宮頸上皮內瘤變與宮頸鱗癌中NF-кBp50的表達及意義

李國霞　朱煒　陳新妹

宮頸上皮內瘤變與宮頸鱗癌中NF-кBp50的表達及意義

李國霞朱煒陳新妹

目的 觀察宮頸上皮內瘤變（CIN）與宮頸鱗癌中NF-кBp50的表達，探討NF-кBp50與宮頸鱗癌發生的關系。方法 采用免疫組化S-P法檢測宮頸鱗癌38例、CIN 63例及正常宮頸組織20例中NF-кBp50的表達并比較其差異。結果 NF-кBp50在正常宮頸組織、CIN及宮頸鱗癌中的陽性表達率分別為5%、65.07%與86.84%（P＜0.05）； 在CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ中NF-кBp50的陽性表達率分別為30.76%、65.38%與83.33%（P＜0.05）；在Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ期宮頸鱗癌中NF-кBp50的陽性表達率分別為55.56%、95.00%及100.00%（P＜0. 05）；在高、中、低分化的宮頸鱗癌中NF-кBp50的陽性表達率分別為81.82%、84.62%及92.86%（＞0.05）。結論 NF-кBp50的表達上調與CIN及宮頸鱗癌的發生與進展相關。NF-кBp50的陽性表達是宮頸癌變的早期事件，可能作為宮頸鱗癌前病變診斷的生物學標志。

宮頸上皮內瘤變 宮頸鱗癌 核轉錄因子NF-кBp50 免疫組化

宮頸癌是危害婦女健康常見的惡性腫瘤，其發病率日益增高，且發病低齡化趨勢明顯，嚴重危及女性健康。宮頸上皮內瘤變及宮頸鱗癌的發生與高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）感染相關。惡性腫瘤的發生與調控細胞增殖與凋亡的各種細胞因子相關。作者通過觀察細胞增殖與凋亡調控相關因子NF-кBp50在宮頸上皮內瘤變（CIN）與宮頸鱗癌的表達，探討NF-кBp50與宮頸上皮內瘤變與宮頸鱗癌發生的關系。

1　臨床資料

1.1一般資料 2013年6月至2014年11月本院收治的CIN患者63例，CINⅠ13例、CINⅡ26例、CINⅢ24例。年齡36～49歲，平均年齡（43.1±1.20）歲。選取宮頸鱗癌患者38例，根據2009年FIGO分期，Ⅰ期9例、Ⅱ期20例、Ⅲ期9例；其中高分化鱗癌10例，中分化鱗癌13例、低分化鱗癌15例。年齡46～58歲，平均年齡（51. 3±1.04）歲。另選取同期20例因子宮肌瘤行全子宮切除術后病理檢查正常的宮頸組織為對照組，年齡42～48歲，平均年齡（45.6±1.30）歲。

1.2方法 通過手術及宮頸錐切獲取標本，標本獲取后經10%甲醛溶液固定并石蠟包埋，每個石蠟塊切片2張，每張切片厚4μm，一張切片經HE染色后由兩位病理科醫生做病理學診斷；另一張采用鏈菌素親生物素-過氧化物酶法（S- P法）檢測標本中NF-кBp50的表達。兔抗人NF-кBp50單克隆抗體購自福州邁新生物技術有限公司，操作過程嚴格按照說明書進行。用乳腺癌組織作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。

1.3結果判斷 NF-кBp50的陽性表達呈現棕黃色顆粒，定位于細胞漿與細胞核中。通過400倍顯微鏡觀察，每張切片隨機選取10個不同視野，每個視野計數100個細胞，分別記錄陽性細胞的百分比（%）并計算其均值，按染色范圍分4級：切片中陽性細胞＜10%為陰性（-）；10%～49%為弱陽性（+）；50%～89%為陽性（++）；＞90%為強陽性（+++）。本文中（+～+++）列為陽性表達；而（-）為無表達，列為陰性表達。

1.4統計學分析 采用SPSS13.0統計軟件。組間比較采用方差分析，以 P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1NF-кBp50在三組中的陽性表達比較 見表1。

