白芍總苷治療系統性紅斑狼瘡的療效及對CD11a表達的影響

王 丹王上上

白芍總苷治療系統性紅斑狼瘡的療效及對CD11a表達的影響

王 丹1王上上2

目的： 評價白芍總苷（TGP）治療系統性紅斑狼瘡（SLE）的療效及對CD11a基因表達的影響。方法： 42例SLE患者口服潑尼松0.5～1mg/（kg·d），其中21例加用TGP，1.8 g/d，療程3個月。治療前后進行系統性紅斑狼瘡疾病活動指數（SLEDAI）評分，RT-PCR檢測CD11a表達水平。結果：

系統性紅斑狼瘡； 白芍總苷； SLE疾病活動指數； CD11a

系統性紅斑狼瘡是一種累及全身多個系統的自身免疫性疾病，多見于年輕女性，發病機制尚不明確，臨床表現復雜多樣，病程遷延反復。目前對SLE的常規治療主要還是糖皮質激素和免疫抑制劑為主，但其諸多毒副作用限制了其臨床使用。白芍總苷是一種新型的雙向免疫調節劑，目前已經應用于類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡、銀屑病等的治療，但其對系統性紅斑狼瘡的治療研究較少，尚缺乏較嚴格的臨床對照研究。本研究選擇臨床確診的SLE患者，在常規治療的基礎上加用白芍總苷（TGP），探討TGP對SLE患者SLEDAI的影響、毒副作用及對細胞因子的表達的影響，為TGP進一步應用于臨床治療提供研究基礎。

1　對象與方法

1.1病例選擇及用藥方法 42例SLE患者均為我院門診及住院患者中首次就診或未經治療復發的患者，排除感染及有關合并癥，所有病例均符合2009年系統性紅斑狼瘡國際合作臨床中心（SLICC）修訂的SLE診斷標準，其中女36例，男6例，將其隨機分為兩組，每組21例，對照組采用臨床常規治療方法，試驗組采用臨床常規治療方法加用TGP治療。常規用藥：據病情活動性及年齡、體重，給予潑尼松0.5～l mg/（kg·d）口服或相當于上述劑量的甲潑尼龍口服。病情活動控制后按每周遞減10%的速度減量。若患者在治療過程中出現不良反應時將給予相應的對癥處理。試驗用藥：白芍總苷（TGP，商品名帕夫林，深圳朗生醫藥公司生產）服藥劑量為0.6 g/次，日3次，療程3個月。

分別于治療前、治療后1個月、3個月根據SLE疾病活動指數對患者進行評分，并晨起空腹抽外周靜脈血，Ficoll淋巴細胞分離液分離PBMC，-80℃ 保存備用。

1.2Realtime-PCR檢測CD11a基因的表達 采用Trizol Reagent（Invitrogen公司）提取細胞RNA，用紫外分光光度計測定RNA濃度及純度，用凝膠電泳法檢測RNA的完整性。使用Takara公司的反轉錄試劑盒將RNA反轉錄成cDNA。以β-actin為管家基因，引物由上海生工生物工程技術服務有限公司合成，引物序列為：β-actin：上游引物：5'-ACCCAGATCATGTTTGAGACC-3'，下游引物：5'-AGGGCATACCCCTCGTAGA-3'，擴增片段長度155 bp；CD11a：上游引物：5'-AAACGGAAGGACCCTGATGCTC-3'，下游引物：5'-TGTAGCGGATGATGTCTTTGGC-3'，擴增片段長度211 bp。使用Takara公司的SYBR試劑進行實時定量PCR反應，采用7500 Real Time PCR System（ABI公司）進行產物擴增及結果分析。反應體系如下：SYBR Premix Ex Taq 10μL，上游引物0.4μL，下游引物0.4μL，DNA模板2μL，滅菌雙蒸水7.2μL。PCR循環條件設置：95℃變性30 s后，95℃ 15 s，58℃20 s，72℃ 15 s擴增45個循環。在實時熒光定量PCR儀上讀取擴增曲線、熔解曲線和Ct值。重復3次實驗，結果取均值，用2-△△Ct法計算目的基因和內參基因的表達相對值。

1.3統計學方法 數據用SPSS 14.0軟件進行處理，采用T檢驗、卡方檢驗等統計學方法比較試驗組與對照組SLEDAI的變化水平、PBMC中CD11a基因表達的差異以及不良反應發生率，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2　結果

2.1一般情況比較 患者性別構成兩組相同，試驗組（糖皮質激素+TGP）與對照組（糖皮質激素）平均年齡分別為27.34±7.65歲和29.28±8.95歲，兩組相比無顯著差異（P＞0.05）。

