-7購自美國Pepro Tech公司，HE染色試劑盒購自江蘇碧云天公司，增殖細胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen， PCNA）一抗購自武漢三鷹生物工程有限公司，兔超敏二步法免疫組化檢測試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司，TIAN Script cDNA第一鏈合成試劑盒和2×PCR Master MIX購自天根生物科技有限公司。……