表1　NF-кBp50在三組中的陽性表達比較

2.2NF-кBp50在不同程度宮頸上皮內瘤變中陽性表達比較 見表2。

表2　NF-кBp50在不同宮頸上皮內瘤變中的陽性表達比較

2.3NF-кBp50在不同分期宮頸鱗癌中的陽性表達比較 見表3。

表3　NF-кBp50在不同分期宮頸鱗癌中的陽性表達比較

2.4NF-кBp50在不同分化宮頸鱗癌中的陽性表達比較 見表3。

表3　NF-кBp50在不同分化宮頸鱗癌中的陽性表達比較

3　討論

宮頸上皮內瘤變是宮頸鱗癌發生的前驅，而宮頸鱗癌是目前女性常見的惡性腫瘤，高危型人乳頭病毒（HR-HPV）的持續感染是其發生的主要因素。惡性腫瘤的發生與發展、侵襲與轉移等過程受各種細胞因子的調控以及與細胞因子的異常表達相關。NF-кB是一種與細胞增殖及凋亡密切相關的核轉錄因子，通常情況下NF-кB與其抑制蛋白IкB 結合，以非活性狀態貯存于細胞質中，當受到如病毒感染，炎癥反應等刺激時，NF-кB被激活并轉移至細胞核中，參與調控細胞增殖、分化及細胞凋亡等過程。NF-кB家族有5個成員，根據C末端序列的不同分為兩類：一類為P65（RelA）、RelB和c-Rel；另一類為P50和P52。在NF-кB家族中，其功能活性的主要形式是p65/p50的異二聚體［1］。

本資料顯示，隨宮頸病變的逐漸加重，NF-кBp50的表達逐漸上調，提示NF-кBp50參與CIN及宮頸鱗癌的發生機制。HR-HPV的持續感染與宮頸鱗癌的發生相關，當HR-HPV感染后可導致宮頸局部炎性因子的產生及免疫功能改變，刺激NF-кBp50的異常活化，而活化后的NF-kBp50誘發宮頸細胞周期調控相關蛋白，如細胞周期依賴性激酶（CDK）、細胞周期素D1（Cyclin D1）和c-myc等的表達上調，促進細胞由G1/G0期向S期加速轉化，導致細胞無限制增殖［2，3］。此外，NF-кBp50通過誘導凋亡抑制基因c-IAP-1和 c-IAP-2、TRAF1、TRAF2、Bcl-2、P53等的活化而抑制細胞的凋亡［4］，兩者協同作用促使宮頸細胞異常增殖，最終導致CIN及宮頸鱗癌的形成。Nair［5］等通過對正常宮頸組織、低度與高度鱗狀上皮內瘤變及宮頸鱗癌中NF-кBp50結合能力的研究顯示，在正常宮頸及高度鱗狀上皮內瘤變組織的細胞漿中可見大量p50/p65異二聚體表達，而低度鱗狀上皮瘤變組織中p50/ p65異二聚體則表達在細胞核內，且IкB表達下降，在宮頸鱗癌組織中幾乎見不到IкB的表達，表明NF-кBp50的活化在宮頸鱗癌發生與發展的過程中起著重要的作用。Kim［6］研究認為，用NF-кBp50抑制劑可以有效促進宮頸細胞的凋亡，從另一側面表明NF-kBp50在宮頸鱗癌發生與發展中的作用。

1Maeda S. Omata M. Inflammation and cancer： role of nuclear factorkappaB activation.Cancer Sci， 2008，99（5）：836～842.

2Amiri KI， Richmond A. Role of nuclear factor kappa B in melanoma. Cancer Metastasis Rev， 2005， 24（4）： 301～313.

3Kojima M， Morisaki T ， Sasaki N， et al . In creased nuclear factor-kB activation in human colorectal carcinoma and its correlation with tumor progression. Ant icancer Res， 2004， 24（2）： 675～681.

4Ryan KM， Ernst MK， Rice NR， et al. Role of NF-KappaB in P53-mediated programmed cell death . Nature， 2000， 404（6780）：892～897.

5Nair A， Venkatraman M， et al. NF-kappaB is constitutively activated in high-grade squamous intraepithelial lesions and squamous cell carcinomas of the human uterine cervix. Oncogene， 2003， 22 （1）： 50～58.

6Kim Y H， Chang I，et al. IFN-alpha sensitizes ME-180human cervical cancer cells to TNF alpha-induced apoptosis byinhibiting cytoprotective NF-kappaB activation. FEBS Lett， 2001，495（2）：66～70.

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