百花牌甘寧片對(duì)化學(xué)性肝損傷輔助保護(hù)作用的研究

郭利軍　殷客卿　陳茜穎　蘇中夏　李君艷

（北京百花蜂業(yè)科技發(fā)展股份公司，北京100176）

百花牌甘寧片對(duì)化學(xué)性肝損傷輔助保護(hù)作用的研究

郭利軍殷客卿陳茜穎蘇中夏李君艷

（北京百花蜂業(yè)科技發(fā)展股份公司，北京100176）

目的：研究百花牌甘寧片對(duì)化學(xué)性肝損傷的輔助保護(hù)作用。方法：采用乙醇復(fù)制小鼠肝損傷模型，測(cè)定肝勻漿內(nèi)的丙二醛（MDA）、還原型谷胱甘肽（GSH）、甘油三酯（TG）含量，并觀察肝臟的病理組織學(xué)病變情況。結(jié)果：高劑量組小鼠肝勻漿中的MDA、還原型GSH、TG均低于模型組，肝細(xì)胞脂肪變性程度輕于對(duì)照組。結(jié)論：百花牌甘寧片對(duì)化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)作用。

百花牌甘寧片；酒精性肝損傷；保護(hù)作用

百花牌甘寧片是以葛根提取物、丹參提取物、五味子提取物、油菜花粉為主要原料制成的具有對(duì)化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)功能的保健食品。

葛根提取物含多種黃酮類成分，可通過清除自由基和抗脂質(zhì)過氧化途徑而降低血糖黏度，促進(jìn)血液循環(huán)，使酒精加速排泄，減少對(duì)肝臟及其他各系統(tǒng)的損害［1-7］；丹參中的丹參酮能消除線粒體脂質(zhì)過氧化過程中產(chǎn)生的脂質(zhì)自由基，抑制活化肝星狀細(xì)胞的增殖，對(duì)多種原因造成的肝損傷有一定的保護(hù)作用［8-11］；五味子提取物具有抗氧化的作用，并能促進(jìn)肝臟蛋白質(zhì)和糖原的合成［12-16］；油菜花粉中含有大量的抗氧化物質(zhì)，從而防止自由基對(duì)肝細(xì)胞膜及亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)過氧化損傷，維持肝細(xì)胞膜的完整性［17-20］。這四種原料功效明確，無(wú)配伍禁忌，可聯(lián)合發(fā)揮輔助保護(hù)化學(xué)性肝損傷的作用。本實(shí)驗(yàn)旨在評(píng)估百花牌甘寧片對(duì)化學(xué)性肝損傷的輔助保護(hù)作用，為其保健功能提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)昆明種雌性小鼠，體重18～22 g，共50只。由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供。實(shí)驗(yàn)室溫度20～26℃，濕度40～70%。按人體推薦日攝入量0.05 g/kg BW，分別擴(kuò)大10、20、30倍（0.5 g/kg BW、1.0 g/kg BW、1.5 g/kg BW）設(shè)置低、中、高三個(gè)劑量組，另設(shè)蒸餾水陰性對(duì)照組及50%乙醇模型對(duì)照組，每組10只。用乙醇（分析純）造成肝損傷模型，乙醇濃度為50%（以蒸餾水稀釋），灌胃量14ml/kg BW。

1.2樣品來(lái)源

百花牌甘寧片為黃色片劑，來(lái)源于北京百花蜂業(yè)科技發(fā)展股份公司。人體推薦日攝入量為3.0 g/60kg BW，即0.05 g/kg BW。試驗(yàn)時(shí)，分別稱取受試物5.0 g、10.0 g、15.0 g用蒸餾水溶解定容至200 ml，濃度分別為0.0225 g/ml、0.05 g/ml、0.0725 g/ml，灌胃前充分混勻。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

按照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003版）的方法進(jìn)行。各劑量組每日經(jīng)口灌胃相應(yīng)濃度的受試物，小鼠灌胃容量均為0.2 ml/10g BW，陰性對(duì)照組和肝損傷模型對(duì)照組給予等量蒸餾水。小鼠每周稱重兩次，按體重變化調(diào)整受試物灌胃量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)將模型對(duì)照組和三個(gè)劑量組一次灌胃給予50%乙醇14 ml/kg BW，陰性對(duì)照組給予等量的蒸餾水。禁食16 h后處死大鼠，快速取出肝臟，取0.5 g肝臟制備肝勻漿后進(jìn)行生化指標(biāo)的檢測(cè)及病理組織學(xué)檢查。

2　檢測(cè)指標(biāo)

2.1體重

小鼠每周稱量體重兩次。

2.2肝勻漿中丙二醛、還原型谷胱甘肽、甘油三酯檢測(cè)

丙二醛（MDA）、還原型谷胱甘肽（GSH）檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所，甘油三酯（TG）采用日立公司生產(chǎn)的7020型全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。

2.3肝臟病理組織學(xué)檢查

2.3.1病理觀察材料

將各組劑量組小鼠肝臟從肝左葉中部做橫切面取材，冰凍切片，蘇丹Ⅲ染色，鏡下觀察脂滴在肝臟中的分布、范圍和面積。

2.3.2病理觀察

從肝臟的一端視野開始記錄細(xì)胞的病理變化，用40倍物鏡連續(xù)觀察整個(gè)組織切片。主要觀察脂滴在肝臟中的分布、范圍和面積。分別記錄每個(gè)視野中的各種病變所占視野的面積，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞的多少和分布的范圍，按0、1、2、3、4分進(jìn)行評(píng)分，累計(jì)所觀察視野的病變總分。

