某區原因不明復發性流產與遺傳性血凝因素的研究

許麗娜 王仙萍*

（山西省兒童醫院、山西省婦幼保健院輔助生殖中心，山西 太原 030001）

某區原因不明復發性流產與遺傳性血凝因素的研究

許麗娜 王仙萍*

（山西省兒童醫院、山西省婦幼保健院輔助生殖中心，山西 太原 030001）

目的 探討山西地區原因不明復發性流產與凝血因子V基因G1691A、凝血酶原基因G20210A以及5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）基因C677T位點突變的關聯性。方法 采用聚合酶鏈式反應擴增目的基因，并測序進行多態性分析，檢測62例原因不明復發性流產者和83例正常對照組的凝血因子V基因G1691A、凝血酶原G20210A以及MTHFR基因C677T位點突變情況。結果 凝血因子V基因G1691A和凝血酶原基因G20210A在復發性流產者和對照組中均未發現突變；MTHFR C677T 基因型在流產組的分布頻率較對照組明顯升高，二者比較差異有統計學意義（χ2=9.624，P=0.008）。結論 山西地區原因不明復發性流產可能與凝血因子V基因G1691A、凝血酶原G20210A基因突變無關，而MTHFR基因C677T突變可能為復發性流產原因之一。

復發性流產；凝血因子；凝血酶原；亞甲基四氫葉酸還原酶

復發性流產（RSA）指與同一性伴侶連續2次或2次以上在妊娠20周前的胎兒（體質量≤500 g）丟失者。RSA是育齡期婦女的常見病之一，其發病機制復雜，主要包括遺傳因素、解剖因素、內分泌異常、感染因素、免疫紊亂和血栓前狀態等，但除此之外，仍有40%～50%的患者病因不明，臨床上稱之為原因不明復發性流產（URSA）[1]。目前國內外對于凝血因子V基因G1691A、凝血酶原基因G20210A和亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）基因C677T位點突變與原因不明復發性流產相關性的研究較多，但結論不一致。本研究對山西地區復發性流產患者運用聚合酶鏈式反應擴增目的基因，并測序進行多態性分析，研究上述基因位點是否存在突變，并探討其與復發性流產的相關性。

1　資料與方法

1.1病例篩選。RSA組：2013年8月至2014年8月，在我院婦產科及生殖中心門診就診的62例原因不明復發性流產患者，年齡23～35歲，平均年齡29歲。病例組入選標準[2]：①夫婦雙方染色體正常，無家族遺傳病史；②排除生殖器畸形等解剖因素；③排除內分泌系統疾病；④TORCH均為陰性；⑤無靜脈血栓史；⑥抗心磷脂抗體連續3次以上檢查均為陰性（每次檢查間隔4周以上）。對照組：為我院婦產科及生殖中心門診育齡期婦女，共83例，年齡25～36歲，平均年齡30.5歲。至少有1次或1次以上成功妊娠史，而無自然流產、死產、死胎、胎兒宮內生長受限及無血栓性疾病史。

1.2方法

1.2.1DNA抽提：分別從對照組和病例組按照E.Z.N.ATM Blood DNA Kit（Omega，USA）試劑盒說明書提取外周血DNA。

1.2.2P C R擴增：①凝血因子V基因G 1 6 9 1 A引物序列：上游引物5- TCAGGCAGGAACAACACC-3，下游引物5-GTTACTTCAAGGACAAAATACC-TGTAAAGCT- 3；②凝血酶原基因G20210A引物序列：上游引物5- TCTAGAAACAGTTGCCTGGC-3，下游引物5-ATAGCACTGGGAGCATTGAAGC- ；③MTHFR基因C677T引物序列：上游引物5-AGTCCCTGTGGTCTCTTCATC-3，下游引物5-GGAGATCTGGGAAGAACTCAG-3。