2.2兩組患者治療前后SLEDAI評分的變化 結果見表1。治療前兩組SLEDAI評分無明顯差別，治療后1個月其SLEDAI降低水平仍無明顯差異，治療后3個月試驗組SLEDAI明顯低于對照組（P＜0.05）。

表1　SLE患者治療前后SLEDAI評分比較

2.3兩組患者治療前后外周血單個核細胞CD11a的表達變化及與SLEDAI的相關關系 使用Realtime-PCR方法檢測CD11a基因的mRNA表達水平，結果見表2，治療前兩組CD11a的表達水平無明顯差異，治療后，1個月兩組均較治療前明顯降低，但其降低水平無明顯差異，治療后3個月試驗組CD11a的表達水平明顯低于對照組（P＜0.05）。

表2　各組外周血單個核細胞的CD11a的表達水平

對42例SLE患者治療前SLEDAI評分及CD11a的表達水平進行相關分析，發現CD11a的表達水平與患者SLEDAI評分呈正相關（r=0.506，P＜0.05），見圖1。

圖1　SLE患者CD11a的表達水平與SLEDAI之間的相關關系

2.4兩組患者不良反應發生情況 試驗組有5例出現腹瀉，大便3～5次/d，其中1例伴有腹痛，便后可緩解，藥物減量或停藥后癥狀消失。兩組患者不良反應發生情況，見表3，其不良反應發生率無顯著性差異（χ2=0.864，P=0.35＞0.05）。但試驗組腹瀉發生率明顯高于對照組。

表3　各組患者不良反應發生情況

3　討論

SLE是一種反復發作、可導致多種器官損害的自身免疫性結締組織病，其免疫學特征是大量自身抗體的產生和伴隨T細胞減少的自身反應性淋巴細胞的增多，結果導致體內大量致病性自身抗體和免疫復合物的產生，引起多器官的損傷。因SLE存在多種免疫調節功能的異常，因此免疫調節是臨床治療SLE的重要手段。

白芍為毛茛科植物芍藥的干燥根，有養血柔肝、斂陰收汗、益氣止痹通絡的作用，是風濕免疫性疾病、肝炎、肝硬化等疾病治療的重要組方之一，受到醫藥學界的廣泛重視。白芍總苷是由植物芍藥根中提取的一組糖苷類物質，包括芍藥苷、羥基芍藥苷、芍藥花苷、芍藥內酯苷、苯甲酰芍藥苷，統稱為白芍總苷，其中芍藥苷占總苷量的90%以上，是白芍的主要有效成分，藥理及臨床研究發現白芍總苷具有抑制和調節免疫反應、抗炎、止痛等作用，它能夠調節Th/Ts細胞比值1、腫瘤壞死因子的分泌，2還有研究認為TGP參與某些細胞信號傳導通路的調節。3目前在類風濕關節炎、干燥綜合征等疾病中TGP已經得到較多的應用，但其在SLE的治療方面的研究較少，本研究通過在SLE的常規治療基礎上加用TGP，研究其對SLE疾病活動指數及細胞因子表達方面的影響，同時觀察其臨床副反應，為其在SLE的治療方面提供研究證據。

SLEDAI包括9個器官系統的24項臨床指標，經統計學處理，不同指標計分不同，可能的最高分為105分，分數越高，活動性越高。SLEDAI臨床操作較為簡單，敏感性和特異性均超過90%，是我國目前使用最廣泛的SLE臨床評價指標。我們通過對治療前及治療后SLEDAI的評分發現無論試驗組還是對照組，其SLEDAI均較治療前顯著降低，治療1個月時試驗組與對照組相比其降低水平無明顯差異，而3個月療程結束時其評分明顯較對照組為低，尤其在關節癥狀及外周血象的改善方面，試驗組明顯優于對照組。在不良反應的發生方面，試驗組與對照組未見明顯差異，且不良反應多較輕微，均可耐受。但白芍總苷對胃腸道有一定的刺激，故試驗組腹瀉的發生率明顯增加，藥物減量或停藥后癥狀緩解。對照組出現1例轉氨酶升高患者，經對癥治療后好轉。可見白芍總苷在SLE輔助治療方面有著較好的有效性及安全性，具有良好的應用前景。