2.3.3評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

肝細(xì)胞脂肪染色共分五級(jí)。

0分：肝細(xì)胞內(nèi)脂滴散在，稀少；

1分：含脂滴的肝細(xì)胞不超過1/4；

2分，含脂滴的肝細(xì)胞不超過1/2；

3分：含脂滴的肝細(xì)胞不超過3/4；

4分：肝組織幾乎被脂滴替代。

2.4結(jié)果判定

按照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003版）對(duì)酒精肝損傷模型的規(guī)定，肝臟MDA、還原型GSH和TG三項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果陽(yáng)性，可判定該受試樣品對(duì)乙醇引起的肝損傷有輔助保護(hù)功能?；蚋闻KMDA、還原型GSH和TG三項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)中任二項(xiàng)陽(yáng)性，且肝臟病理結(jié)果陽(yáng)性，可判斷該受試樣品對(duì)乙醇引起的肝損傷有輔助保護(hù)功能。

3　結(jié)果

3.1對(duì)小鼠體重的影響

從上表可知，模型對(duì)照組、各劑量組小鼠的體重與陰性對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異（P＞0.05），表明受試物對(duì)各劑量組小鼠試驗(yàn)前后的體重?zé)o明顯影響。

表1　百花牌甘寧片對(duì)小鼠體重的影響

3.2對(duì)小鼠肝勻漿中MDA、還原型GSH和TG的影響

按14 ml/kg BW的劑量給予小鼠50%酒精后，與陰性對(duì)照組比較，模型對(duì)照組肝勻漿中MDA值升高、還原型GSH值結(jié)果降低、TG值升高，且均有顯著性差異（P＜0.05），說明本次試驗(yàn)?zāi)Ｐ统闪?。與模型對(duì)照組比較，高劑量組肝勻漿中MDA值降低、還原型GSH值升高、TG值降低，且均有顯著性差異（P＜0.05）。表明MDA和還原型GSH、TG值三項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果為陽(yáng)性。

3.3對(duì)小鼠肝臟病理組織的影響

通過比較模型對(duì)照組與陰性對(duì)照組發(fā)現(xiàn)，肝臟脂肪細(xì)胞變性評(píng)分有顯著性差異（P＜0.01），說明試驗(yàn)成功復(fù)制出了小鼠酒精性肝損傷模型。與模型對(duì)照組比較，高劑量組肝細(xì)胞脂肪變性程度減輕，有顯著性差異（P＜0.05），病理組織學(xué)指標(biāo)可判斷為陽(yáng)性。

4　結(jié)論

表3　百花牌甘寧片對(duì)小鼠肝臟病理組織學(xué)的影響

表2　各組小鼠肝勻漿中MDA、還原型GSH、TG測(cè)定值

肝臟是人體最大、最重要的解毒臟器，它對(duì)來(lái)自體外和機(jī)體自身代謝產(chǎn)生的毒素具有強(qiáng)大的防御解毒功能，但也導(dǎo)致肝臟容易受到毒性物質(zhì)的損害。隨著生活水平的提高，酒精導(dǎo)致的肝病在逐年增加。酒精進(jìn)入肝臟代謝后，會(huì)產(chǎn)生大量自由基造成肝臟的氧化損傷，影響肝細(xì)胞的結(jié)構(gòu)及功能，引起代謝紊亂，不能利用或無(wú)力貯存營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。而空氣污染、生活環(huán)境惡化等現(xiàn)象帶來(lái)了各種有毒有害物質(zhì)，工作繁忙、熬夜等現(xiàn)代生活方式，都會(huì)加重肝臟的負(fù)擔(dān)。

本試驗(yàn)表明，服用一定量的百花牌甘寧片能降低受試小鼠肝勻漿中MDA、TG含量，提高其肝組織中的還原型GSH含量，減輕其肝組織的脂肪變性程度。依據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）中的判定標(biāo)準(zhǔn)，百花牌甘寧片對(duì)小鼠化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)作用。

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Study on protective effects of Baihua Ganning Tablets on chemical liver injury

Guo LijunYin KeqinChen XiyingSu zhongxiaLi Junyan
（Beijing Baihua Bee Industrial Technology&Development Co.,LTD.,Beijing 100176）

［Objective］This study is aimed at investigating the protective effects of Baihua Ganning Tablets on chemical liver injury.［Methods］At first,the alcoholic liver injury model group was induced by ethanol.Then malondialdehyde（MDA）,reduced glutathione（GSH）,and triglyceride（TG）in liver homogenate were measured,continuously pathologic histological changes of liver were observed.［Results］MDA,reduced GSH,TG in liver homogenate of high dose group were lower than alcoholic liver injury model group.Degree of Hepatocytes’fatty degeneration was lesser as well.［Conclusion］Baihua Ganning Tablets have protective effects on alcoholic liver injury.

Baihua Ganning Tablets；alcoholic liver injury；Protective effects