表1　MTHFR基因C667T位點基因型頻率及等位基因頻率比較

1.2.3基因多態性測定：Vitrogen公司分別將三種PCR產物進行測序。

1.3統計學分析：所有數據均采用SPSS17.0軟件進行統計學分析，其中計數資料采用卡方檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1凝血因子V基因G1691A：在RSA組和對照組中均未發現凝血因子V基因 G1691A位點存在突變。

2.2凝血酶原基因G20210A：在RSA組和對照組中也均未發現凝血酶原基因G20210A位點有突變。

2.3MTHFR基因C677T位點：在以上兩組中均發現MTHFR基因C667T位點存在C→T突變。其中TT基因型在RSA組中的分布頻率明顯高于對照組，差異有統計學意義（χ2=8.297，P=0.004）。CC基因型在RSA組中的分布頻率明顯低于對照組，差異有統計學意義 （χ2=4.209，P=0.04）。CT基因型在兩組中比較，差異無統計學意義（χ2=2.178，P=0.14）；而T等位基因頻率在RSA組患者中明顯高于對照組，兩組比較差異有統計學意義（χ2=9.831，P=0.002）。詳見表1。

3　討論

目前研究發現復發性流產可能是遺傳因素與環境因素相互作用所致，尋找復發性流產的易感基因，探討其發病機制，是治療和預防的關鍵[3]。現研究已發現[4]，凝血因子V基因G1691A、凝血酶原基因G20210A和MTHFR基因C677T位點等基因突變后導致血凝能力增強，可能引起血栓有關的疾病。而在妊娠期間，血液相對處于高凝狀態，胎盤部位血栓形成會導致流產、胎盤早剝以及妊娠期高血壓疾病等病理妊娠，故高凝因素與復發性流產相關性研究越來越受到重視。

MTHFR基因定位于染色體1P36.3，共有11個外顯子。MTHFR是葉酸依賴性酶，具有遺傳多態性，MTHFR基因C677T多態性可增加酶的熱不穩定性。MTHFR酶缺陷可能導致胚胎停止發育、自然流產發生，從而增加血漿半胱氨酸濃度，引起血管內皮細胞損傷和毒性作用，激活血小板的黏附和聚集能力，導致胎盤血管栓塞性病變，是神經管缺陷及原因不明復發性流產的危險因素。

本研究在RSA組和對照組中均發現MTHFR基因C667T位點存在C→T突變。其中TT基因型在RSA組中的分布頻率明顯高于對照組，T等位基因頻率在RSA組患者中明顯高于對照組，比較均有統計學意義。認為MTHFR C677T突變與RSA相關，其中TT基因型突變明顯增高，提示TT型基因突變可能是RSA發病危險因素之一。

綜上所述，本研究顯示山西地區MTHFR基因C667T位點的突變在RSA患者中明顯升高，可能是RSA發病的危險因素之一。因為MTHFR基因突變引起的葉酸代謝異常有可能導致RSA發生，故孕期適當補充葉酸、維生素B12可能對進一步降低流產率有重要的臨床意義。

[1] 汪希鵬,林其德,洪燕,等.原因不明復發性流產遺傳性血凝因素研究[J].上海交通大學學報,2006,26(12):1361-1364.

[2] 陳惠麗,唐落韻,陳春寶,等.不明原因復發性流產與亞甲基四氫葉酸還原酶及甲硫氰酸合成酶還原酶基因多態性[J].中國優生與遺傳雜志,2013,21(6):29-30.

[3] 徐俐,劉肖曼,張紅巖,等.亞甲基四氫葉酸還原酶、凝血因子V和凝血酶原基因多態性與原因不明復發性早期流產的關系[J].中華婦產科雜志,2007,42(3):180-183.

[4] 宋綠茵,戚潛輝,余達賢,等.同型半胱氨酸代謝相關酶基因多態性與習慣性流產關系的研究[J].中華圍產醫學雜志,2005,8(3): 160-164.

R714.21

B

1671-8194（2015）36-0191-02