CD11a與CD18共同組成淋巴細胞功能相關抗原-1（LFA-1）分子，LFA-1對白細胞和內皮細胞的黏附起關鍵的作用，參與T細胞的激活，其過度表達可以引起自身免疫反應。CD11a過度表達所誘發形成的自身反應性T細胞可在小鼠體內誘發狼瘡樣疾病，而采用抗鼠CD11a單克隆抗體治療狼瘡鼠可減少其自身抗體的產生，阻抑自身免疫反應的發展，緩解狼瘡腎炎的癥狀；4張耀華等5研究發現，SLE患者CD11a的表達水平與SLEDAI呈正相關，這與本試驗結果一致。由此可見，在SLE的發生發展過程中，CD11a的過度表達起著不容忽視的作用。本研究通過對SLE患者外周血單個核細胞CD11a表達水平的研究，發現試驗組與對照組在經過治療后CD11a表達水平均明顯降低，且療程結束時試驗組CD11a表達水平亦顯著低于對照組，可見白芍總苷在對細胞因子的調節方面也有著較好的作用。

白芍總苷可在多個環節影響細胞免疫、體液免疫以及炎癥過程，具有明顯的抗炎及免疫調節作用，其可抑制PGE2的表達，調節Th1/Th2平衡，6抑制B細胞的增殖，下調TNF-α、IL-28的表達水平以及抑制NF-κB的活化等，7并可以通過調節基因甲基化水平調控基因表達，8臨床已用于治療類風濕性關節炎、SLE、銀屑病等免疫相關性疾病，9亦有使用白芍總苷治療慢性蕁麻疹10及壞死性黃色肉芽腫11成功的報道，其不良反應輕微，耐受性良好，本研究顯示白芍總苷在SLE的治療方面具有較好的臨床作用。SLE的治療通常需長期使用糖皮質激素及免疫抑制劑才能得以控制，但這些藥物由于對血液系統及肝腎等器官的不良反應造成患者無法長期使用，白芍總苷有望在一定程度上改善這一狀況，其不良反應發生率低且輕微，臨床應用安全，在增進療效的同時減少用藥風險，為SLE等免疫相關性疾病的治療提供了新的選擇。

1Xu HM，WeiW，Jia XY，etal.Effects and mechanisms of total glucosides of paeony on adjuvantarthritis in rats.JEthnopharmacology，2007，109（3）：442-448.

2梁小紅.白芍總苷對系統性紅斑狼瘡患者IL-8、TNF-α和IFN-α表達的影響.中國現代藥物應用，2008，2（24）：64-66.

3張晶晶，吳永貴，張培，等.白芍總苷對糖尿病大鼠腎組織p38 MAPK磷酸化與NF-κB表達的影響.安徽醫科大學學報，2008，43（5）：534-537.

4 Sela U，Mauermann N，Hershkoviz R，et al.The inhibition of autoreactive T cell functions by a peptide based on the CDR1 of an anti-DNA autoantibody is via TGF-beta-mediated suppression of LFA-1 and CD44 expression and function.J Immunol，2005，175（11）：7255-7263.

5張耀華，施偉民，徐金華.SLE患者外周血單一核細胞淋巴細胞功能相關抗原1表達的檢測.中華皮膚科雜志，2009，42（4）：259-261.

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7王紅權，詹杰.白芍總苷治療類風濕關節炎藥理作用及機制.醫藥導報，2015，34（2）：199-201.

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（收稿：2015-05-03 修回：2015-06-30）

Therapeutic efficacy of totalglucosides of paeony in the treatmen t of system ic lupus erythematosusand the effects on the levels of CD11a

WANG Dan，WANG Shang-shang.Department ofDermatology，Maternaland Child Care Service Centre，Juye，Heze，274900

Objective：To assess the efficacy of total glucosides of paeony（TGP）in the treatment of systemic lupus erythematosus（SLE）and the effects on the levels of CD11a.Methods：Forty two patientswith SLE were treated withmetacortandracin 0.5～1mg/kg·d，and of them 21 patientswere treated with additional TGP，1.8 g/d for 3months.The system ic lupus erythematosus disease activity index（SLEDAI）was assessed and the level of CD11a was detected by RT-PCR before and after treatment.Results：SLEDAI and the level of CD11a in all patientswere significantly decreased after treatment，especially in the TGP group（P＜0.05）. There was no significant difference in adverse reaction in the patients treated with additional TGP. Conclusion：TGP has an additional therapeutic effect in combination with steroid in the treatment of SLE and does not increase the incidence of adverse reactions.

systemic lupus erythematosus；total glucosides of paeony；SLEDAI；CD11a

1山東省菏澤市巨野縣婦幼保健院皮膚科，274900

2復旦大學附屬華山醫院皮膚科，上海，200040

與治療前相比，患者SLEDAI評分和CD11a基因的表達水平均顯著下降，加用TGP的患者下降更明顯（P＜0.05）。加用TGP患者與未加用患者不良反應發生率無明顯差異。結論： 潑尼松加用TGP能提高治療系統性紅斑狼瘡療效，且不增加不良反應發生率。